微生物檢驗第三篇病毒

關于微生物檢驗第三篇病毒第一頁，共七十三頁，2022年，8月28日第一節(jié)病毒的形態(tài)結構體積微小，結構簡單，非細胞型微生物只含一種核酸在活細胞內(nèi)寄生以復制方式進行增殖對抗生素不敏感，干擾素可抑制其增殖；第二頁，共七十三頁，2022年，8月28日葡萄球菌(1000nm）

牛痘病毒300×250nmABCDEFG立克次體450nm衣原體390nmA、大腸桿菌噬菌體

(65×95nm)B、腺病毒

(70nm)D、乙腦病毒

(40nm)E、蛋白分子

(10nm

)F、流感病毒

(100nm)G、煙草花葉病毒C、脊髓灰質(zhì)炎病毒

(30nm)第三頁，共七十三頁，2022年，8月28日

形態(tài)球形桿形子彈狀磚塊狀蝌蚪狀第四頁，共七十三頁，2022年，8月28日病毒體結構模式圖殼粒衣殼核心（核樣物）核衣殼包膜包膜病毒包膜子粒第五頁，共七十三頁，2022年，8月28日吸附穿入脫殼生物合成釋放組裝成熟

病毒沒有正常的細胞結構，缺乏一些與代謝有關的酶，單獨不能復制，必須在活細胞內(nèi)增殖

第二節(jié)病毒的增殖第六頁，共七十三頁，2022年，8月28日裸露病毒：胞飲作用不同病毒，穿入方式不同包膜病毒：包膜與細胞膜融合噬菌體：注入式病毒的配體位點與細胞表面的特異受體結合第七頁，共七十三頁，2022年，8月28日三、脫殼不同病毒脫殼方式不同多數(shù)病毒在宿主細胞溶酶體酶作用下脫殼第八頁，共七十三頁，2022年，8月28日四、生物合成宿主細胞內(nèi)進行的，在病毒基因控制下的病毒核酸和蛋白質(zhì)的合成過程

先合成一些復制酶、抑制蛋白，抑制宿主細胞的正常代謝，使細胞代謝向著有利于病毒合成的方向進行再依據(jù)病毒基因組的指令，進行病毒核酸的復制、轉錄和翻譯第九頁，共七十三頁，2022年，8月28日六、釋放出芽釋放溶細胞釋放組裝：DNA病毒：一般在核內(nèi)組裝RNA病毒：多數(shù)在胞漿內(nèi)組裝第十頁，共七十三頁，2022年，8月28日病毒的致病作用水平傳播（Horizontaltransmission）病毒主要通過皮膚、粘膜（呼吸道、消化道、泌尿生殖道）傳播，在特定條件下直接進入血液（輸血、機械損傷、昆蟲叮咬等）而感染機體。所引起的感染，叫水平感染(Horizontalinfection)

垂直傳播（Verticaltransmission

）

經(jīng)胎盤、產(chǎn)道，病毒直接由親代(母親)傳播給子代(胎兒/新生兒)的傳播方式。導致的感染，稱為垂直感染(Verticalinfection）

第十一頁，共七十三頁，2022年，8月28日病毒感染的類型（一）隱性感染（inapparentorsubclinicalinfection）非顯性感染、亞臨床感染病毒侵入機體內(nèi)，不引起臨床癥狀的感染

形成原因：病毒毒力弱、機體防御較強，病毒不能大量增殖，未造成細胞、組織嚴重損傷；或最終不能侵入靶細胞。意義：獲得免疫力；第十二頁，共七十三頁，2022年，8月28日（二）顯性感染（apparentinfection）病毒感染后，患者出現(xiàn)明顯的臨床癥狀可表現(xiàn)為局部和全身感染；1、急性感染：潛伏期短，發(fā)病急，病程短，恢復后病毒被徹底清除，機體獲得免疫力。如流感，甲肝等。2、持續(xù)性感染（persistentinfection）：病毒在體內(nèi)持續(xù)存在幾個月,幾年,幾十年，甚至終身攜帶，經(jīng)常/反復有病毒排除體外，但缺乏持續(xù)性的臨床表現(xiàn)。第十三頁，共七十三頁，2022年，8月28日病毒能持續(xù)存在于體內(nèi)的原因

病毒Ag弱，不足以引起機體免疫反應；病毒Ag變異，機體免疫系統(tǒng)不能有效識別；病毒基因整合在宿主細胞染色體上，病毒與細胞共存；病毒直接侵犯免疫細胞，造成免疫功能下降;

