iTOXcontrol 在線生物毒性檢測(cè)儀器操作規(guī)程

iTOXcontrol在線生物毒性檢測(cè)儀器操作規(guī)程

1.儀器原理

1.1測(cè)試原理

費(fèi)舍爾弧菌（這個(gè)品種正式名稱為Photobacteriumphosphoreum）發(fā)光作用是其呼

吸作用的附帶產(chǎn)物。其發(fā)光強(qiáng)度取決于外部水體中的多個(gè)因素，包括：溫度，PH,鹽度

和水中毒物的濃度。水體中的毒物影響發(fā)光菌的生物學(xué)作用，影響菌體細(xì)胞中酶的作用,

能量的流動(dòng)等，最終導(dǎo)致的結(jié)果就是抑制菌的發(fā)光強(qiáng)度，而且發(fā)光強(qiáng)度的減弱和水中毒

物的濃度是成正比的。

圖1裝在小瓶中的發(fā)光菌，毒性越強(qiáng)，發(fā)光越弱

1.2儀器結(jié)構(gòu)

儀器內(nèi)部結(jié)構(gòu)圖

測(cè)試部分包括:

A.外殼

I33

B.菌種模塊

C.混合模塊

D.控制液存放模塊

E.PMT測(cè)光暗室

F.測(cè)試與參比水樣供給模塊

G.取樣臂

H.鹽水供給裝置

1.3測(cè)試流程

測(cè)試過程包括以下步驟：1)準(zhǔn)備階段；2)溫度調(diào)節(jié)&T0測(cè)定；3)混合和等待;

4)T1測(cè)試；5)判定修正系數(shù)&抑制作用。以15分鐘的反應(yīng)時(shí)間計(jì)算，整個(gè)測(cè)試流程

大概耗時(shí)25分鐘左右。測(cè)試流程及時(shí)間見表lo

表1測(cè)試流程及時(shí)間

制備菌種懸浮液、參比水適應(yīng)調(diào)節(jié)抽取測(cè)試水樣加入到測(cè)接觸反應(yīng)&T1

自動(dòng)清洗

樣與待測(cè)水樣&T0測(cè)定試懸浮液中測(cè)試

2~5分鐘5分鐘1分鐘15或30分鐘2~5分鐘

(1)準(zhǔn)備階段

根據(jù)ISO11348標(biāo)準(zhǔn)，測(cè)試所用到的費(fèi)歇爾弧菌(Vibriofischeri)測(cè)試液必須是含

有2%的鹽溶液：所以菌種懸浮液含2%NaCl的空白液和菌種懸浮液；參比水樣懸浮液

含2%NaCl的空白液(=負(fù)控)；水樣含2%NaCl的水樣。

(2)溫度調(diào)節(jié)&TO測(cè)定

所有懸浮液必須在15℃±0.5℃使用?！斑m應(yīng)時(shí)間”的溫度要求將細(xì)菌懸浮液從4(

提升并穩(wěn)定在15℃o默認(rèn)適應(yīng)時(shí)間是5分鐘。當(dāng)溫度穩(wěn)定后，細(xì)菌懸浮液初始發(fā)光度”

LRT0”由光電倍增管讀取。這是適合調(diào)節(jié)階段的最后一次測(cè)量。LRTO、LST0是零時(shí)

刻檢測(cè)的參比讀數(shù)。

(3)混合和等待

隨后，相同的測(cè)試發(fā)光菌懸浮液均等加入到參比水樣和水樣。

發(fā)光菌懸浮液+參比水樣=參比測(cè)試樣=LRT

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發(fā)光菌懸浮液+待測(cè)水樣=原水測(cè)試樣=LST

水樣中可能存在污染物，與發(fā)光菌懸浮液接觸后，混合期間會(huì)影響發(fā)光菌。接觸的

時(shí)間叫混合時(shí)間，混合時(shí)間默認(rèn)是15分鐘。

(4)T1測(cè)試

混合時(shí)間到后，兩個(gè)最終的發(fā)光量將被測(cè)定。

“LRT1”=Reference/blank參比水樣

“LST1”=Sample實(shí)際水樣

(5)判定修正系數(shù)和抑制作用

LRTO的測(cè)量和LRT1確定發(fā)光強(qiáng)度的自然變化。發(fā)光強(qiáng)度的自然變化對(duì)于參比水

樣和水樣(相當(dāng)于空白和水樣)是同等的。修正系數(shù)是用來修正發(fā)光強(qiáng)度的自然漂移。

因此參比水樣發(fā)光強(qiáng)度發(fā)生變化時(shí)，修正系數(shù)(CF)是自動(dòng)計(jì)算的。

修正系數(shù)：CFRT1=LRT1/LRTO

發(fā)光強(qiáng)度修正：LCT1=LSTO*CFRT1

光強(qiáng)的抑制率算法如下：抑制率:LT1=((LCT1-LST1)/LCT1)*100

LT1=毒性百分?jǐn)?shù)

