qb醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)

生物安全與防護(hù)微生物室邱斌BIOHAZARD生物危害標(biāo)識嚴(yán)重生物安全事故案例2003年9月新加坡實(shí)驗(yàn)室人員感染SARS病毒2003年9月臺灣實(shí)驗(yàn)室人員感染SARS病毒2004年4月我國國家CDC的SARS實(shí)驗(yàn)室研究生感染SARS病毒并傳染給別人生物安全防范處理微生物及其毒素對人體危害的綜合性措施危害的來源：

生物實(shí)驗(yàn)室生物恐怖活動實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作人員所處理的實(shí)驗(yàn)對象含有致病的微生物及其毒素時(shí)，通過在實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)建造、使用個(gè)體防護(hù)裝置、嚴(yán)格遵從標(biāo)準(zhǔn)化的工作及操作程序和規(guī)程等方面采取綜合措施，確保實(shí)驗(yàn)室工作人員不受實(shí)驗(yàn)對象侵染，確保周圍環(huán)境不受其污染生物安全的內(nèi)容生物危險(xiǎn)度的分級生物安全分級生物安全實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室設(shè)備生物安全管理和操作技術(shù)個(gè)人生物安全防護(hù)裝備衛(wèi)生保健和醫(yī)學(xué)監(jiān)測生物危險(xiǎn)（risk）的分級I級：個(gè)體和群體低危險(xiǎn)II級：中等個(gè)體危險(xiǎn)，有限群體危險(xiǎn)III級：高個(gè)體危險(xiǎn)，低群體危險(xiǎn)IV級：高度的個(gè)體和群體危險(xiǎn)我國對病原微生物的分類第一類：能夠引起人類或者動物非常嚴(yán)重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物第二類：能夠引起人類或者動物嚴(yán)重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物第三類：能夠引起人類或者動物疾?。徊粯?gòu)成嚴(yán)重危害，傳播風(fēng)險(xiǎn)有限；具備有效治療和預(yù)防措施第四類：通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物第一類和第二類病原微生物統(tǒng)稱為高致病性病原微生物當(dāng)實(shí)驗(yàn)室使用傳染性或有潛在傳染性材料前，必須進(jìn)行微生物危害評估。應(yīng)依據(jù)傳染性微生物致病能力的程度、傳播途徑、穩(wěn)定性、感染劑量、操作時(shí)的濃度和規(guī)模、實(shí)驗(yàn)對象的來源、是否有動物實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、是否有有效的預(yù)防和治療方法等諸因素進(jìn)行微生物危害評估通過微生物危害評估確定對象微生物應(yīng)在哪一級的生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行操作根據(jù)危害評估結(jié)果，制定相應(yīng)的操作規(guī)程、實(shí)驗(yàn)室管理制度和緊急事故處理辦法，形成書面文件并嚴(yán)格遵守執(zhí)行病原微生物評估報(bào)告.doc微生物危害評估實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)的基本原則實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)的內(nèi)容包括安全設(shè)備、個(gè)體防護(hù)裝置和措施（一級屏障）；實(shí)驗(yàn)室的特殊設(shè)計(jì)和建設(shè)（分區(qū)、單向氣流）要求（二級屏障）；嚴(yán)格的管理制度和標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序及規(guī)程（三級屏障）應(yīng)將每一特定實(shí)驗(yàn)室從立項(xiàng)、建設(shè)到使用維護(hù)的全過程中有關(guān)生物安全防護(hù)綜合措施的內(nèi)容編入各實(shí)驗(yàn)室的生物安全手冊中。必須設(shè)有專職的生物安全負(fù)責(zé)人生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室根據(jù)不同的微生物和防護(hù)要求分為四個(gè)生物安全防護(hù)級別安全設(shè)備和個(gè)體防護(hù)是確保實(shí)驗(yàn)室工作人員不與致病微生物及其毒素直接接觸的一級屏障。生物安全柜是最重要的安全設(shè)備，形成最主要的防護(hù)屏障。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)按要求分別配備Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級生物安全柜。所有可能使致病微生物及其毒素濺出或產(chǎn)生氣溶膠的操作，除實(shí)際上不可實(shí)施外，都必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行不得用超凈工作臺代替生物安全柜安全設(shè)備和個(gè)體防護(hù)（一級屏障）必要時(shí)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備其它安全設(shè)備，如設(shè)置配有排風(fēng)凈化裝置的排氣罩等，或采用其它不使致病微生物逸出確保安全的設(shè)備實(shí)驗(yàn)室所配備的離心機(jī)應(yīng)在生物安全柜或其它安全設(shè)備中使用，否則必須使用安全密封的專用離心頭（杯）必須給實(shí)驗(yàn)室工作人員配備必要的個(gè)體防護(hù)用品，如個(gè)人防護(hù)服、防毒面具、安全眼鏡或眼罩生物安全柜（biosafetycabinet）是處理危險(xiǎn)性微生物時(shí)所用的箱型空氣凈化安全裝置生物安全柜I級生物安全柜

