TCI 308-2024 飼料級 綠藻多糖

CCSB50/59Feedgrade—Greenalgalpolysacc2024-03-25發(fā)布中國國際科技促進會發(fā)布T/CI308-2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利，本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。本文件由青島海興源生物科技有限公司提出。本文件由中國國際科技促進會歸口。本文件起草單位：青島海興源生物科技有限公司、威海迪普森生物科技有限公司、中國海洋大學、南京益纖生物科技有限公司、青島市畜牧工作站（青島市畜牧獸醫(yī)研究所）、國科聯(lián)盟（北京）國際信息科學研究院。本文件主要起草人：牟海津、姚閩、王建磊、朱琳、郝小靜、陳飛揚、朱常亮、付曉丹、肖夢詩、馬琳。本文件為首次發(fā)布。1T/CI308-2024飼料級綠藻多糖本文件規(guī)定了飼料級綠藻多糖的生產(chǎn)工藝、技術要求、試驗方法、檢驗規(guī)則及標簽、包裝、運輸、貯存。本文件適用于以石莼、滸苔等干（或濕）大型綠藻為原料，經(jīng)粉碎（或破碎）、提取、分離、濃縮（或不濃縮）、添加（或不添加）輔料、滅菌、干燥（或不干燥）等工序制得的飼料用綠藻多糖。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件的必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T601化學試劑標準滴定溶液的制備GB/T602化學試劑雜質測定用標準溶液的制備GB/T603化學試劑試驗方法中所用制劑及制品的制備GB/T5917.1飼料粉碎粒度測定兩層篩篩分法GB/T6435飼料中水分的測定GB/T6438飼料中粗灰分的測定GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB10648飼料標簽GB/T13079飼料中總砷的測定GB/T13080飼料中鉛的測定原子吸收光譜法GB/T13091飼料中沙門氏菌的測定GB/T14699飼料采樣3術語和定義本文件沒有術語和定義。4生產(chǎn)工藝原料→粉碎（或破碎）→提取→分離→濃縮（或不濃縮）→添加（或不添加）輔料→滅菌→干燥（或不干燥）→包裝→檢驗合格→入庫2T/CI308-20245技術要求5.1原料要求應根據(jù)綠藻形態(tài)特征或種質證明等材料確認原料為大型綠藻，原料新鮮無腐敗，無異味，雜質或雜藻的含量不超過干重的20%。5.2輔料要求可添加麥芽糊精、抗結劑、增稠劑作為輔料，所添加輔料應符合國家相關標準的規(guī)定。5.3感官要求感官要求應符合表1的規(guī)定。表1感官要求項目要求固態(tài)綠藻多糖液態(tài)綠藻多糖色澤白色或淺綠色到深綠色白色或淺綠色到深綠色氣味具有綠藻應有的氣味，無異味具有綠藻應有的氣味，無異味狀態(tài)均勻粉末或顆粒，無肉眼可見雜質液態(tài)，無肉眼可見雜質5.4理化指標理化指標應符合表2的規(guī)定。表2理化指標固態(tài)綠藻多糖液態(tài)綠藻多糖總糖含量，%≥30.06.0鼠李糖占總糖比例，%≥25.020.0固形物含量，%≥-粗灰分，%≤50.0水分，%≤20.0-粒度（40目標準篩通過率），%≥99.0-總砷，mg/kg≤3.0鉛，mg/kg≤5.03.03T/CI308-20245.5微生物指標微生物指標應符合表3的規(guī)定。表3微生物指標固態(tài)綠藻多糖液態(tài)綠藻多糖沙門氏菌（/25g）不得檢出不得檢出6試驗方法本文件所用試劑和水，除特殊注明外，均指分析純試劑和符合GB/T6682中規(guī)定的三級水，色譜分析中所用水均為符合GB/T6682中規(guī)定的一級水。溶液按照GB/T603配制。6.1感官要求取適量試樣置于潔凈的白色盤（瓷盤或同類容器）中，觀察色澤、狀態(tài)和雜質，聞其氣6.2理化指標6.2.1總糖含量按照附錄A規(guī)定的方法測定。