THBIQA 0009-2024 人體血液中7種多激酶類藥物含量的測定 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

00ICS01.040.11CCSC10/2900

T/HBIQAT/HBIQA0009—20247-DeterminationofsevenpolykinasesinhumanbloodbyHPLC-MS/MS2024-08-15發(fā)布 2024-10-15實(shí)施河北省檢驗(yàn)檢疫學(xué)會(huì) 發(fā)布T/HBIQA0009—2024前 言本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由河北省檢驗(yàn)檢疫學(xué)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：河北省藥品醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院、河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院。本文件主要起草人：李揮、梁艷、宋莉、李怡霖、劉亞楠。T/HBIQA0009T/HBIQA0009—2024PAGEPAGE11人體血液中7種多激酶類藥物含量的測定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法范圍本文件規(guī)定了人體血液中7種多激酶類藥物含量的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。規(guī)范性引用文件（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。原理樣品經(jīng)甲醇提取、無水硫酸鎂鹽析、N-丙基乙二胺（PSA）凈化后，渦旋混勻、冷凍離心、氮吹復(fù)溶，進(jìn)行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定，內(nèi)標(biāo)法定量。試劑和材料試劑和材料除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。甲醇：色譜純。甲酸：色譜純。無水硫酸鎂。N-丙基乙二胺（PSA）。5.1.5 標(biāo)準(zhǔn)品：索拉菲尼（CAS號：475207-59-1），阿西替尼（CAS號：319460-85-0）（CAS（CAS（CAS64735466AS7966716-3AS9283713-2）98%?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制：分別稱取布立尼布、利尼伐尼、索拉菲尼、阿西替尼、戈伐1mg（0.01mg）10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，分別配制成布立尼布、利尼伐尼、索拉菲尼、阿西替尼、戈伐替尼、埃羅替尼、西地尼布的儲(chǔ)備溶液，于-20℃保存至分析。1mg（0.01mg）10mL量瓶中，用甲醇0.1mg/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，于-20℃保存至分析。500μL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（5.1.6）50mL量瓶中，加甲醇稀釋，渦旋混勻，得到1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，于-20℃保存?zhèn)溆?。體積分?jǐn)?shù)1.0mL1L儀器設(shè)備液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源（ESI）。氮吹濃縮儀。渦旋振蕩器。電子分析天平（0.01mg)。高速冷凍離心機(jī)（22000rpm）。試樣制備4℃3000r/min10儲(chǔ)存待測。試驗(yàn)步驟試樣預(yù)處理取200μL血液試樣（7）于5mL離心管中，準(zhǔn)確加入1.0mL甲醇、250mg無水MgSO4、35mgPSA進(jìn)行鹽析和凈化，渦旋混勻30s后，經(jīng)12000r/min，4℃冷凍離心10min。上清液全300μL300.22μm微孔濾膜，待測定。標(biāo)準(zhǔn)曲線7步驟進(jìn)行處理，用得到的空白樣品提取液，將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液5、10、25、50、100、250、400500ng/mL10、20、50、100、200、500、800、1000ng/mL的系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（100ng/mL），濃度由低到高儀器參考條件液相色譜參考條件色譜柱：ZorbaxRRHDStablebondAq（502.1mm，1.8μm），或相當(dāng)者。流動(dòng)相：A0.1%甲酸溶液；B相甲醇。柱溫：40℃。進(jìn)樣體積：5μL。流速：0.3mL/min1：表1梯度洗脫程序表時(shí)間/min流動(dòng)相A/%流動(dòng)相B/50100301003.1703057030質(zhì)譜參考條件電離方式：電噴霧電離，正離子模式。電噴霧電壓：3500V。50Arb。輔助氣流速：10Arb。離子傳輸溫度：325℃。.霧化溫度：350℃。e.碰撞氣：氬氣。其他質(zhì)譜條件見附錄A。測定測定步驟將試樣溶液注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，得到7種多激酶抑制劑的質(zhì)譜響應(yīng)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲7（定性判定在相同條件測定樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液，如果樣品溶液中檢出的色譜峰的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中的某種組分峰的保留時(shí)間一致（變化范圍在±2.5%），并且所選擇的兩對子離子的質(zhì)荷比一致，樣品溶液中定性離子相對豐度與濃度相當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中定性離子的相對豐度進(jìn)行比較時(shí)，2規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在該組分。7種多激酶抑制劑標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的色譜圖參見附錄B。表2定性確定時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度＞50%＞20%~50%＞10%~20%≤10%允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%數(shù)據(jù)計(jì)算血液樣本中各藥物濃度含量為：式中:Xi——試樣中待測組分含量，單位為納克每毫升(ng/mL)；ρi——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的測試液中某種組分的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升(ng/mL)；V——定容體積，單位為毫升(mL)；K——稀釋倍數(shù)；V試樣——試樣體積，單位為毫升(mL)。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。空白試驗(yàn)取空白血樣，按8.1-8.4測定步驟進(jìn)行。定量限和重復(fù)性定量限本方法索拉菲尼、布立尼布、利尼伐尼、阿西替尼、戈伐替尼的定量限為5ng/mL，西地尼布、埃羅替尼的定量限為10ng/mL。重復(fù)性在重復(fù)性實(shí)驗(yàn)條件下獲得兩次獨(dú)立實(shí)驗(yàn)結(jié)果的絕對差值不得超過算數(shù)平均值的15%。附錄A（資料性附錄）質(zhì)譜參數(shù)表A.1目標(biāo)物的質(zhì)譜參數(shù)和參考保留時(shí)間名稱母離子(m/z)子離子(m/z)碎裂電壓(V)碰撞電壓(V)保留時(shí)間(min)索拉菲尼465.1252.0a/270.013633/241.50阿西替尼387.1220.9a/355.97751/201.16多韋替尼393.1334.0a/336.08627/291.11埃羅替尼394.1278.0a/336.010131/241.14西地尼布451.284.0a/112.07345/241.14布立尼布371.2149.0a/331.08733/251.40利尼伐尼376.2207.0a/251.08445/261.34戈伐替尼634.2184.0a/451.07922/291.12a代表定量離子附錄B（資料性附錄）ⅠⅠ