第十四頁，共七十三頁，2022年，8月28日1、慢性感染（chronicinfection）顯性、隱性感染后，病毒未完全清除，持續(xù)存在血液或組織中，處于持續(xù)增殖狀態(tài)，并不斷排出體外。臨床癥狀可有、可無。病程長（數(shù)月、數(shù)年、數(shù)十年），病毒慢性進行性損傷機體，并能檢出病毒的存在。2、潛伏感染（latentinfection）顯、隱性感染后，病毒存在于一定組織或細胞內(nèi)，不產(chǎn)生感染性病毒體。在某些條件下，病毒基因被激活而急性發(fā)作，增殖出病毒顆粒，出現(xiàn)顯性感染。第十五頁，共七十三頁，2022年，8月28日3、慢發(fā)病毒感染（slowvirusinfection）

又稱遲發(fā)病毒感染（delayinfection）;

病毒感染后，在機體內(nèi)經(jīng)過長期潛伏(數(shù)月、數(shù)年、數(shù)十年)后，出現(xiàn)慢性進行性疾病，最終導致死亡;

常見病毒引起：

HIV→AIDS;

麻疹病毒→亞急性硬化性全腦炎（SSPE）非常見病毒/待定致病因子引起：朊?！虬W疫(scrapie)，庫魯病(Kulu)等

第十六頁，共七十三頁，2022年，8月28日病毒的致病機制（一）病毒對宿主細胞的直接作用1、殺細胞性感染

多見于裸露病毒機制：-阻斷細胞大分子合成；

-破壞細胞溶酶體；

-病毒毒性蛋白的作用；第十七頁，共七十三頁，2022年，8月28日2、細胞膜的改變

細胞融合形成多核巨細胞，細胞功能受損。細胞膜表面出現(xiàn)新抗原病毒增殖，將自身蛋白表達在宿主細胞膜上，改變宿主細胞膜成分第十八頁，共七十三頁，2022年，8月28日3、細胞轉化

某些病毒的DNA和宿主細胞的染色體整合，可使細胞遺傳性狀發(fā)生改變，導致腫瘤的發(fā)生4、形成包涵體病毒感染C后，在光鏡下可見，胞漿或核內(nèi)出現(xiàn)嗜酸或嗜堿性的團塊結構，稱為包涵體。形成機制：

V顆粒的聚集；V增殖的場所；C對V的反應產(chǎn)物；第十九頁，共七十三頁，2022年，8月28日C表面的V-Ag細胞暴露的自身抗原

CELL體液免疫細胞免疫損傷宿主C

↓→

↗腎毛細血管基底膜→蛋白尿,血尿V-Ag+Ab→關節(jié)滑膜→關節(jié)炎

↘肺部→支氣管炎、肺炎

A.B.IC→（二）病毒感染的免疫病理損傷1、體液免疫損傷（II,III型超敏反應）受染細胞表面有V-Ag、IC沉積

→自身免疫第二十頁，共七十三頁，2022年，8月28日2、細胞免疫損傷（IV型超敏反應）3、直接損傷淋巴細胞或淋巴器官

如：HIV直接損傷CD4+T細胞（三）病毒的免疫逃逸通過編碼特異性抑制蛋白或形成合胞體是病毒在細胞間傳播。第二十一頁，共七十三頁，2022年，8月28日第二節(jié)宿主的抗病毒免疫一、非特異性免疫：IFN,NK細胞（一）、干擾素(Interferon,IFN)

1、定義：病毒或干擾素誘生劑刺激機體的多種細胞(巨噬細胞、淋巴細胞、體細胞等)，產(chǎn)生的抑制病毒增殖的糖蛋白。2、分類:

IFN類型 主要來源 特點

I型 αIFN 人WBC

βIFN 人成纖維C

抑制病毒作用I>II

II型γIFN TC抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)作用II>I

第二十二頁，共七十三頁，2022年，8月28日IFN→

細胞基因→抗病毒蛋白↓自身和鄰近細胞 降解病毒mRNA

抑制病毒蛋白合成抑制病毒組裝、釋放↓抑制病毒復制↓中斷病毒感染；限制病毒擴散

3、作用機理不是直接殺滅病毒第二十三頁，共七十三頁，2022年，8月28日4、生物學活性:（1）、廣譜的抗病毒作用；抑制病毒感染、阻止病毒在體內(nèi)擴散、促進痊愈;（2）、調(diào)節(jié)免疫功能；（3）、抑制腫瘤細胞生長；第二十四頁，共七十三頁，2022年，8月28日（二）NK：非特異性殺傷病毒感染的靶細胞

