2024年主管檢驗(yàn)技師考試臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)微生物檢驗(yàn)講義第13章病原性球菌及檢驗(yàn)

病原性球菌及檢查●考點(diǎn)

葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬、奈瑟菌屬

生物學(xué)性狀

微生物學(xué)檢查法

臨床意義（致病性、所致疾?。?/p>

【內(nèi)容講解】

普及共性，單記個(gè)性

生物學(xué)性狀

形態(tài)與構(gòu)造：革蘭染色性，菌體形態(tài)，大小，排列狀態(tài)，特殊構(gòu)造。

培養(yǎng)特性：對(duì)氣體需求，營(yíng)養(yǎng)規(guī)定，最適pH值，最適溫度，在培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)現(xiàn)象。

生化反應(yīng)：特殊生化。

抗原：

分類：

致病性

致病物質(zhì)

所致疾病

微生物學(xué)檢查：針對(duì)生物學(xué)性狀和致病性。

壹、葡萄球菌屬

壹群革蘭陽性球菌，因常堆聚成葡萄串狀而得名。

（壹）生物學(xué)特性

1.形態(tài)與構(gòu)造

G+，球形，0.5～1.5μm，呈葡萄串狀成堆排列（在膿汁、肉浸液培養(yǎng)物中，可見單個(gè)，成對(duì)或短鏈排列），無鞭毛和芽胞，某些菌株能形成莢膜。

2.培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧，營(yíng)養(yǎng)規(guī)定不高，最適pH為7.4，最適溫度為35～37℃。

普皿：圓形、凸起、表面光滑濕潤(rùn)、邊緣整潔并且不透明的菌落，直徑為2～3mm。可產(chǎn)生不壹樣的脂溶性色素，如金黃色、白色、檸檬色色素。

血瓊脂平板：幾乎所有的葡萄球菌可產(chǎn)生α、β、γ和δ溶血素。

液體培養(yǎng)基：生長(zhǎng)迅速呈均勻混濁狀。

3.生化反應(yīng)

觸酶試驗(yàn)（+）；多數(shù)能分解葡萄糖、麥芽糖及蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；分解甘露醇產(chǎn)酸、液化明膠和產(chǎn)生血漿凝固酶（多數(shù)致病性葡萄球菌）。

4.抗原

（1）蛋白抗原：為完全抗原，有種屬特異性，無型特異性。存在于葡萄球菌的表面，結(jié)合在細(xì)胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用，稱葡萄球菌A蛋白（SPA）。

（2）多糖抗原：是半抗原，具有型特異性，有三種：①A型多糖抗原；②B型多糖抗原；③C型多糖抗原。

5.分類

（1）《伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)》

（2）古典分類法

6.抵御力

對(duì)理化原因抵御力強(qiáng)，耐熱，耐干燥，耐高鹽。

是抵御力最強(qiáng)的無芽胞細(xì)菌。

（二）臨床意義

葡萄球菌感染的特點(diǎn)是感染部位組織的化膿、壞死和膿腫形成。

金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌是引起臨床感染最常見的葡萄球菌。

（1）金黃色葡萄球菌

致病物質(zhì)：

血漿凝固酶；葡萄球菌溶血素；殺白細(xì)胞素；腸毒素；表皮溶解毒素；毒性休克綜合征毒素。

（2）表皮葡萄球菌

存在于皮膚的正常棲居菌，為醫(yī)院感染的重要病原菌，它是導(dǎo)致血培養(yǎng)污染的常見細(xì)菌之壹。

（3）腐生葡萄球菌

導(dǎo)致尿路感染的常見病原菌之壹。

（三）微生物學(xué)檢查

標(biāo)本采集（不壹樣疾病采集不壹樣標(biāo)本）：

膿汁、滲出液、傷口分泌物、血液、尿液、糞便、痰液以及脊髓液等。

鑒定試驗(yàn)：

匯報(bào)：檢出“XXX葡萄球菌”

耐藥性檢測(cè)

檢測(cè)耐甲氧西林的金葡菌（MRSA），耐甲氧西林的表葡菌（MRSE），耐萬古霉素的金黃色葡萄球菌（VRSA），耐萬古霉素的表皮葡萄球菌（VRSE）。

（四）治療原則

由于耐藥菌株曰益增多，治療葡萄球菌感染時(shí)，應(yīng)根據(jù)體外藥敏試驗(yàn)選擇抗生素。假如是危、急、重癥感染，應(yīng)首先根據(jù)經(jīng)驗(yàn)選藥，如萬古霉素等，待體外敏感試驗(yàn)成果回報(bào)後，再調(diào)整用藥，針對(duì)治療。

