S007紅細胞ABO血型(正反定型)、RhD鑒定標準化操作規(guī)程-01

1/1S007紅細胞ABO血型(正反定型)、RhD鑒定標準化操作規(guī)程S007紅細胞ABO血型(正反定型)、RhD鑒定標準化操作規(guī)程標準化操作規(guī)程作業(yè)指導書SOPREG007.01贛州市人民醫(yī)院輸血科SOPREG007.01標準化操作規(guī)程作業(yè)指導書SOPREG007.01贛州市人民醫(yī)院輸血科紅細胞ABO血型（正反定型）、RhD鑒定標準化操作規(guī)程一、目的為保證血液及血液成分的紅細胞ABO血型與RhD血型在臨床上同型輸注，確保臨床輸血安全、有效，根據(jù)《臨床輸血技術規(guī)范》第十五條特制定本標準化操作規(guī)程。

二、方法采用微柱凝膠凝集試驗檢測紅細胞ABO血型（正反定型）與RhD血型。

三、原理將人紅細胞血型抗原與相應的抗體發(fā)生的凝集反應在微柱檢測系統(tǒng)中進行。

微柱檢測系統(tǒng)的上端為反應室，將葡萄聚糖凝膠作為凝集反應的介質(zhì)裝入檢測卡微柱凝集檢測管中，卡片上從左向右順序第一支至第三支微管凝膠中均分別充以抗A、抗B、抗D單克隆抗體IgM試劑，檢測人紅細胞ABO、RhD抗原。

第四支至第六支微管中只有凝膠，第四支微管作陰性對照管，第五支和第六支微管作為ABO血型反定型管。

微柱凝集檢測管中的凝膠的間隙起分子篩作用。

凝集反應陽性的紅細胞凝決留在微柱凝集檢測管的上面或中間，反應陰性未凝集的紅細胞將通過凝膠的間隙，沉積在微柱凝集檢測管的底部。

四、適用范圍適用于輸血前患者紅細胞ABO血型（正反定型）確認與RhD血型復查。

五、儀器設備SOPREG007.01標準化操作規(guī)程作業(yè)指導書SOPREG007.01贛州市人民醫(yī)院輸血科普通離心機；血型血清學多用離心機；37℃免疫微柱孵育器；六、試劑1、試劑名稱：

ABO、RhD血型試劑卡（單克隆抗體）；試劑生產(chǎn)廠家：

長春博迅生物技術有限責任公司；批準文號：

國藥準字S20063037；包裝規(guī)格：

聚丙烯卡12檢測人份/盒；貯藏條件；18-25℃避光保存；有效期：

自檢定合格之日起12個月；試劑單克隆抗體效價：

抗A效價128；抗B效價128；抗D效價32；特異性試驗合格。

2、試劑名稱：

人ABO血型反定型用紅細胞試劑盒；試劑生產(chǎn)廠家：

上海血液生物醫(yī)藥有限公司；批準文號：

國藥準字S20060059；包裝規(guī)格：

A1、B、O試劑各1支，10ml/支；貯藏條件；2-8℃保存，不能冰凍；有效期：

自檢定合格之日起2個月；試劑性能：

外觀、溶血率%、特異性、抗原性均符合檢定規(guī)程要求。

七、檢測樣本要求1、標本類型：

靜脈血(EDTA抗凝劑:血液=1:10)。

2、標本采集：

見輸血科標本管理標準化操作規(guī)程。

3、標本儲存和運輸：

新鮮血2～8℃貯存時間不超過72小時。

4、標本拒收狀態(tài)：

標識不準確、標本稀釋、細菌污染，嚴重溶血等不能測定。

八、操作步驟1、將被檢者血樣標本在3400r/min（1200g）離心5分鐘；2、將微柱凝膠試劑卡進行標編號；SOPREG007.01標準化操作規(guī)程作業(yè)指導書SOPREG007.01贛州市人民醫(yī)院輸血科3、待檢者與標準紅細胞稀釋懸液的制備：

采用塑料試管將被檢者紅細胞（10ul壓積紅細胞加入1.2ml生理鹽水中）及標準紅細胞（0.5ml標準紅細胞試劑+3.0ml生理鹽水）配制成0.5～0.8%紅細胞生理鹽水懸液。

4、將待檢者紅細胞稀釋懸液分別加入第一至第四管中，每管50ul；5、將待檢者血清分別加入第五支和第六支微管中，每管50ul；6、將A型和B型稀釋標準紅細胞懸液分別加入第五支和第六支微管中，每管50ul；7、即刻使用血型血清學多用離心機離心5分鐘，2分鐘900rpm，3分鐘1500rpm，取出肉眼判定結果。

8、結果判定：

見表1。

（1）陽性結果：

紅細胞抗原與相應抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復合物浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應。

反應強度：

特異性紅細胞抗原抗體復合物位于膠表面，為強陽性反應；復合物在膠中為弱陽性反應；愈靠近膠底部顆粒愈小，反應愈弱。

（2）陰性結果：

被檢紅細胞抗原無相應的抗體結合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復合物，紅細胞沉于微柱凝膠的底部。

（3）對于紅細胞RhD血型陰性的樣本，應進一步作紅細胞RhD陰性確認試驗。

表1微柱凝膠凝集試驗檢測紅細胞ABO、RhD血型結果鑒定SOPREG007.01標準化操作規(guī)程作業(yè)指導書SOPREG007.01贛州市人民醫(yī)院輸血科血型DA陽B性OABDA陰B性OAB抗A+--++--+抗B抗D陰性對照A1細胞B細胞-+--+++-+--+-++++-------++--+----+++----九、質(zhì)量控制1、對新進批號的試劑應作抗體效價驗定。