特點：不受MHC限制、不依賴Ab；可通過多種途徑活化；殺傷機制：NK→接觸靶C→釋放穿孔素、TNF→破壞受染C（一）、體液免疫：中和病毒（二）、細胞免疫：主要靠TC釋放穿孔素、顆粒酶，致敏TH1釋放的多種淋巴因子發(fā)揮作用二、特異性免疫第二十五頁，共七十三頁，2022年，8月28日

第三十三章病毒學檢驗基本技術一、標本采集與送檢：原則：盡早采取、部位適宜、冷藏速送：冰塊或干冰、50%的甘油緩沖鹽水、抗生素雙份血清標本：急性期、恢復期雙份血清第二十六頁，共七十三頁，2022年，8月28日二、快速檢查方法光鏡-----包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學技術雜交SouthernblotPCRNorthernblot第二十七頁，共七十三頁，2022年，8月28日三、病毒的分離培養(yǎng)檢驗標本→殺滅雜菌(青鏈霉素)接種病毒分離的一般程序：動物接種→出現(xiàn)病狀雞胚接種→病變或死亡細胞培養(yǎng)→細胞病變

鑒定病毒種型第二十八頁，共七十三頁，2022年，8月28日

第三十四章

呼吸道病毒第二十九頁，共七十三頁，2022年，8月28日1.掌握呼吸道病毒的種類和致病特點；流行性感冒病毒、SARS冠狀病毒、禽流感病毒、副黏病毒科病毒的生物特性和微生物檢驗。2.熟悉流行性感冒病毒、SARS冠狀病毒、禽流感病毒、副粘病毒科病毒的臨床意義。3.了解其他呼吸道病毒的生物特性、臨床意義和微生物檢驗。教學目的與要求第三十頁，共七十三頁，2022年，8月28日

呼吸道病毒是指一大類能侵犯呼吸道引起呼吸道局部病變或僅以呼吸道為入侵門戶，主要引起呼吸道外組織器官病變的病毒。據(jù)統(tǒng)計，90%以上的急性呼吸道感染由該類病毒引起。第三十一頁，共七十三頁，2022年，8月28日呼吸道病毒引起的主要疾病第三十二頁，共七十三頁，2022年，8月28日呼吸道病毒流行性感冒病毒禽流感病毒副粘病毒科其它呼吸道病毒第三十三頁，共七十三頁，2022年，8月28日第一節(jié)正粘病毒科

一、流行性感冒病毒（influenzavirus）（一）分類據(jù)RNP和M蛋白抗原性分：甲、乙、丙三型甲型根據(jù)HA和NA抗原性不同，又分若干亞型

（H1~H16、N1~N9）乙型、丙型至今未發(fā)現(xiàn)亞型第三十四頁，共七十三頁，2022年，8月28日（二）臨床意義“流行性感冒”（Influenza）是英國人Johnhuzxam在1743年創(chuàng)造的字，他依據(jù)意大利語中用來描述這個疾病起源的片語“uninfuenzadifreddo”，即“寒冷的影響”。它主要發(fā)生在深秋、冬天和早春季節(jié)。每年都有數(shù)以百萬計的人群受到感染。第三十五頁，共七十三頁，2022年，8月28日50年代以來共三次

1957年，H2N2，貴州1968年，H3N2，香港1977年，H1N1，遼寧先集體，后散居先城市，后農(nóng)村第三十六頁，共七十三頁，2022年，8月28日傳染源：顯、隱性患者、感染的動物傳播途徑：呼吸道飛沫傳播

V→呼吸道粘膜柱狀上皮C→病變壞死→粘膜充血、水腫→炎癥↓↓ ↓鼻塞、咽喉腫痛、咳嗽、卡他等癥狀 毒性代謝產(chǎn)物（局部癥狀）↓入血 發(fā)熱、頭痛、肌肉酸痛、乏力等（全身癥狀）V不入血，只在呼吸道上皮局部增殖第三十七頁，共七十三頁，2022年，8月28日（三）生物學特性1、形態(tài)結構：流感病毒呈球形或絲狀，球形直徑80-120nm，新分離株絲狀多于球形,有包膜，單鏈分片段的RNA病毒。第三十八頁，共七十三頁，2022年，8月28日

流感病毒結構表面：血凝素(HA)柱狀，為三聚體，基本上以相同的間距覆蓋了病毒的全部表面HA1（吸附）HA2（核衣殼釋放）血凝抑制抗體(保護性抗體)神經(jīng)氨酸酶（NA）四個亞單位組成的四聚體，并不平均分布在病毒表面，而是聚合成群。與病毒釋放有關。內(nèi)部：1、核衣殼病毒分片段的RNA，結合有核蛋白（NP）以及與復制和轉錄有關的三種依賴RNA的RNA多聚酶蛋白。呈螺旋對稱。2、基質(zhì)蛋白（M蛋白）覆蓋在核衣殼外面，M蛋白抗原性穩(wěn)定，也具有型特異性。M1(增加包膜厚度)M2(輔助HA2釋放核衣殼)3、包膜來自宿主細胞的脂質(zhì)雙層膜。第三十九頁，共七十三頁，2022年，8月28日

