TWFSX 007.8-2024 動(dòng)物法醫(yī)學(xué)司法鑒定 涉案動(dòng)物病理學(xué)檢材的提取、固定、取材及保存規(guī)范鑒定標(biāo)準(zhǔn)

PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANIICS11.220CCSB41團(tuán) 體 標(biāo) 準(zhǔn)T/WFSX007.8一2024動(dòng)物法醫(yī)學(xué)司法鑒定涉案動(dòng)物病理學(xué)檢材的提取、固定、取材及保存規(guī)范鑒定標(biāo)準(zhǔn)forandofand2024-08-發(fā)布 2024-09-04實(shí)施濰 坊 市 獸 醫(yī) 協(xié) 會(huì) 發(fā)T/WFSX007.8一2024T/WFSX007.8一2024PAGE\*ROMANPAGE\*ROMANII目 錄前 言 Ⅲ一、范圍 1二、術(shù)語和定義 1三、病理檢材的提取 11、提取準(zhǔn)備 12、提取時(shí)機(jī) 13、提取方法 2四、病理檢材的固定 31、固定劑選擇 32、固定方法 4五、病理檢材的取材 41、取材準(zhǔn)備 42、取材要求 53、取材方法 5六、病理檢材的保存 51、保存條件 52、保存容器 63、保存期限 6T/WFSX007.8一2024T/WFSX007.8一2024前 言本文件按照按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第一部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》給出的規(guī)則起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)。本文件由濰坊市獸醫(yī)協(xié)會(huì)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)與動(dòng)物司法鑒定委員會(huì)提出。本文件由濰坊市獸醫(yī)協(xié)會(huì)歸口。本文件技術(shù)支持單位：濰坊市市場監(jiān)管發(fā)展服務(wù)中心。本文件起草單位：濰坊市金山獸醫(yī)院有限公司、山東牧院、濰坊市臨朐縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局寺頭畜牧獸醫(yī)站、安丘市石堆鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站、山東駿琳馬術(shù)學(xué)院、濰坊學(xué)院、青島市寶發(fā)動(dòng)物醫(yī)院有限公司、濰坊市獸醫(yī)協(xié)會(huì)動(dòng)物法醫(yī)學(xué)委員會(huì)、青州爰佳寵醫(yī)院、濰坊安寵寵物醫(yī)院、山東晟華檢測技術(shù)有限公司、濰坊市獸醫(yī)協(xié)會(huì)、遼寧國托檢測有限公司、江蘇國托檢測有限公司、濰坊咪果寵物醫(yī)院。本文件主要起草人：王金山、王升寶、劉文學(xué)、唐璐、劉海源、馬廷法、張召彬、玄承燁、姚冬芹、付文卿、范晶晶、張悅、張春光、楊萬郊、郭寶發(fā)、于志輝、丘玉海、囯興偉、殷治玉、孫大海、李智慧、王璐、韓海洋、韓成良、王升鑫、王凱越、管琳、劉秋晨、沙楚、宋蕙男、劉艷、單春喬、翟宏旭、李良佳。本文件為首次發(fā)布。ⅢT/WFSX007.8一2024T/WFSX007.8一2024PAGEPAGE1涉案動(dòng)物病理學(xué)檢材的提取、固定、取材及保存規(guī)范鑒定標(biāo)準(zhǔn)一、范圍本規(guī)范規(guī)定了動(dòng)物學(xué)病理檢材提取、固定、取材及保存的操作流程和技術(shù)要求，適用于動(dòng)物學(xué)研究、教學(xué)、臨床診斷、疫病監(jiān)測及司法鑒定等活動(dòng)中涉及的病理檢材處理。二、術(shù)語和定義病理檢材運(yùn)用適當(dāng)?shù)臈l件和方法對(duì)病理檢材進(jìn)行儲(chǔ)存，以維持其質(zhì)量和特性的過程。三、病理檢材的提取1、提取準(zhǔn)備器械與工具準(zhǔn)備準(zhǔn)備解剖刀、手術(shù)剪、鑷子、止血鉗、注射器、采樣管、無菌棉簽、載玻片、離心管等器械和工具。所有器械和工具使用前應(yīng)進(jìn)行清潔、消毒和滅菌處理，確保無菌狀態(tài)。