（classIbiosafetycabinet）

至少裝置一個(gè)高效空氣過濾器對排氣進(jìn)行凈化，外部空氣由操作窗吸進(jìn)，而不可能由操作窗口逸出；100%由密接排氣導(dǎo)管排到室外（類似于通風(fēng)廚）

工作狀態(tài)時(shí)保證工作人員不受侵害，但不保證實(shí)驗(yàn)對象不受污染。

現(xiàn)已很少使用

至少裝置一個(gè)高效空氣過濾器對排氣進(jìn)行凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣。工作時(shí)柜正面玻璃推拉窗打開一半，上部為觀察窗，下部為操作窗口。外部空氣由操作窗吸進(jìn)，而不可能由操作窗口逸出

工作狀態(tài)下遵守操作規(guī)程時(shí)既保證工作人員不受侵害，又保證實(shí)驗(yàn)對象及環(huán)境不受污染Ⅱ級生物安全柜

（classⅡbiosafetycabinet）

II級生物安全柜根據(jù)結(jié)構(gòu)以及氣流分配不同主要是外排氣流不同分為：

A1型:（0.38m/s，30%排在室內(nèi)）

A2型:（0.5m/s，30%外排，原B3型）

B1型:（0.5m/s，

70%接管道外排）

B2型:

（0.5m/s，100%接管道外排）Ⅲ級生物安全柜

（classⅢbiosafetycabinet）至少裝置一個(gè)高效空氣過濾器對排氣進(jìn)行凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣。正面上部為觀察窗，下部手套箱式操作口箱內(nèi)對外界保持負(fù)壓可確保人體與柜內(nèi)物品完全隔絕

全封閉的、氣密結(jié)構(gòu)的通風(fēng)柜通過與柜體聯(lián)結(jié)的橡膠手套進(jìn)行操作；柜內(nèi)保持至少120Pa的負(fù)壓(0.50wg)；供氣通過HEPA抽入內(nèi)；外排的氣流經(jīng)過雙層HEPA過濾或經(jīng)HEPA后再經(jīng)燃燒處理。隔離器IIIIII高效空氣過濾工作人員安全無渦流單向流空氣實(shí)驗(yàn)對象不受污染手套箱式操作口I級有是否否否II級有是是是否III級有是是是是個(gè)人生物安全防護(hù)裝備實(shí)驗(yàn)室防護(hù)服面部防護(hù)手套呼吸防護(hù)實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學(xué)的普通微生物實(shí)驗(yàn)室等。包含微生物舉例

大腸桿菌格魯伯耐格里原蟲感染性犬肝炎病毒枯草桿菌一級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)洗手池（靠近出口處）實(shí)驗(yàn)室圍護(hù)結(jié)構(gòu)內(nèi)表面應(yīng)易于清潔。地面應(yīng)防滑、無縫隙，不得鋪設(shè)地毯實(shí)驗(yàn)室中的家具應(yīng)牢固。應(yīng)有專門放置生物廢棄物容器的臺（架）實(shí)驗(yàn)臺表面應(yīng)不透水，耐腐蝕、耐熱實(shí)驗(yàn)室如有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗一級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)及建造

工作過程中禁止非工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室。接觸微生物或含有微生物的物品后，脫掉手套后和離開實(shí)驗(yàn)室前要洗手禁止在工作區(qū)飲食、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及存儲食物一級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)微生物操作規(guī)程