二、鏈球菌屬

（壹）生物學(xué)特性

1.形態(tài)與染色

G+，圓形，0.8～1.0μm，呈鏈狀排列（在液體培養(yǎng)基中易成長(zhǎng)鏈。在膿汁標(biāo)本中為短鏈，成雙或單個(gè)散在）。

無鞭毛、無芽胞，某些菌株在血清肉湯中可有莢膜。

2.培養(yǎng)特性

大多為需氧或兼性厭氧菌，少數(shù)微需氧及專性厭氧。營(yíng)養(yǎng)規(guī)定較高。最適溫度為35～37℃，最適pH為7.4～7.6，在5%CO2環(huán)境下生長(zhǎng)更好。

液體培養(yǎng)基：溶血性菌株呈絮狀或顆粒狀沉淀生長(zhǎng)。上層液體澄清，可有菌膜。不溶血菌株則均勻渾濁生長(zhǎng)。

血瓊脂平板：灰白色、圓形、凸起、細(xì)小菌落，不壹樣溶血環(huán)。

3.生化反應(yīng)

觸酶試驗(yàn)（-），能分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，對(duì)其他糖類的分解因不壹樣菌株而異。

4.分類

（1）根據(jù)溶血能力分類：

甲型（α）溶血性鏈球菌：本菌為條件致病菌。

乙型（β）溶血性鏈球菌：該型細(xì)菌致病性最強(qiáng)，常引起人和動(dòng)物多種疾病。

丙型（γ）鏈球菌：壹般無致病性。

（2）根據(jù)鏈球菌細(xì)胞壁抗原（即C抗原）分類，即常用Lancefield血清分型法：

將鏈球菌分為A、B、C、D……T等18個(gè)群（其中I和J缺），對(duì)人類有致病性的90%屬A群，B、C、D、G群鏈球菌感染較少見。

5.對(duì)理化原因的抵御力

不強(qiáng)，對(duì)多種常用消毒劑敏感，60℃加熱30分鐘即可殺滅。

（二）臨床意義

A群溶血性鏈球菌致病物質(zhì)所致疾病鏈球菌溶血素急性化膿性感染（丹毒、癰、蜂窩組織炎、咽炎、鼻竇炎、中耳炎、腦膜炎、產(chǎn)褥熱）透明質(zhì)酸酶鏈激酶，鏈道酶致熱外毒素猩紅熱M蛋白變態(tài)反應(yīng)性疾?。L(fēng)濕熱，腎小球腎炎）草綠色鏈球菌：屬條件致病菌，常與亞急性心內(nèi)膜炎有關(guān)。

B群鏈球菌：是新生兒肺炎、腦膜炎和敗血癥的病原體。

D群鏈球菌：引起呼吸道和泌尿道感染。

治療原則：

A群鏈球菌感染，青霉素G被列為首選。

B群鏈球菌常常采用青霉素G和壹種氨基糖苷類合用。

（三）微生物學(xué)檢查

標(biāo)本采集（不壹樣疾病采集不壹樣標(biāo)本）：

可采集膿汁、咽拭、痰、血、尿等標(biāo)本。

鑒定試驗(yàn)：

三、肺炎鏈球菌

（壹）生物學(xué)特性

1.形態(tài)與染色

G+，球菌，呈矛尖狀、鈍面成雙排列，有時(shí)呈短鏈狀，0.5～1.25μm，有莢膜（在人或動(dòng)物體內(nèi)易形成），無鞭毛，無芽胞。

2.培養(yǎng)特性

需氧或兼性厭氧；最適的溫度為35～37℃；最適的pH7.6～8.0；營(yíng)養(yǎng)規(guī)定較高。

血瓊脂平板：形成灰色扁平、中心凹陷（因菌落發(fā)酵所致）直徑為0.5～1.0mm的菌落，周圍有草綠色溶血圈。

液體培養(yǎng)基：均勻混濁。但培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)，可因產(chǎn)生自溶，培養(yǎng)液可變澄清，管底沉淀。

3.生化反應(yīng)

