《儀器分析》課件-高效液相色法

高效液相色譜法（一）2高效液相色譜儀概述一高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)二高效液相色譜儀使用三高效液相色譜儀數(shù)據(jù)分析四3以氣相色譜為基礎(chǔ)，在經(jīng)典液相色譜（LC）實驗和技術(shù)基礎(chǔ)上建立的一種液相色譜法高效液相色譜法（HPLC）一離心與離心機(jī)的概念4HPLC的特點高壓壓力可達(dá)150～300kg/m2高效柱效高，在一根柱中同時分離成分可達(dá)100種高靈敏度紫外檢測器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測器可達(dá)0.1pg高速流速為0.1～10.0mL/min一離心與離心機(jī)的概念5通常15-30min一個樣，某些樣品5min可完成速度快可選擇固定相和流動相達(dá)到最佳分離效果分辨率高用一根色譜柱可分離不同的化合物反復(fù)使用紫外檢測器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測器可達(dá)0.1pg靈敏度高樣品經(jīng)過色譜柱后不被破壞容易回收與經(jīng)典LC相比HPLC的優(yōu)點6HPLC的適用范圍適合分析高沸點、熱不穩(wěn)定、離子型的樣品應(yīng)用范圍廣泛，適用于醫(yī)藥、環(huán)保、石化、生命科學(xué)、食品工業(yè)、農(nóng)業(yè)等多個領(lǐng)域在已知的化合物中能用液相色譜分析的可占70～80%7一二高效液相色譜儀結(jié)構(gòu)812345高壓輸液系統(tǒng)色譜柱系統(tǒng)（數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)）工作站進(jìn)樣系統(tǒng)

檢測系統(tǒng)工作流程9

高壓輸液系統(tǒng)

高壓輸液系統(tǒng)貯液器、過濾器、高壓輸液泵、梯度淋洗裝置主要部件：工作系統(tǒng)10進(jìn)樣系統(tǒng)流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置色譜柱系統(tǒng)柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑1～6mm，柱長5～40cm檢測器系統(tǒng)紫外檢測器、熒光檢測器、示差折光檢測器、光電二極管陣列檢測器色譜工作站可同時采集一到兩個獨立檢測器信號工作系統(tǒng)11操作步驟沖洗柱子沖洗管路關(guān)主機(jī)關(guān)電腦關(guān)電源準(zhǔn)備

清洗、關(guān)機(jī)開機(jī)、進(jìn)樣流動相標(biāo)液樣液柱子選擇儀器檢查開電腦、主機(jī)、工作站、參數(shù)設(shè)置，方法建立、進(jìn)樣三高效液相色譜儀使用12譜圖判斷對照與樣品的主成分保留時間應(yīng)大致一致保留時間0.95＜T＜1.05拖尾因子兩次譜圖的峰面積應(yīng)相差不超過1%重復(fù)性一般應(yīng)≥1.5分離度應(yīng)≥規(guī)定的理論塔板數(shù)目理論塔板數(shù)四高效液相色譜儀數(shù)據(jù)分析131、定性方法

利用已知標(biāo)準(zhǔn)品定性利用檢測器的選擇性定性利用紫外檢測器全波長掃描功能定性2、定量方法歸一化法外標(biāo)法內(nèi)標(biāo)法結(jié)果分析四高效液相色譜儀數(shù)據(jù)分析高效液相色譜法（二）目錄HPLC的主要類型及選擇01高效液相色譜儀02高效液相色譜的基本理論和實驗技術(shù)032、主要部件3、高效液相色譜儀的使用1、儀器工作流程010203高效液相色譜儀高效液相色譜儀高壓輸液系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)色譜柱系統(tǒng)檢測系統(tǒng)工作站1、儀器工作流程貯液器高壓輸液泵過濾器梯度淋洗裝置作用：提供足夠數(shù)量的符合要求的流動相以完成分析工作要求：①必須有足夠的容積；②脫氣方便；③能耐一定壓力；④所用的材質(zhì)對所使用的溶劑都是惰性的作用：將流動相以穩(wěn)定的流速或壓力輸送到色譜分離系統(tǒng)要求：①泵體材料能耐化學(xué)腐蝕；②能在高壓下連續(xù)工作；③輸出流量穩(wěn)定；④適用于梯度洗脫作用：除雜質(zhì)類型：溶劑過濾器、管道過濾器作用：縮短時間，使各組分完全分離類型：①高壓梯度②低壓梯度（一）高壓輸液系統(tǒng)2、主要部件流路中為高壓力工作狀態(tài)，通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置2、主要部件（二）進(jìn)樣系統(tǒng)色譜柱柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑1～6mm，柱長5～40cm發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效2、主要部件（三）色譜柱系統(tǒng)應(yīng)用最廣，對大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)適于：吸收紫外光的物質(zhì)特點：靈敏度高；線形范圍高紫外檢測器紫外檢測器的重要進(jìn)展；，計算機(jī)快速處理，三維立體譜圖光電二極管陣列檢測器除紫外檢測器之外應(yīng)用最多的檢測器特點：靈敏度低、對溫度敏感、不能用于梯度洗脫；偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種示差折光檢測器適于：只能分析自身發(fā)光的物質(zhì)特點：高靈敏度、高選擇性熒光檢測器2、主要部件（四）檢測器系統(tǒng)記錄數(shù)據(jù)