使用機(jī)械移液器吸取液體，禁止口吸制定尖銳器具的安全操作規(guī)程按實(shí)驗(yàn)室安全規(guī)程操作，降低濺出和氣溶膠的產(chǎn)生每天至少消毒一次工作臺面，活性物質(zhì)濺出要隨時(shí)消毒所有培養(yǎng)物、廢棄物在運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室前須進(jìn)行滅活（如高壓）；需運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室滅活的物品須放在專用密閉容器內(nèi)一級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室

安全設(shè)施和個(gè)體防護(hù)一般無須使用生物安全柜等專用安全設(shè)備工作人員在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿工作服，帶防護(hù)眼鏡工作人員手上有皮膚破損或皮疹時(shí)應(yīng)戴手套實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物包含微生物舉例

麻疹病毒沙門氏菌乙型肝炎病毒HIV血清學(xué)檢測衣原體志賀氏菌二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)和建造的特殊要求

消毒設(shè)施（高壓滅菌鍋、化學(xué)消毒裝置等）洗眼裝置可自動關(guān)閉的門鎖門口有發(fā)光指示裝置換氣裝置（3-4次/小時(shí)）滿足一級實(shí)驗(yàn)室(標(biāo)準(zhǔn)微生物操作規(guī)程)各款要求，在此基礎(chǔ)上特別注意：制定出入制度實(shí)驗(yàn)室人口貼上生物危險(xiǎn)標(biāo)志制定實(shí)驗(yàn)室特定的生物安全操作規(guī)則每年一次最新培訓(xùn)制度二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室特殊微生物操作規(guī)程使用塑料器材代替玻璃器材禁止用手處理破碎的玻璃器具培養(yǎng)基、組織、體液及其它具有潛在危險(xiǎn)性的廢棄物須放在防漏的容器中儲存、運(yùn)輸及消毒、滅菌用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手直接從注射器取下。用過的針頭必須直接放入防穿透的容器中。非一次性利器必須放入厚壁容器中并運(yùn)送到特定區(qū)域消毒，最好進(jìn)行高壓消毒工作人員應(yīng)接受必要的免疫接種和檢測(如乙型肝炎疫苗，卡介苗等)必要時(shí)收集從事危險(xiǎn)性工作人員的本底血清嚴(yán)格執(zhí)行實(shí)驗(yàn)室工作人員年度采血檢測HIV抗體和備案制度。每半年進(jìn)行一次HIV抗體檢測，并保留樣品對從事艾滋病實(shí)驗(yàn)室工作的人員，因工作中意外事故造成HIV職業(yè)暴露者，所在單位應(yīng)負(fù)責(zé)解決抗病毒及其它相應(yīng)治療的醫(yī)療費(fèi)用實(shí)驗(yàn)設(shè)備在運(yùn)出修理或維護(hù)前必須進(jìn)行消毒人員暴露于感染性物質(zhì)時(shí)，及時(shí)向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人匯報(bào)，并記錄事故經(jīng)過和處理方案禁止將無關(guān)動物帶入實(shí)驗(yàn)室處理以下致病微生物時(shí)應(yīng)在生物安全柜(Ⅱ級)中進(jìn)行，包括:

高濃度大容量有噴濺可能性上述材料的離心操作如使用密封的離心機(jī)轉(zhuǎn)子或安全離心杯，且只在生物安全柜中開閉，可在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行Ⅱ級生物安全柜必須每年進(jìn)行一次年度現(xiàn)場檢測二級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室安全設(shè)施和個(gè)體防護(hù)當(dāng)微生物的操作不可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行時(shí)，須使用面部保護(hù)裝置應(yīng)有相應(yīng)的SOP在實(shí)驗(yàn)室中應(yīng)穿著工作服或罩衫等防護(hù)服，不得穿著外出。用過的工作服應(yīng)先在實(shí)驗(yàn)室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄當(dāng)手可能接觸感染材料、污染的設(shè)備時(shí)應(yīng)戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或?yàn)R出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開實(shí)驗(yàn)室，工作完全結(jié)束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用下列操作必須在P2實(shí)驗(yàn)室或全排式生物安全柜中進(jìn)行l(wèi)、含漱液、血清和血液等樣品的診斷檢測2、溶解、固定或用其他方法處理滅活的病毒和(或)無傳染性的病毒基因片段3、常規(guī)的細(xì)菌和毒素檢查4、可能產(chǎn)生氣溶膠的樣品處理5、臨床樣品的包裝、分裝6、離心管和離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的封閉和開啟實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴(yán)重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素。通常已有預(yù)防的疫苗包含微生物舉例