流感病毒的內(nèi)部結構1、核衣殼病毒分片段的RNA，結合有核蛋白（NP）以及與復制和轉錄有關的三種依賴RNA的RNA多聚酶蛋白。呈螺旋對稱。2、基質(zhì)蛋白（M蛋白）覆蓋在核衣殼外面，M蛋白抗原性穩(wěn)定，也具有型特異性。M1(增加包膜厚度)M2(輔助HA2釋放核衣殼)3、包膜來自宿主細胞的脂質(zhì)雙層膜。第四十頁，共七十三頁，2022年，8月28日NAHA包膜M2M1基質(zhì)蛋白41235678核衣殼RNA核蛋白RNA聚合酶第四十一頁，共七十三頁，2022年，8月28日2、變異

抗原漂移（antigenicdrift）因HA或NA的點突變造成，變異幅度小，屬量變，引起局部中、小型流行。抗原轉換（antigenicshift）因HA或NA的大幅度變異造成，屬質(zhì)變，導致新亞型的出現(xiàn)，引起世界性的暴發(fā)流行。第四十二頁，共七十三頁，2022年，8月28日第四十三頁，共七十三頁，2022年，8月28日3、培養(yǎng)特性雞胚培養(yǎng)：不引起雞胚出現(xiàn)病變，取羊水或尿囊液做血凝試驗細胞培養(yǎng)：紅細胞吸附試驗

4、抵抗力較弱，不耐熱，對干燥、乙醚、甲醛和乳酸等敏感。第四十四頁，共七十三頁，2022年，8月28日微生物檢驗病毒分離培養(yǎng)(金標準)

取患者咽漱液或鼻咽拭，接種雞胚或培養(yǎng)細胞抗原檢測直接從病人呼吸道分泌物、脫落細胞中檢測抗原分型鑒定

核酸雜交、PCR、序列分析血清學診斷

血凝抑制試驗、中和試驗、補體結合試驗、酶聯(lián)免疫測定第四十五頁，共七十三頁，2022年，8月28日二、禽流感病毒（一）臨床意義第四十六頁，共七十三頁，2022年，8月28日截止2013年5月11日，全國內(nèi)地共報告人感染H7N9禽流感確診病例130例，其中死亡人數(shù)33人，康復人數(shù)45人。病例分布于北京（1例）、上海（33例，死亡14例）、江蘇（27例，死亡8例）、浙江（46例，死亡7例）、安徽（4例，死亡2例）、福建（5例）、江西（5例，死亡1例）、山東（2例）、河南（4例，死亡1例）、湖南（2例）10省市的39個地市。另有臺灣1例。尚未發(fā)現(xiàn)人傳人的證據(jù)。H7N9第四十七頁，共七十三頁，2022年，8月28日第四十八頁，共七十三頁，2022年，8月28日（二）生物學特性類似流行性感冒病毒第四十九頁，共七十三頁，2022年，8月28日（三）微生物檢驗標本采集與處理：常規(guī)采集全血、死亡動物腸內(nèi)容物、肛門拭子、氣管、肺、腸、脾、腎、腦、肝和心臟標本。分離培養(yǎng)：雞胚培養(yǎng)法病毒抗原及抗體檢測：熒光免疫技術和酶免疫技術核酸檢測：PCR和RT-PCR第五十頁，共七十三頁，2022年，8月28日第二節(jié)副黏病毒科

特點：①病毒體較大;

②具另一種刺突(F蛋白);

③單鏈RNA,不分節(jié)段。種類：麻疹病毒腮腺炎病毒副流感病毒呼吸道合胞病毒

間質(zhì)性肺炎病毒

第五十一頁，共七十三頁，2022年，8月28日一、麻疹病毒

入侵（CD46為病毒受體）呼吸道上皮細胞內(nèi)增殖入血（第一次病毒血癥）侵入淋巴組織和單核吞噬細胞系統(tǒng)增殖后再次入血（第二次病毒血癥）多種組織、器官受累，表現(xiàn)為細胞融合成多核巨細胞，核內(nèi)形成嗜酸性包涵體等（一）臨床意義第五十二頁，共七十三頁，2022年，8月28日麻疹的臨床表現(xiàn)潛伏期約10~12天體溫略高、咳嗽、流涕、好打噴嚏及淚眼，癥狀持續(xù)3~5天體溫突然升高（達到40~40.5C），口頰粘膜出現(xiàn)柯氏斑，隨后出現(xiàn)紅色班丘疹，從耳部開始，2~3天后遍及全身4天后消退，脫屑第五十三頁，共七十三頁，2022年，8月28日M蛋白螺旋狀核衣殼（RNA和N蛋白）)HN/H/G糖蛋白突起多聚酶脂質(zhì)雙層包膜