6.2.2鼠李糖占總糖比例按照附錄B規(guī)定的方法測定。6.2.3固形物含量取5.0-10.0g樣品，置于已烘干至恒重的水分測定儀托盤中，用水分測定儀將水分蒸干，然后將托盤放入100-105℃烘箱中烘干2h，置于干燥器內(nèi)放置30min，稱量，然后，再放入100-105℃烘箱中烘干1h，置于干燥器內(nèi)放置30min，稱量。反復上述操作，直至恒重。按公式（1）計算固形物含量：N=×100%…………………（1）式中：N—樣品中的固形物含量，單位為百分率（%n—固形物和托盤的質量，單位為克（g）；n1—托盤的質量，單位為克（g）；M—樣品取樣質量，單位為克（g）。4T/CI308-20246.2.4粗灰分按GB/T6438規(guī)定的方法測定。6.2.5水分按GB/T6435規(guī)定的方法測定。6.2.6粒度按GB/T5917.1規(guī)定的方法測定。6.2.7總砷按GB/T13079規(guī)定的方法測定。6.2.8鉛按GB/T13080規(guī)定的方法測定。6.3微生物指標按GB/T13091規(guī)定的方法測定。7檢驗規(guī)則7.1批次以同一班次、同一品種、同一工藝的產(chǎn)品為一個批次。7.2采樣按GB/T14699進行。7.3檢驗7.3.1出廠檢驗每批產(chǎn)品應進行出廠檢驗，固態(tài)綠藻多糖的檢驗項目包括感官要求、總糖含量、粗灰分、水分、粒度，液態(tài)綠藻多糖的檢驗項目包括感官要求、總糖含量、粗灰分、固形物含量。檢驗合格后簽發(fā)合格證，產(chǎn)品憑檢驗合格證出廠。7.3.2型式檢驗有下列情況之一時，應進行型式檢驗。檢驗項目為本文件中規(guī)定的全部項目:a)停產(chǎn)6個月以上，恢復生產(chǎn)時；b)原料變化或改變主要生產(chǎn)工藝，可能影響產(chǎn)品質量時；c)國家行政監(jiān)管部門提出進行型式檢驗要求時；d)出廠檢驗與上次型式檢驗有大差異時；e)正常生產(chǎn)時，每年至少兩次的周期性檢驗；f)對質量有爭議，仲裁需要時。5T/CI308-20247.4判定規(guī)則7.4.1所檢項目全部合格，判定為該批次產(chǎn)品合格。7.4.2檢驗項目如出現(xiàn)不合格時，應重新自同批產(chǎn)品中抽取兩倍量樣品進行復檢，以復檢結果為準。若仍有1項不合格，判定該批產(chǎn)品不符合本文件的規(guī)定。8標簽、包裝、運輸、貯存8.1標簽按GB10648執(zhí)行。8.2包裝應采用符合國家相關標準的、無毒的包裝材料。8.3運輸產(chǎn)品在運輸過程中應防止日曬雨淋、包裝破損，嚴禁與有毒、有害物質混裝、混運。8.4貯存產(chǎn)品應貯存于避光、干燥處，避免與有毒、有害、易腐、易污染等物品一起堆放。密閉保存。8.5銷售和召回銷售和召回應符合相關國家標準和有關規(guī)定。6T/CI308-2024附錄A總糖含量的測定A.1原理綠藻多糖在酸性條件下水解，水解物在硫酸的作用下，迅速脫水生成糖醛衍生物，并與苯酚反應生成橙黃色溶液，反應產(chǎn)物在490nm處比色測定，標準曲線法定量。A.2試劑A.2.1除另有說明外，所用試劑均為分析純。A.2.2水為GB/T6682中規(guī)定的三級水。A.2.3濃硫酸：ρ=1.18g/mA.2.4苯酚溶液（50g/L稱取5.0g苯酚，用水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，搖勻，置4℃冰箱中避光貯存。A.2.5葡萄糖標準儲備溶液（200μg/mL）：精密稱取葡萄糖0.02g（精確至0.0001g），用水溶解并定容至100mL容量瓶中，搖勻，置4℃冰箱中避光貯存。A.3儀器A.3.1可見分光光度計。A.3.2分析天平：感量0.0001g。A.3.3渦旋混合器。A.3.4棕色比色管：25mL。A.3.5移液管：1mL、5mL。A.3.6容量瓶：100mL。