2.iTOXcontrol儀器操作

2.1硬件啟動(dòng)

在儀器的正面板的紅色按鈕是系統(tǒng)的總開關(guān)，打開后：菌種模塊的攪拌器會(huì)啟動(dòng)；

儀器會(huì)執(zhí)行一次初始化程序。

2.2軟件TOXengine啟動(dòng)

iTOXcontrolengine軟件控制儀器的所有硬件操作任務(wù)，如閥門或泵開啟和關(guān)閉和

存儲(chǔ)TOXview軟件中的測(cè)試結(jié)果的導(dǎo)入。TOXengine軟件在PC啟動(dòng)后會(huì)自動(dòng)啟動(dòng)并開

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始測(cè)量。（TOXview數(shù)據(jù)處理軟件在后臺(tái)運(yùn)行）

（1）打開TOXengine后必須先啟動(dòng)engine.

microLANTOXco

FileControl

Engine

On

EngineOn

(2)Procedure程序.

Piocedme

L!：i'iI-：'-[fl

SlaHBacteiiaciAure(2x25fnl)

NonnailToxic<yMea^xement

Postrv^CoftioiMeemfemeri

NegativeConholMeMuemenl

BlankSoMonMM$ui8fnehl

BlankSoMonPo^tivrControlMeasurement

ManfenanceReplacingsymges

Marrtenanc?AdpstTipheight

選擇一個(gè)進(jìn)程后，按Start啟動(dòng)程序。

常用進(jìn)程如列表所示：

Rinsingtheinstrument執(zhí)行清洗

執(zhí)行菌種培養(yǎng)（iTOXcontroI的菌種直接在模塊上培養(yǎng)，

StartBacteriaculture(2x25ml)

TOXcontrol的菌種是獨(dú)立的菌種培養(yǎng)儀,因此沒有此項(xiàng)進(jìn)程）

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執(zhí)行正常毒性測(cè)試（會(huì)按照事先設(shè)定的頻次，自動(dòng)進(jìn)

NomalToxicityMeasurement

行正控與負(fù)控的檢測(cè)）

PositiveControlMeasurement執(zhí)行正控測(cè)試

NegativeControlMeasurement執(zhí)行負(fù)控測(cè)試

Maintenance：Replacingsyringes執(zhí)行注射器更換維護(hù)

(3)File菜單

Logonasmanager：管理者權(quán)限的登陸密碼為tox。當(dāng)?shù)顷憺楣芾碚邫?quán)限可進(jìn)行變量

與設(shè)置的修改，用戶級(jí)別權(quán)限則不能進(jìn)行此操作。

Language：可設(shè)置軟件的語(yǔ)言（有英語(yǔ)、法語(yǔ)、德語(yǔ)、漢語(yǔ)等）

（4）顯示界面的切換

軟件底部有5個(gè)頁(yè)面可供選擇，以顯示相應(yīng)的界面信息。

IpO1Status

[x|Variablesinfo&Chartpage□Historypage8)RemarkspagegActivitypage

Screenselection

STATUSSCREEN狀態(tài)界面

選擇status頁(yè)進(jìn)入狀態(tài)界面，此界面主要顯示設(shè)備的狀態(tài)信息，如毒性值、報(bào)警、

溫度讀數(shù)、試劑體積和進(jìn)程等。

3.試劑配制

NaCl鹽溶液（20%）：產(chǎn)品號(hào)：02TCB3180050（5L）或自配。用量：±700ml/

周（每次測(cè)試2ml）。

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參比水規(guī)格：山泉水如農(nóng)夫山泉。

控制液規(guī)格：硫酸鋅：1.117mgZnSO4*7H2O溶入100ml去離子水中，產(chǎn)品編號(hào)：

02TCB00308,用量：每次控制測(cè)試40山。

光菌；凍干狀態(tài)，產(chǎn)品編號(hào)：02TCB00305包括：10小支菌（保存溫度為-20C。）

10瓶培養(yǎng)液（保存溫度為+4C。）用量：每周1支菌和1瓶培養(yǎng)液。

4.維護(hù)保養(yǎng)

iTOXcontrol系統(tǒng)的維護(hù)按維護(hù)周期可以分為周維護(hù)、月維護(hù)、季度維護(hù)（每三個(gè)