F糖蛋白突起（二）生物學特性第五十四頁，共七十三頁，2022年，8月28日（三）微生物學檢驗血象：白細胞總數(shù)減低，淋巴細胞相對增加早期診斷：分泌物沉渣檢多核巨細胞和病毒抗原血清學檢查：特異性抗體病毒分離第五十五頁，共七十三頁，2022年，8月28日二、腮腺炎病毒（一）臨床意義腮腺炎病毒是流行性腮腺炎的病原體，只有一個血清型，人是其唯一宿主病毒通過飛沫或直接接觸傳播咳嗽、噴嚏甚至說話都可傳播病毒學齡兒童為易感人群出現(xiàn)癥狀前2~3天及癥狀消失后9天仍有傳染性第五十六頁，共七十三頁，2022年，8月28日（一）臨床意義潛伏期2~3周在上皮細胞和局部淋巴結內(nèi)增殖入血，病毒隨血侵入腮腺及其它器官主要癥狀為腮腺腫大、睪丸炎、卵巢炎及病毒性腦炎可獲牢固的免疫力第五十七頁，共七十三頁，2022年，8月28日（三）微生物學檢驗分離培養(yǎng)：標本：患者唾液、尿液或腦脊液方法：雞胚羊膜腔、雞胚細胞培養(yǎng)血清學診斷：病毒IgM或>4倍上升的IgG

方法：血凝抑制試驗、ELISA和免疫熒光技術第五十八頁，共七十三頁，2022年，8月28日三、副流感病毒（一）臨床意義

病毒通過人與人直接接觸或飛沫傳播，進入人體于呼吸道上皮細胞中增殖，病毒血癥罕見?？梢饗胗變杭皟和瘒乐睾粑兰膊?。

第五十九頁，共七十三頁，2022年，8月28日（二）生物學性狀病毒呈球形，較大，直徑為125-250nm。刺突：HN蛋白：具有HA和NA作用F蛋白：具有使細胞融合及溶解紅細胞的作用根據(jù)抗原構造不同，副流感病毒分為5型。第六十頁，共七十三頁，2022年，8月28日（三）微生物學檢驗

實驗室診斷可用細胞培養(yǎng)分離鑒定病毒，或用免疫熒光檢查鼻咽脫落細胞中的病毒抗原。

第六十一頁，共七十三頁，2022年，8月28日四、呼吸道合胞病毒

引起嬰幼兒下呼吸道感染的最常見病毒侵入呼吸道后在上皮細胞內(nèi)增殖，病毒不入血病理免疫造成細胞損傷支氣管壞死物與粘液、纖維蛋白粘連在一起，易導致氣道阻塞，可并發(fā)嚴重的細支氣管炎和肺炎包膜刺突G—與受體結合、吸附F—強烈細胞融合作用（故名），形成合胞體及胞漿嗜堿性包涵體第六十二頁，共七十三頁，2022年，8月28日SARS冠狀病毒第三節(jié)冠狀病毒科第六十三頁，共七十三頁，2022年，8月28日（一）臨床意義2002年11月16日中國廣東佛山發(fā)現(xiàn)第一起后來稱為SARS的病例2003年2月18日中國疾病預防控制中心宣布，廣東嚴重呼吸道綜合征的病原基本可以確定為衣原體3月15日世界衛(wèi)生組織將此疾改稱嚴重急性呼吸綜合征（SARS）4月16日世界衛(wèi)生組織在日內(nèi)瓦宣布，病毒已經(jīng)找到，正式命名為SARS病毒。我國內(nèi)地24個省區(qū)市先后發(fā)生非典型肺炎疫情，共波及266個縣和市(區(qū))。截止8月16日10時，我國內(nèi)地累計報告非典型肺炎臨床診斷病例5327例，治愈出院4959例，死亡349例2004年3月發(fā)生的SARS疫情中，北京和安徽兩地共出現(xiàn)9例SARS確診病例，在短短的幾天內(nèi)有862人被醫(yī)學隔離。

第六十四頁，共七十三頁，2022年，8月28日第六十五頁，共七十三頁，2022年，8月28日非典型肺炎癥狀及體征