番茄對主要病害抗性鑒定評價技術(shù)規(guī)程 第4部分：番茄抗葉霉病鑒定評價技術(shù)規(guī)程-送審討論稿

1本文件規(guī)定了番茄對葉霉病抗性鑒定評價的規(guī)范性引用文件、術(shù)語和定義、接種體制備、鑒定番本文件適用于所有種類的番茄，包括番茄屬（LycopersiconMiller.）下2個亞群和9個種，以及栽培下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適2通過對植物個體發(fā)病程度（病情級別）數(shù)值的計算獲得的群體發(fā)病程度的數(shù)值化描述形式，是描4接種體制備4.1基本設備無菌室、恒溫箱培箱、恒溫振蕩箱培養(yǎng)、超凈工作臺、高壓滅菌鍋、冰箱、可控溫的溫室（溫度保持在20℃~30℃)、塑料盆、鋁鍋、電爐、培養(yǎng)皿、試管、剪刀、鑷子、廣口瓶、酒精燈、濾紙、4.2接種體分離番茄葉霉病菌以PDA培養(yǎng)基，采用常規(guī)組織分離法，從番茄葉霉病的發(fā)病植株的發(fā)病部位，分離病原物。分離物經(jīng)形態(tài)學和分子生物學鑒定，以及致病性測定，確認為番茄葉霉病菌[Fulviafulva(Cooke)Ciferri]，見附錄B。4.3接種體確定分別選擇分布較廣、致病力較強的番茄葉霉病菌的優(yōu)勢菌株作為人4.4接種體保存4.4.1短期保存將番茄葉霉病菌分別接種于PDA斜面養(yǎng)基上，在22℃~24℃培養(yǎng)15d后，置4℃冰箱中保存。將番茄葉霉病菌分別接種于PDA平板培養(yǎng)基上，并在接種點周圍放置一定數(shù)量的滅菌濾紙片，在22℃~24℃培養(yǎng)15d后，取出濾紙片，經(jīng)真空干燥后于-20℃~-80℃的低溫冰箱中保存。34.5接種體懸浮液制備將保存在PDA培養(yǎng)基上的葉霉病菌，在無菌操作下，移植于PDA平板培養(yǎng)基上，置于22℃~24℃培養(yǎng)15d~20d產(chǎn)孢，再向每個平皿內(nèi)加入無菌蒸餾水至淹沒菌面，用玻棒洗下分生孢子，連續(xù)兩次收5鑒定番茄苗培育將待鑒定番茄的種子經(jīng)5%次氯酸鈉溶液浸種10min，用清水沖洗3次，再用清水浸泡5h后，置于露白發(fā)芽后播植于溫室，采用營養(yǎng)缽盆栽法進行育苗，基質(zhì)應符合NY/T2118的要求。將蔬菜育苗基質(zhì)裝入新的直徑11cm～13cm、高10cm～13cm的塑料營養(yǎng)缽中，至2/3高度，排列整齊，播種前先用自來水澆透育苗基質(zhì)，隨后將已催芽的待鑒定番茄種子播于上述塑料營養(yǎng)缽中，每缽1粒種子，然后用泥炭育苗基質(zhì)覆蓋，以蓋住種子為宜。重復3次，每重復30缽，共抗病性鑒定時，鑒定中設置一個感病對照品種，感病對照不得缺省。感病對照宜選用本地區(qū)的常規(guī)感病品種，感病對照品種選擇標準為在常規(guī)接菌量下病情指數(shù)大于50的品種。鑒定中也可增設一個抗病對照品種，抗病對照品種也可缺省，選用本地區(qū)的常規(guī)抗病品種。抗病對照品種選擇標準為在常5.5接種前管理播種后將塑料缽置于溫室中，進行培育，出苗前，溫室溫度保持在25℃~30℃,保持盆中土壤濕度；番茄苗出土后，溫室溫度保持在23℃~25℃,土壤濕度保持在60%～80%，正常栽培管理，不施用每年4月～6月和10月～12月為番茄對葉霉病抗性鑒定與抗4用無菌水將接種體懸浮液稀釋，配制成接種體濃度為1.0×106個孢子/mL～4.0×106個孢子/mL的接采用噴霧法接種。將配好的接種液用小型噴霧器均勻噴霧到番茄苗的葉片表面及莖干等部位，以接種后的番茄苗，置于溫度為20℃~24℃的溫室中，黑暗保濕（RH95%～100%）48h。以后每天光照12h～14h，RH為90%～100%，溫室溫度保持在20℃~24℃,適時澆水，保持正常栽培管理，接種后15d～20d時進行調(diào)查。也可根據(jù)感病的對照品種病級擴展到最高病級的表1番茄葉霉病的病情分級劃分根據(jù)病害癥狀描述，調(diào)查每份鑒定品種（系）的發(fā)病情況，逐份材料進行分株調(diào)查，分別記載病59結(jié)果評價9.1鑒定有效性判別當感病對照品種達到其相應感病程度（DI≥50.0），該批9.2抗病性劃分12R345S69.3鑒定結(jié)果記錄編號品種/種質(zhì)名稱來源重復病情級別病情指數(shù)平均病指抗性評價0135796ⅠⅡⅢ……播種日期接種日期接種生育期接種病原物分離編號接種病原物株系類型調(diào)查時間鑒定人（簽字）：校核人（簽字）：鑒定技術(shù)負責人（簽字）：鑒定單位蓋章）7200g，切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持30min，用2層紗布趁熱在量杯上過濾，棄濾渣，取濾液補充水分到1000ml；把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂17g，然后放在石棉網(wǎng)上，小火加熱，并用玻璃棒不斷攪拌，待瓊脂完全溶解后，再補充水分至1000ml，調(diào)pH值至6.8～7.0。將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或500ml三角瓶內(nèi)，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞或泡沫塑料塞后，再在塞子外包一層牛皮紙，用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。試管的分裝量8番茄葉霉病菌[Fulviafulva(Cooke)Ciferri]侵染引起番茄葉霉病，尤以保護地番茄受害為重。主要為害葉片，嚴重時也為害莖、花、果實等。葉片染病，葉面出現(xiàn)橢圓形或不規(guī)則形淡黃色病斑，葉背面病斑上長出灰褐色至黑褐色的絨狀霉層，是病菌的分生孢子梗和分生孢子。條件適宜時，病葉正面也長出霉層。病害嚴重時可引起全葉卷曲，植株呈現(xiàn)黃褐色干枯。果實染病，果蒂附近形成圓形黑色病斑，硬化稍凹陷，不能食用。嫩莖及果柄番茄葉霉病菌[Fulviafulva(Cooke)Ciferri]病菌