多數(shù)菌株分解菊糖、膽汁溶解試驗(yàn)陽性、Optochin敏感試驗(yàn)陽性。（肺炎鏈球菌與草綠色鏈球菌的鑒別）。

（二）臨床意義

致病物質(zhì)：莢膜。

所致疾?。捍笕~性肺炎、支氣管炎?？衫^發(fā)胸膜炎、膿胸，也可

引起中耳炎、鼻竇炎、腦膜炎及敗血癥。

（三）微生物學(xué)檢查

1.標(biāo)本采集

2.試驗(yàn)措施及鑒定

（1）直接涂片檢查：經(jīng)革蘭染色，鏡檢見革蘭陽性矛尖狀雙球菌。

（2）分離培養(yǎng)：

血液、腦脊液需增菌培養(yǎng)，呈均勻混濁，并且有綠色熒光。膿汁或腦脊液沉渣接種血瓊脂，置5%～10%C02環(huán)境中培養(yǎng)。

（3）鑒定試驗(yàn)

1）膽汁溶解試驗(yàn)（+）

2）菊糖發(fā)酵試驗(yàn)（+）

3）0ptochin敏感試驗(yàn)（+）

4）莢膜腫脹試驗(yàn)（+）

5）動(dòng)物試驗(yàn)：小白鼠對(duì)肺炎鏈球菌極為敏感。

6）迅速乳膠凝集試驗(yàn)（+）

四、腸球菌屬

腸球菌屬是腸道的正常棲居菌。

（壹）生物學(xué)形狀

1.形態(tài)和構(gòu)造

G+，成雙或短鏈狀排列的卵圓形球菌，無芽胞，無莢膜，部分腸球菌有稀疏鞭毛。

2.培養(yǎng)特性

營(yíng)養(yǎng)規(guī)定高，需氧及兼性厭氧。在膽汁七葉苷和含6.5%NaCl培養(yǎng)基中可以生長(zhǎng)（此點(diǎn)可與鏈球菌鑒別）。

血平板上重要體現(xiàn)為γ-和α-溶血。

3.生化反應(yīng)

觸酶（-），多數(shù)腸球菌能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺（PYR）。

與同科鏈球菌的明顯區(qū)別：

能在高鹽（6.5%NaCl）、高堿（pH9.6）、40%膽汁培養(yǎng)基上和10℃～45℃環(huán)境下生長(zhǎng)；

對(duì)許多抗菌藥物體現(xiàn)為固有耐藥（如復(fù)方增效磺胺、頭孢菌素、克林霉素和低濃度的氨基糖苷類）。

（二）臨床意義

腸球菌是G+菌中僅次于葡萄球菌屬的重要醫(yī)院感染病原菌。

最常見的為尿路感染，另壹方面為腹部和盆腔等部位的創(chuàng)傷和外科術(shù)後感染。

臨床上分離率最高的是糞腸球菌，另壹方面是屎腸球菌。

腸球菌致病基因：重要有細(xì)胞溶解素激活基因、明膠酶基因、表面蛋白基因、膠原蛋白黏附素基因、匯集物質(zhì)基因和糞腸球菌心內(nèi)膜炎基因等。

（三）微生物學(xué)檢查

采集標(biāo)本：如尿液、膿汁、膽汁、分泌物或血液等。

措施：以直接涂片進(jìn)行初步檢查。分離培養(yǎng)後，挑取可疑菌落，進(jìn)行涂片、染色、鏡檢、觸酶試驗(yàn)、膽汁七葉苷試驗(yàn)和6.5%NaCl耐受試驗(yàn)，可鑒定到屬。

耐藥性檢測(cè)：壹般要測(cè)試對(duì)β-內(nèi)酰胺類尤其是青霉素類（如青霉素、氨芐西林）、萬古霉素和氨基糖苷類（如慶大霉素）的敏感性。同步也應(yīng)對(duì)β-內(nèi)酰胺酶進(jìn)行測(cè)試。

（四）成果評(píng)價(jià)

藥敏成果中必須注明β-內(nèi)酰胺類（如青霉素G、氨芐西林）的敏感性。慶大霉素的耐藥水平（與否為高水平耐藥）萬古霉素的敏感性以及β-內(nèi)酰胺酶測(cè)試成果。

（五）治療原則

壹般采用β-內(nèi)酰胺類和氨基糖苷類聯(lián)合治療，氧氟沙星與氨芐西林有協(xié)同作用。必要時(shí)還要改用萬古霉素或替考拉寧。

五、奈瑟菌屬

G-，雙球菌，無鞭毛，無芽胞，有菌毛。

專性需氧，氧化酶陽性。

本屬重要有9個(gè)種。其中對(duì)人致病的是腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌。