防護(hù)裝備準(zhǔn)備操作人員應(yīng)穿戴一次性無菌手術(shù)衣、手套、口罩、護(hù)目鏡、帽子等防護(hù)裝備，防止自身感染和檢材污染。記錄用品準(zhǔn)備準(zhǔn)備好記錄表格、標(biāo)簽、記號(hào)筆等，用于記錄檢材的來源、種類、采集時(shí)間、采集部位、采集方法等信息。2、提取時(shí)機(jī)自然死亡的動(dòng)物（6-24實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和研究目的，在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行檢材提取。如果實(shí)驗(yàn)動(dòng)物因疾病需要安樂死，應(yīng)在實(shí)施安樂死后立即進(jìn)行檢材提取，確保檢材的新鮮度和完整性。臨床病例對(duì)于臨床病例，應(yīng)在動(dòng)物接受治療前或治療過程中，根據(jù)疾病的發(fā)展和診斷需要，適時(shí)進(jìn)行檢材提取。對(duì)于需要手術(shù)治療的病例，可在手術(shù)過程中采集病變組織和器官等檢材。3、提取方法組織檢材提取根據(jù)動(dòng)物的種類、體型、病變部位和研究目的，選擇合適的解剖部位和切口位置。在進(jìn)行解剖操作前，應(yīng)對(duì)動(dòng)物體表進(jìn)行消毒處理，防止體表微生物污染檢材。（0.5-1.0cm）1.0cm×1.0cm×0.3cm1.5cm×1.5cm×0.5cm器官檢材提取完整地摘取病變器官或目標(biāo)器官，在摘取過程中應(yīng)注意保護(hù)器官的血管、神經(jīng)和結(jié)締組織，避免損傷和撕裂。去除器官表面的結(jié)締組織、脂肪、筋膜和其他附著物，用生理鹽水輕輕沖洗干凈，去除表面的血液、膿液和污染物。將摘取的器官檢材放入無菌容器或保鮮袋中，做好標(biāo)記和記錄，盡快進(jìn)行固定處理。對(duì)于體腔積液（如胸腔積液、腹腔積液、心包積液等），使用無菌注射器連接適當(dāng)規(guī)格的針頭（如18-22G針頭），在無菌操作條件下進(jìn)行穿刺采集。穿刺部位應(yīng)選擇在積液較多且安全的部位，如胸腔穿刺可選擇在肋間隙、腹腔穿刺可選擇在臍與恥骨聯(lián)合連線中點(diǎn)等部位。在穿刺過程中，應(yīng)緩慢進(jìn)針，避免損傷內(nèi)臟器官和血管。當(dāng)針頭進(jìn)入體腔后，緩慢抽取適量積液（一般為2-10ml，具體抽取量根據(jù)積液量和研究需要確定），注入無菌離心管中。采集完成后，立即將離心管密封，做好標(biāo)記和記錄，盡快進(jìn)行離心處理，收集細(xì)胞沉淀。細(xì)胞涂片采集使用無菌刮片、毛刷或吸管等工具，采集病變部位的細(xì)胞，將細(xì)胞均勻涂抹在載玻片上，制作涂片。涂片的厚度應(yīng)適中，避免過厚或過薄。對(duì)于液體樣本（如血液、腦脊液、尿液等），可采用離心涂片法。將樣本加入離心管中，進(jìn)行離心處理（離心速度和時(shí)間根據(jù)樣本類型和研究需要確定），收集細(xì)胞沉淀，用吸管將細(xì)胞沉淀滴加在載玻片上，制作涂片。血液采集（），（）血液采集完成后，根據(jù)檢測目的和后續(xù)處理方法，將血液收集到抗凝管（如肝素鈉抗凝管、乙二胺四乙酸二鉀抗凝管等）或促凝管中。抗凝管中的血液應(yīng)輕輕顛倒混勻，防止血液凝固；促凝管中的血液應(yīng)靜置一段時(shí)間，待血液凝固后進(jìn)行離心處理，分離血清或血漿。尿液采集對(duì)于麻醉狀態(tài)下的動(dòng)物，可采用輸尿管插管法或膀胱造瘺法采集尿液。輸尿管插管法是將無菌導(dǎo)管插入輸尿管，將尿液引流到收集容器中；膀胱造瘺法是在動(dòng)物的膀胱上進(jìn)行手術(shù)造瘺，將尿液通過造瘺口引出。唾液采集對(duì)于小型動(dòng)物，可使用唾液收集管或吸附棉棒等工具，刺激動(dòng)物口腔分泌唾液，收集唾液樣本。對(duì)于大型動(dòng)物，可使用口腔引流裝置或唾液收集器等工具，收集唾液樣本。四、病理檢材的固定1、固定劑選擇1.110%中性福爾馬林溶液10%中性福爾馬林溶液是一種常用的固定劑，由甲醛、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉和蒸餾水組成，pH值為7.2-7.4。