2、此檢測項目應參加衛(wèi)生部臨床檢驗中心組織的室間質(zhì)評，且成績合格；3、每次做血型鑒定應做室內(nèi)質(zhì)量控制，且要求在控。

4、嚴格執(zhí)行查對制度，判斷結果后應仔細核對、記錄，避免筆誤等引起的差錯。

5、檢測標本應在2～8℃保存留一周，以備復查。

十、生物參考區(qū)間ABO血型：

A型，B型，O型，AB型；RhD血型：

陽性，陰性。

十一、干擾因素1、冷凝集素：

在惡性腫瘤或病原體感染后有時冷反應性自身抗體可異常增高造成溶血。

2、自身抗體：

紅細胞被自身抗體強烈致敏后將干擾ABO定型，且自身抗體的存在會導致交叉配血不合。

SOPREG007.01標準化操作規(guī)程作業(yè)指導書SOPREG007.01贛州市人民醫(yī)院輸血科3、弱凝集：

當患者紅細胞上抗原異?？赡軙е聹p弱的或缺少的凝集反應，如亞型紅細胞抗原性較弱、新生兒、老年人及少數(shù)惡病質(zhì)患者紅細胞抗原形成不足或敏感性降低。

4、細菌性凝集：

常見有類B凝集，A型或O型病人因大腸桿菌O86感染，從而使紅細胞上獲得類B抗原，能與抗B抗體發(fā)生凝集，表現(xiàn)為B或AB型。

其不受溫度影響，病情好轉類B凝集即消失。

另外紅細胞被細菌或細菌酶污染，紅細胞上的T抗原被激活，與供血者中抗T抗體發(fā)生凝集。

5、混合外觀凝集現(xiàn)象：

主要見于患者有近期輸血史、骨髓移植、胎盤出血、白血病或其他原因如嵌合現(xiàn)象、A3亞型及Tn多凝集反應。

6、不規(guī)則抗體：

可通過測定唾液中的血型物質(zhì)來鑒定ABO血型。

7、亞型：

亞型紅細胞抗原性較弱易產(chǎn)生弱凝集；8、假凝集：

常見于某些肝病、傳染病、多發(fā)性骨髓瘤、霍金氏病、心肌梗塞、感染等?。?、血漿樣本血型鑒定時應注意排除纖維蛋白原和補體的干擾；十二、注意事項1、檢測標本必須正確有標識，其血液量、紅細胞或血漿的質(zhì)量符合實驗要求和受血者當前的免疫學狀態(tài)；2、輸血前檢查要求是輸血前3天內(nèi)的血樣（預防受血者在輸血前的3個月之內(nèi)可能有妊娠或輸血等免疫史而可能產(chǎn)生不規(guī)則抗體）。

3、標本血液離體后要求盡快送檢，至檢測完畢最長不能超過3d，每次檢測后受血者和供血者的血標本應在2℃～8℃保存7天；SOPREG007.01標準化操作規(guī)程作業(yè)指導書SOPREG007.01贛州市人民醫(yī)院輸血科4、每批次試劑均應進行效價測定，試劑使用前應仔細檢查試劑的貯存條件是否符合要求、是否變質(zhì)失效；5、注意離心力、溫度紅細胞濃度及抗原抗體的比例對試驗結果的影響；6、患者使用的藥物影響的處理：

如果使用右旋糖酐、PVP等治療，應注意將紅細胞洗滌；如果受者使用肝素治療，則應用硫酸魚精蛋白對抗，使樣本凝結；7、疑存在冷凝集素的病人標本的血型鑒定時應用37℃生理鹽水洗滌3次再測定,并放37℃免疫微柱孵育器10分鐘后觀察結果。

8、疑存在自身抗體的病人標本的正定型血型鑒定時應用37℃～45℃生理鹽水洗滌紅細胞三次或者用放散后的紅細胞（放散方法需不破壞紅細胞結構）；9、疑為亞型應通過亞型定型試劑來具體定型。

鑒定血型時要注意正反定型的結合，加用抗H和抗A、B型標準血清、A2紅細胞等檢查唾液中的血型物質(zhì)，必要時作吸收放散試驗以確定。

若血清中存在不規(guī)則抗體可在反定型用O細胞加以鑒定，有些亞型因為抗原的某些位點缺失，也會產(chǎn)生相對于缺失抗原位點的抗體，這些抗體的產(chǎn)生有助于亞型的判定。

10、疑為紅細胞被細菌或細菌酶污染產(chǎn)生的假凝集可臵37℃免疫微柱孵育器10分鐘后觀察結果，此種凝集在4℃和37℃之間隨著溫度的升高凝集程度逐漸減弱，在37℃時最弱或消失。

11、出現(xiàn)混合外觀凝集的情況時一般要核對標本，必要時可重新抽取SOPREG007.01標準化操作規(guī)程作業(yè)指導書SOPREG007.01贛州市人民醫(yī)院輸血科血樣；12、紅細胞出現(xiàn)弱凝集、假凝集應進行紅細胞形態(tài)顯微鏡鏡檢，假凝集用生理鹽水稀釋或洗滌紅細胞可使凝集消失。

13、對于初篩為D陰性的供血者，要分別用不同批次的IgG抗D試劑間接抗人球法進行Rh陰性確認，供血者弱D型血作為D陽性血發(fā)放。

14、受血者一般只做IgM抗D試驗，若為陰性應輸注D陰性血