腦膜炎奈瑟菌

簡(jiǎn)稱腦膜炎球菌，是引起流行性腦脊髓膜炎（簡(jiǎn)稱流腦）的病原體。

1.生物學(xué)特性

（1）形態(tài)與染色：

G-，菌體呈腎形，坦面相對(duì)，成對(duì)排列，0.6～1.5μm，在患者的腦脊液中位于中性粒細(xì)胞內(nèi)。

（2）培養(yǎng)特性：

營(yíng)養(yǎng)規(guī)定高，屬苛養(yǎng)菌。最適溫度為35～37℃，最適pH為7.4～7.6。

（3）生化反應(yīng)：

絕大多數(shù)菌株能分解葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣（因淋病奈瑟菌不分解麥芽糖，借此與之鑒別）；

不分解乳糖、甘露醇、半乳糖和果糖，硝酸鹽還原試驗(yàn)陰性不分解尿素、不產(chǎn)生H2S和靛基質(zhì)；

觸酶試驗(yàn)陽性，氧化酶試驗(yàn)陽性。

（4）抗原及分型：

重要有四種抗原：莢膜多糖群特異性抗原、外膜蛋白型特異性抗原、脂多糖抗原及核蛋白抗原。

根據(jù)群特異性莢膜多糖抗原不壹樣，將本菌分為A、B、C、D、X、Y、Z、1916、29E和W135等。

目前，對(duì)人致病的重要是A群，偶見B群、C群及1916群引起散發(fā)病例。

2.臨床意義

致病物質(zhì)：菌毛，莢膜，內(nèi)毒素。

所致疾?。耗X膜炎奈瑟菌是流行性腦脊髓膜炎的病原菌。重要體現(xiàn)發(fā)熱，皮膚瘀斑，腦膜刺激癥狀。存在于攜帶者或病人的鼻咽部，借飛沫經(jīng)空氣傳播，冬末春初為流行高峰。

3.微生物學(xué)檢查

（1）標(biāo)本采集：血液；瘀斑滲出液；腦脊液；鼻咽分泌物。

注：因本菌能產(chǎn)生自溶酶，易自溶，故采集的標(biāo)本不適宜置冰箱，應(yīng)立即送檢。

（2）檢查措施及鑒定：

1）直接涂片檢查：取腦脊液離心後沉淀物涂片或刺破瘀斑血印片，干燥固定後革蘭染色。若發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞內(nèi)（或胞外）革蘭陰性雙球菌，呈腎形成對(duì)排列，可初報(bào)。

2）分離培養(yǎng)：將標(biāo)本增菌培養(yǎng)液直接接種于血瓊脂平板、巧克力瓊脂或EPV瓊脂，置5%～10%C02環(huán)境中，35℃培養(yǎng)18～24h後可見圓形、灰褐色、濕潤(rùn)、光滑、邊緣整潔、直徑1～2mm的小菌落。

3）鑒定：

①細(xì)菌染色形態(tài)：G-，菌體呈腎形，坦面相對(duì)，成對(duì)排列。

②氧化酶試驗(yàn)（+）

③觸酶試驗(yàn)（+）

④分解葡萄糖、麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣

⑤莢膜多糖抗原直接凝集試驗(yàn)

4.治療原則：

青霉素G為首選，三代頭孢對(duì)腦膜炎奈瑟菌也具有很強(qiáng)的抗菌活性。青霉素過敏的病人可考慮選用三代頭孢或氯霉素。

淋病奈瑟菌

簡(jiǎn)稱淋球菌，是淋病的病原體，人類是其唯壹的天然宿主和傳染源。

1.生物學(xué)特性

（1）形態(tài)與染色：

G-，球形或腎形，成對(duì)排列，0.6～0.8μm。在膿汁標(biāo)本中，壹般位于中性粒細(xì)胞內(nèi)，而在慢性淋病時(shí)常位于細(xì)胞外。從患者體內(nèi)新分離的菌株可有莢膜和菌毛，無芽胞和鞭毛。

（2）培養(yǎng)特性：

營(yíng)養(yǎng)規(guī)定較高，國(guó)內(nèi)常用血液瓊脂、巧克力瓊脂、EPV瓊脂等培養(yǎng)基。最適pH為7.5，最適溫度為35～37℃。初次分離時(shí)，須置5%～10%CO2條件下才能生長(zhǎng)發(fā)育。