結(jié)核分枝桿菌牛分枝桿菌鼠疫桿菌炭疽桿菌Q熱病原體HIV(血清學(xué)檢測除外)澳大利亞立克次氏體加拿大立克次氏體

三級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室下列操作必須在P3實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行l(wèi)、用細(xì)胞培養(yǎng)的方法分離病毒2、收集或濃縮病毒或其培養(yǎng)產(chǎn)物3、用活病毒或病毒的全基因接種動物4、咽拭子樣品的診斷檢測P3實(shí)驗(yàn)室示意圖實(shí)驗(yàn)室結(jié)構(gòu)和設(shè)施、安全操作規(guī)程、安全設(shè)備適用于對人體具有高度的危險(xiǎn)性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素與上述情況類似的不明微生物，也必須在四級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，帶有充分?jǐn)?shù)據(jù)后再決定此種微生物或毒素應(yīng)在四級還是在較低級別的實(shí)驗(yàn)室中處理包含微生物舉例

黃病毒埃博拉病毒中歐蜱傳腦炎病毒

四級生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室美國國立衛(wèi)生研究所美國疾病控制中心病源操作一級屏障二級屏障P1BSL—1不會經(jīng)常引發(fā)健康成人疾病標(biāo)準(zhǔn)的微生物操作不要求開放實(shí)驗(yàn)臺、洗手池P2BSL—2人類病源菌，因皮膚傷口、吸入、黏膜曝露而發(fā)生危險(xiǎn)BSL—1操作外加：1、限制進(jìn)入2、有生物危險(xiǎn)警告標(biāo)志3、“銳器”安全措施4、生物安全手冊，其中規(guī)定廢物消毒和醫(yī)療觀察1級、2級生物安全柜實(shí)驗(yàn)服、手套、若需要?jiǎng)t采取面部保護(hù)措施BSL-1外加：高壓滅菌鍋P3BSL—3內(nèi)源性和外源性病源，可通過氣溶膠傳播，能導(dǎo)致嚴(yán)重后果或生命危險(xiǎn)BSL-3BSL-2操作外加：1、控制進(jìn)入2、所有廢物消毒3、洗滌前，實(shí)驗(yàn)服消毒4、有基礎(chǔ)血清1級、2級生物安全柜保護(hù)性實(shí)驗(yàn)服、手套、若需要?jiǎng)t采取呼吸保護(hù)措施BSL-2外加：1、和進(jìn)入走廊隔開2、雙門進(jìn)入，門自動關(guān)閉3、排出的空氣不循環(huán)4、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)負(fù)壓P4BSL—4對生命有高度危險(xiǎn)的危險(xiǎn)性病源或外源性病源：致命、通過氣溶膠而致實(shí)驗(yàn)室感染：或未知傳播風(fēng)險(xiǎn)的有關(guān)病源BSL3操作外加：1、進(jìn)入前換衣服2、出實(shí)驗(yàn)室前淋浴3、帶出設(shè)施的所有材料消毒3級生物安全柜或1級、2級生物安全柜加全身的、供應(yīng)空氣的正壓防護(hù)服BSL3外加：1、單獨(dú)建筑或隔離區(qū)域2、有供氣系統(tǒng)、排氣系統(tǒng)、真空系統(tǒng)、消毒系統(tǒng)3、其他有關(guān)要實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)職業(yè)暴露是指實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)護(hù)、預(yù)防保健人員以及有關(guān)的監(jiān)管工作人員，在從事艾滋病防治工作及相關(guān)工作的過程中意外被艾滋病毒感染者或艾滋病患者的血液、體液污染了破損的皮膚或非胃腸道粘膜，或被含有艾滋病病毒的血液、體液污染了的針頭及其它銳器刺破皮膚，而具有被艾滋病病毒感染的可能性的情況實(shí)驗(yàn)室生物安全事故處理