它對(duì)組織和細(xì)胞的結(jié)構(gòu)具有良好的固定作用，適用于大多數(shù)病理檢材的固定。4%多聚甲醛溶液4%多聚甲醛溶液是由多聚甲醛溶解于磷酸鹽緩沖液中配制而成，pH值為7.2-7.4。它對(duì)組織和細(xì)胞的抗原性保存較好，適用于免疫組織化學(xué)、原位雜交等需要檢測抗原和核酸的病理檢材固定。乙醇乙醇是一種常用的有機(jī)溶劑，具有固定和脫水雙重作用。常用的乙醇濃度為70%-95%，適用于細(xì)胞涂片、血液涂片等檢材的固定。其他固定劑根據(jù)特殊的研究目的和檢測要求，還可選擇戊二醛、醋酸、苦味酸等固定劑。2、固定方法2.1組織和器官檢材固定將提取的組織或器官檢材放入裝有固定劑的容器中，固定劑的體積應(yīng)至少為檢材體積的10-20倍，以確保檢材完全浸沒在固定劑中。（0.5cm3）612（0.51.0cm3）1224（1.0cm3）2448在固定過程中，應(yīng)定期輕輕攪動(dòng)固定劑，使檢材與固定劑充分接觸，確保固定均勻。固定完成后，將檢材從固定劑中取出，用流水沖洗30-60分鐘，以去除殘留的固定劑。2.1細(xì)胞檢材固定細(xì)胞涂片固定15-30離心后的細(xì)胞沉淀固定（5-10倍）30-6010%4%心去除固定劑，用磷酸鹽緩沖液或生理鹽水洗滌細(xì)胞沉淀2-3次，以備后續(xù)處理。五、病理檢材的取材1、取材準(zhǔn)備固定后的檢材修整固定后的檢材應(yīng)在取材前進(jìn)行修整，去除多余的固定劑、脂肪、結(jié)締組織和壞死組織等，使檢材表面平整、清潔。取材工具準(zhǔn)備準(zhǔn)備好取材所需的工具，如鋒利的切片刀、剪刀、鑷子、直尺、載玻片、包埋盒等。取材工具應(yīng)保持清潔、鋒利，避免對(duì)檢材造成損傷。取材環(huán)境準(zhǔn)備取材應(yīng)在清潔、通風(fēng)良好的實(shí)驗(yàn)室或?qū)Ｓ萌〔氖疫M(jìn)行，避免環(huán)境污染和交叉污染。取材臺(tái)應(yīng)保持清潔、無菌，定期進(jìn)行消毒處理。2、取材要求取材部位準(zhǔn)確取材部位應(yīng)根據(jù)病變的特點(diǎn)和研究目的進(jìn)行選擇，包括病變中心、病變與正常組織交界部位、遠(yuǎn)離病變的正常組織等。對(duì)于多灶性病變或彌漫性病變，應(yīng)在多個(gè)部位取材，以全面反映病變的情況。取材組織塊大小適中取材組織塊的大小應(yīng)根據(jù)后續(xù)制片和檢測方法確定。一般來說，用于常規(guī)石蠟切片的組織塊大小為0.2cm×0.2cm×0.2cm-0.3cm×0.3cm×0.3cm；用于冰凍切片的組織塊大小為0.5cm×0.5cm×0.3cm-1.0cm×1.0cm×0.5cm；用于電鏡檢查的組織塊大小為1mm3左右。2.3取材數(shù)量足夠根據(jù)研究需要和病變的復(fù)雜性，確定取材的數(shù)量。一般來說，對(duì)于單個(gè)病變部位，應(yīng)至少取材2-3塊組織；對(duì)于多個(gè)病變部位或不同類型的病變，應(yīng)分別取材，確保取材的代表性和完整性。3、取材方法組織取材使用切片刀或剪刀，從固定后的組織或器官中切取所需的組織塊。取材時(shí)應(yīng)注意保持組織的原有結(jié)構(gòu)和方向，避免過度牽拉和擠壓組織。對(duì)于質(zhì)地較硬的組織，可先將組織進(jìn)行軟化處理（如使用蛋白酶消化、酸水解等方法），再進(jìn)行取材。將切取的組織塊放入包埋盒中，做好標(biāo)記和記錄，注明組織的來源、病變類型、取材部位和取材時(shí)間等信息。細(xì)胞取材對(duì)于細(xì)胞涂片，使用鑷子或吸管將涂片從載玻片上取下，放入包埋盒中。對(duì)于離心后的細(xì)胞沉淀，使用吸管或移液器將細(xì)胞沉淀轉(zhuǎn)移到包埋盒中。六、病理檢材的保存保存病理檢材的環(huán)境溫度一般控制在4-8℃，對(duì)于需要長期保存的檢材（如超過1年），可置于-20℃或-80℃的低溫冰箱中。濕度保存環(huán)境的相對(duì)濕度應(yīng)控制在30%-70%，避免檢材受潮、發(fā)霉。光照保存環(huán)境應(yīng)避免陽光直射和強(qiáng)光照射，防止檢材中的生物大分子發(fā)生光氧化和光降解反應(yīng)。2、保存容器組織和器官檢材保存組織和器官檢材可保存在裝有固定劑的密封容器中，如塑料或玻璃標(biāo)本瓶、標(biāo)本罐等。容器應(yīng)具有良好的密封性和耐腐蝕性，防止固定劑