可見(jiàn)分光光度計(jì)的原理如何 光度計(jì)工作原理

第第頁(yè)可見(jiàn)分光光度計(jì)的原理如何光度計(jì)工作原理可見(jiàn)分光光度計(jì)廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢測(cè)、生物化學(xué)、石油化工、環(huán)保監(jiān)測(cè)、食品生產(chǎn)和質(zhì)量掌控等部門作定性、定量分析，還可作為大、專院校和中學(xué)相關(guān)課程的教學(xué)演示和試驗(yàn)儀器。

分光光度計(jì)是目前化驗(yàn)室中使用比較廣泛的一種分析儀器，其測(cè)定原理是利用物質(zhì)對(duì)光的選擇性吸取特性，以較純的單色光作為入射光，測(cè)定物質(zhì)對(duì)光的吸取，從而確定溶液中物質(zhì)的含量。

其特點(diǎn)是靈敏度高；精準(zhǔn)度高；測(cè)量范圍廣；在確定條件下，可同時(shí)測(cè)定水樣中兩種或兩種以上的物質(zhì)組分含量等。

分光光度計(jì)按其波長(zhǎng)范圍可分為可見(jiàn)分光光度計(jì)（工作范圍360～800nm）、紫外—可見(jiàn)分光光度計(jì)（工作范圍200～1000nm）和紅外分光光度計(jì)（工作范圍760～400000nm）等。

可見(jiàn)分光光度計(jì)的原理是：

當(dāng)一束單色光照射待測(cè)物質(zhì)的溶液時(shí)，當(dāng)某確定頻率（或波長(zhǎng)）的可見(jiàn)光所具有的能量（hf）恰好與待測(cè)物質(zhì)分子中的價(jià)電子的能級(jí)差相適應(yīng)（即ΔE=E2—E1=hf）時(shí)，待測(cè)物將對(duì)該頻率（波長(zhǎng)）的可見(jiàn)光產(chǎn)生選擇性的吸取。

用可見(jiàn)分光光度計(jì)可以測(cè)量和記錄其吸取程度（吸光度）。

由于在確定條件下，吸光度A與待測(cè)物質(zhì)的濃度C及吸取地長(zhǎng)度l的乘積成正比，即A=KCL，所以，在測(cè)得吸光度A后，可接受標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比較法以及標(biāo)準(zhǔn)加入法等方法進(jìn)行定量分析。

可見(jiàn)分光光度計(jì)是一種結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)潔、使用便利的單光束分光光度計(jì)，基于樣品對(duì)單色光的選擇吸取特性可用于對(duì)樣品進(jìn)行定性和定量分析。

其定量分析依據(jù)相對(duì)測(cè)量原理工作，即選定樣品的溶劑（或空氣）作為標(biāo)準(zhǔn)試樣，設(shè)定其透射比為100%，被測(cè)樣品的透射比則相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)試樣（或空氣）而得到；

在確定的濃度范圍，各參量遵奉并服從朗伯—比耳定律：A=lg1/T=KCL

T=I/I0

A:吸光度

T:相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)試樣的透射比

I:光透過(guò)被測(cè)樣品后照射到光電傳感器上的強(qiáng)度I0:光透過(guò)標(biāo)準(zhǔn)試樣后照射到光電傳感器上的強(qiáng)度

K:樣品溶液的比消光系數(shù)

L:樣品溶液在光路中的長(zhǎng)度

C:樣品濃度紫外可見(jiàn)光光度計(jì)的測(cè)試我們?cè)撊绾问褂米贤饪梢?jiàn)光光度計(jì)進(jìn)行雜光散光測(cè)試呢？下面跟我一起來(lái)了解一下吧。

據(jù)了解，有的紫外可見(jiàn)光光度計(jì)只測(cè)試220nm處的雜散光，不測(cè)試340nm處的雜散光，這樣是不正確的，需測(cè)試220nm處雜散光是由于：

①依據(jù)儀器學(xué)理論中的電光源理論，氘燈在220nm處能量很小，即信號(hào)很小，簡(jiǎn)單顯現(xiàn)雜散光；

②依據(jù)儀器學(xué)理論中的光電發(fā)射理論，光電倍增管在220nm處的光譜響應(yīng)（靈敏度）低，簡(jiǎn)單顯現(xiàn)雜散光。

③依據(jù)量子光學(xué)理論，波長(zhǎng)是能量的倒數(shù)，波長(zhǎng)短能量大，簡(jiǎn)單產(chǎn)生雜散光，而220nm處屬于短波部分；

而測(cè)試340nm處雜散光的原因是完全不同的，由于340nm處一般是氘燈換鎢燈和儀器調(diào)換濾光片的地方，此時(shí)最簡(jiǎn)單產(chǎn)生雜散光。所以，對(duì)于紫外可見(jiàn)光光度計(jì)來(lái)講，應(yīng)當(dāng)測(cè)試220nm和340nm兩處的雜散光。

紫外可見(jiàn)光光度計(jì)雜散光測(cè)試步驟：

1、首先將參比液注入配對(duì)石英石吸取池，分別放置在參比池座和試樣池座內(nèi)。再測(cè)定波段掃描基線并使之平滑。

2、將減光片插入試樣光路的濾光片槽內(nèi)，其讀數(shù)即為減光片的衰減值K，然后將減光片插入?yún)⒈裙饴返臑V光片座內(nèi)，

3、將石英吸取池中的蒸餾水依次換成上述截止濾光液，插入試樣試樣池座中，在相應(yīng)的波段內(nèi)掃描、打??；在記錄紙的作標(biāo)上量取測(cè)定波優(yōu)點(diǎn)的透光度，乘以衰減值K，即得各測(cè)定波優(yōu)點(diǎn)的雜散光值。

紫外可見(jiàn)光光度計(jì)儀器設(shè)計(jì)的理論依據(jù)是比耳定律。討論的是物質(zhì)對(duì)光的吸取。比耳定律的真正物理意義可以描述為：當(dāng)一束平行的單色