（以HIV為例）皮膚針刺傷或切割傷：立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷出的血液，用70%乙醇或其它消毒劑消毒傷口皮膚污染：用水和肥皂沖洗污染部位，并用適當(dāng)?shù)南緞┙?，?0%乙醇或其它皮膚消毒劑緊急處理措施粘膜污染：用大量流水或生理鹽水徹底沖洗污染部位衣物污染：盡快脫掉污染的衣物，進(jìn)行消毒處理污染物潑濺：發(fā)生小范圍污染物潑濺事故時(shí)，應(yīng)立即進(jìn)行消毒處理；發(fā)生大范圍污染物潑濺事故時(shí)，應(yīng)立即通知實(shí)驗(yàn)室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負(fù)責(zé)人到達(dá)事故現(xiàn)場查清情況，確定消毒的程序標(biāo)本的棄置(1)超過儲存期限的一般標(biāo)本，應(yīng)放入雙層黃塑料袋；密封塑料袋口，放在醫(yī)療廢物存放處，由醫(yī)院轉(zhuǎn)送中心集中焚燒處理；體液標(biāo)本按1L放8片健之素消毒片浸泡過夜后倒入指定下水道，經(jīng)醫(yī)院污水處理系統(tǒng)次統(tǒng)一處理。(2)所有實(shí)驗(yàn)過程中的一次性標(biāo)本容器棄置于雙層黃塑料袋，密封塑料袋口，放在醫(yī)療廢物存放處，由醫(yī)院轉(zhuǎn)送中心集中焚燒處理；非一次性使用的固體廢棄物，包括樣品杯、試管和酶標(biāo)板架等，應(yīng)全部丟入紅色消毒桶，按1L廢液放8片健之素消毒片的比例放入消毒片浸泡過夜后清洗、烘干可繼續(xù)使用。(3)微生物廢棄標(biāo)本及使用過的一次性實(shí)驗(yàn)用品（如培養(yǎng)皿、吸管等）經(jīng)121℃，15磅，20min高壓滅菌后棄置于雙層黃塑料袋，密封塑料袋口，放在醫(yī)療廢物存放處，由醫(yī)院轉(zhuǎn)送中心集中焚燒處理。(4)尖銳器具直接放入在防刺、扎的硬質(zhì)塑料盒(桶)內(nèi)。當(dāng)有玻璃器皿破碎時(shí)，禁止用手處理破碎的玻璃器具，應(yīng)使用掃帚和簸箕清除碎渣，也置于上述防刺、扎的硬質(zhì)塑料盒(桶)內(nèi)。待硬質(zhì)塑料盒(桶)3/4滿后密封，送至套有黃色塑料袋的桶內(nèi)。同其它醫(yī)用垃圾一樣進(jìn)行處理。(5)醫(yī)療廢棄物體積不能超過達(dá)盛裝物容積積的3/4，使用雙層黃塑料袋，密封后用500mg/ml含氯消毒液噴霧消毒，并記錄。實(shí)驗(yàn)室消毒措施（1)每日采用500mg/L有效氯（每500ml水加入1片健之素藥片（250mg有效氯/每片））消毒液對桌面、地面進(jìn)行清潔擦拭，作用10-15min。（2)每天采用試紙監(jiān)測含氯消毒液有效性，并記錄。（3)生物安全柜等金屬臺面消毒可用75％酒精擦拭，并定期使用紫外燈照射。（4)實(shí)驗(yàn)室采血管若需開蓋進(jìn)行操作，管蓋置于2000mg/L（0.2%）有效氯（每500ml水加入4片健之素藥片）浸泡過夜用前清水洗凈、晾干。（5)凡被微生物污染的表面和空氣均可采用紫外線消毒。消毒時(shí)必須使消毒部位充分暴露，消毒區(qū)域距紫外線距離為60-90cm，每天照射一次且照射時(shí)間不少于30min。紫外燈使用后應(yīng)記錄累計(jì)照射時(shí)間，一般累積照射時(shí)間達(dá)到5000h后需更換紫外燈管以保證照射強(qiáng)度。紫外燈管需每周用75%乙醇擦拭其上的灰塵。應(yīng)急應(yīng)急是指在發(fā)生突發(fā)事件時(shí)，能夠在短時(shí)