A.4測定步驟A.4.1標準曲線的制定100μg/mL、200μg/mL的葡萄糖標準溶液。分別移取上述溶液1mL于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，然后立即加入濃硫酸5.0mL（與液面垂直加入，勿接觸試管壁，以便反應液充分混合），靜置10min，渦旋混勻，室溫下靜置20min，在490nm波長處測定吸光度。以葡萄糖質量濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，制定標準曲線。A.4.2測定稱取綠藻多糖樣品0.01g（精確至0.0001g用水溶解并定容至100mL容量瓶中，搖勻。吸取樣品溶液1.0mL按A4.1步驟操作，測定吸光度。7T/CI308-2024A.4.3結果計算樣品中總糖含量按下式（2）計算：X=×100%……………（2）式中：X——樣品中的總糖含量，單位為百分率（%）；m1——從標準曲線上查得樣品溶液中的總糖含量，單位為微克每毫升(μg/mLV——樣品定容的體積，單位為毫升（mL）；m——樣品的質量，單位為克（g10-6——換算系數(shù)。A.5精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算數(shù)平均值的10%。8T/CI308-2024鼠李糖占總糖比例的測定B.1一般規(guī)定B.2原理B.3試劑B.3.1三氟乙酸（C2HF3O2）。B.3.2甲醇（CH3OH）。B.3.3氫氧化鈉（NaOH）。B.3.4鹽酸（HCl）。B.3.5乳糖（C12H22O11）。B.3.61-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（C10H10N2O）。B.3.7二氯甲烷（CH2Cl2）。B.3.8磷酸二氫鉀（KH2PO4）。B.3.9乙腈（C2H3N）：色譜純。B.4酸解處理條件B.4.1酸解稱取綠藻多糖樣品5.0mg于安瓿瓶中，加入2mol/L三氟乙酸2mL，充氮封管，于95℃下酸解6h。反應結束后，旋蒸揮干試劑，再加入3mL甲醇旋蒸揮干，重復多次以盡量去除三氟乙酸殘留，最后將蒸干后的固體用超純水溶解并調(diào)至中性，定容至1mL備用。9T/CI308-2024B.4.2衍生將450μL酸解后樣品與50μL10mg/mL乳糖內(nèi)標混合均勻后，吸取200μL于試管中，加入420μL0.3mol/L氫氧化鈉溶液、400μLPMP衍生試劑，80℃水浴60min。反應結束后，加入420μL0.3mol/L鹽酸溶液中和。B.4.3萃取向衍生后的溶液中加入1mL二氯甲烷，充分振蕩，離心，吸棄下層液體，重復3次以徹底將PMP除凈。最后，取上層溶液過膜后作為待測液。使用高效液相色譜儀進行單糖組成測定。B.5色譜條件a)色譜柱：AgilentEclipseXDB-C18（4.6mm×250mm，5μm）；b)流動相：17%乙腈-83%50mmol/L磷酸鹽緩沖液（pH6.9）；c)流速：1.0mL/min；d)檢測波長：245nm；e)柱溫：25℃;f)進樣量：10μL。B.6分析步驟B.6.1標準溶液的制備B.6.1.1鼠李糖標準溶液（10mg/mL稱取0.01g鼠李糖（精確至0.0001g溶于1mL水中，置于-20℃冰箱中貯存。B.6.1.2鼠李糖標準溶液（1mg/mL將0.1mL鼠李糖標準溶液貯備液（10mg/mL）與0.9mL水混合均勻，置于-20℃冰箱中貯存。B.6.1.3將450μL鼠李糖標準溶液（1mg/mL）與50μL乳糖（10mg/mL）內(nèi)標混合均勻后，吸取200μL于試管中，加入420μL0.3mol/L氫氧化鈉溶液、400μLPMP衍生試劑，80℃水浴60min。反應結束后，加入420μL0.3mol/L鹽酸溶液中和。萃取處理按照步驟B.4.3中的方法進行。B.6.2試樣的測定分別對標準溶液和待測液（B.4.3）進行測定，記錄主峰面積，根據(jù)公式計算出試樣中鼠李糖占總糖的比例。B.7