菌落：表面光滑、凸起、半透明、高亮度、直徑0.5～1.0mm的圓形菌落。

（3）生化反應(yīng)：

對(duì)糖類生化活性最低，本菌可發(fā)酵葡萄糖、產(chǎn)酸，但不酵解麥芽糖（常借此與腦膜炎奈瑟菌相鑒別）。

氧化酶和觸酶試驗(yàn)均陽性。

（4）重要抗原：

菌毛蛋白抗原、脂多糖抗原和外膜蛋白抗原。

（5）抵御力：對(duì)外界抵御力極低。

2.臨床意義：

淋病奈瑟菌是常見的性傳播疾病淋病的病原菌，重要通過性接觸直接侵襲感染泌尿生殖道，口咽部及肛門直腸的黏膜。如單純性淋病、盆腔炎、淋菌型結(jié)膜炎。

3.微生物檢查

（1）標(biāo)本采集：膿性分泌物，尿道拭子，宮頸口分泌物，眼結(jié)膜分泌物，血液。

（2）檢查措施及鑒定

1）直接涂片檢查：搜集標(biāo)本後立即涂片、革蘭染色，鏡檢時(shí)見中性粒細(xì)胞內(nèi)數(shù)對(duì)革蘭陰性雙球菌，可初診。

2）分離培養(yǎng)：細(xì)菌培養(yǎng)仍是目前世界衛(wèi)生組織推薦的篩選淋病患者的唯壹措施。

及時(shí)接種具有兩種以上抗生素（萬古霉素和多黏菌素等）的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上。

3）鑒定：

①生化反應(yīng)：氧化酶陽性，僅分解葡萄糖產(chǎn)酸；不發(fā)酵麥芽糖與蔗糖，30%H2O2試驗(yàn)陽性可與腦膜炎奈瑟菌等相鑒別。

②免疫學(xué)措施：熒光抗體染色法、協(xié)同凝集試驗(yàn)。

③核酸探針雜交法。

4.治療原則

對(duì)青霉素和四環(huán)素耐藥的淋病奈瑟菌越來越多，目前壹線用藥壹般為三代頭孢菌素，氟喹諾酮類、大觀霉素可作為替代藥物。對(duì)氟喹諾酮類、大觀霉素的耐藥也有報(bào)道。

六、卡他布蘭漢菌

G-，雙球菌，約0.6～1.0μm，無芽胞，無鞭毛。

營(yíng)養(yǎng)規(guī)定不高，在壹般培養(yǎng)基上18～20℃即可生長(zhǎng)，借此可與腦膜炎奈瑟菌鑒別。需氧，菌落光滑，直徑約1～3mm，不透明，灰白色，菌落易從培養(yǎng)基上刮下。

氧化酶和觸酶陽性，產(chǎn)DNA酶，大部分菌株還原硝酸鹽和亞硝酸鹽，借此可與奈瑟菌屬相鑒別。

可致中耳炎、鼻竇炎、肺炎。

【例題】SPA是

A.腸桿菌科的細(xì)菌的抗原

B.葡萄球菌細(xì)胞壁的蛋白成分

C.沙門菌的表面抗原

D.核蛋白抗原

E.鏈球菌屬表面抗原[答疑編號(hào)]

【對(duì)的答案】B

【例題】鑒別肺炎鏈球菌與甲型溶血性鏈球菌可用

A.外斐試驗(yàn)

B.肥達(dá)試驗(yàn)

C.乳糖發(fā)酵試驗(yàn)

D.菊糖分解試驗(yàn)

E.血漿凝固酶試驗(yàn)[答疑編號(hào)]

【對(duì)的答案】D

【例題】B群鏈球菌不引起下列哪種疾病

A.敗血癥

B.肺炎

C.腦膜炎

D.咽喉炎

E.風(fēng)濕熱[答疑編號(hào)]

【對(duì)的答案】E

【例題】引起剝脫性皮炎的細(xì)菌是

A.肺炎球菌

B.鏈球菌

C.金黃色葡萄球菌

D.腦膜炎奈瑟菌

E.腸球菌[答疑編號(hào)]

【對(duì)的答案】C

【例題】淋病奈瑟菌與腦膜炎奈瑟菌鑒別用

A.葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)

B.麥芽糖發(fā)酵試驗(yàn)

C.氧化酶試驗(yàn)

D.