月）。進(jìn)行儀器維護(hù)前，須停止當(dāng)前的測(cè)試進(jìn)程周維護(hù)：

4.1清洗所有模塊

用75%的酒精清洗所用模塊和模塊中的內(nèi)槽并用干凈的布擦干。

用純水再次沖洗，以清除殘余的酒精。

4.2更換進(jìn)樣器（注射器）

更換進(jìn)樣器必須打開測(cè)光盒蓋。但打開盒蓋之前有一點(diǎn)必須注意：關(guān)閉光電倍增管

的電源。如果儀器一直處在測(cè)試狀態(tài)，進(jìn)樣器的使用壽命一般不小于一個(gè)星期。由于存

在著磨損，所以如果長(zhǎng)時(shí)間不進(jìn)行更換，則進(jìn)樣器會(huì)產(chǎn)生漏液的情況。所以建議一星期

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2n1、把暗室的黑蓋取下

1

更換進(jìn)樣器步驟2

1、把固定進(jìn)樣器的小鐵板取下，用手指扣著往

3匕

外拉

更換進(jìn)樣器步驟2

1f印I

411、取出舊的進(jìn)樣器

11

更換進(jìn)樣器步驟4

I

11

一二X,

51、用濕布清潔暗室內(nèi)部，然后擦干凈

更換進(jìn)樣器步驟5

139

61、如圖，用75%的酒精沖洗取樣軟管與取樣頭

更換進(jìn)樣器步驟6

1、用手?jǐn)Q搓軟管以清洗其內(nèi)部

1、然后再用純水沖洗干凈

1、重新裝入新的進(jìn)樣器，并用手按緊接口以防

止漏水

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更換進(jìn)樣器步驟9

1、把固定小鐵板重新卡入

2、開始一個(gè)清洗進(jìn)程，以觀察進(jìn)樣器是否工作

正常

1、一切正常后再把暗室黑蓋蓋上，擰上6個(gè)螺

絲

1、把光電倍增管的開關(guān)打開

更換進(jìn)樣器及清洗軟管。

4.3添加菌液

每?jī)蓚€(gè)星期往菌種培養(yǎng)模塊中添加一次菌種懸浮液。存放槽1第一個(gè)星期使用，槽

2是第二星期使用。

141

.

/..

1一1

■

J

■1■1

11

142

143

144

4.5添加控制液

控制液是儀器在測(cè)量中，加入正控測(cè)試所需的標(biāo)準(zhǔn)參考毒性試劑。

控制液配置：將1117mgZnSO4*7H2O溶于100ml去離子水中。溶液中Zn濃度即

為2500mg/L每次做控制測(cè)試時(shí)，使用控制液的量為40glo

往前面的小瓶中添加6.5ml的控制液，后面的小瓶可以加入?yún)⒈人畼樱箖晌汗?/p>

吸入相同體積的液體。

控制液瓶

4.6取出和清理所有模塊

將模塊從儀器中取出，清洗所有模塊內(nèi)的容器，并用紙巾擦干。清潔所有模塊的外

表面。

警告：取出菌種模塊與反應(yīng)模塊前必須關(guān)閉電源。

注意：使用酒精清洗后，用清水把酒精沖洗干凈。

4.7清理儀器內(nèi)部

用濕布清潔儀器內(nèi)部，然后擦干凈。

4.8清潔并給取樣臂的定向桿上油

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潤(rùn)滑油用紙巾清潔定向桿，然后在不同方位滴3滴油。

4.9清潔并給進(jìn)樣器馬達(dá)軸上油

用紙巾清潔所有的螺紋，然后滴上2滴潤(rùn)滑專用油。

每三個(gè)月維護(hù)（季度維護(hù)）。

4.10更換取樣軟管

06TCBSK001維護(hù)包（包括：取樣軟管、吸液頭和密封圈）

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4.11更換吸液頭

4.12更換密封圈

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注意：不要重新使用舊的密封圈，因?yàn)槊芊馊赡茉谌〕龅倪^程中被損壞

清潔底板和嵌入孔

裝入新的密封圈

用手將密封圈推入孔內(nèi)

放入新的密封圈

裝上底板并連接好軟管

開始進(jìn)程“更換注射器”

開始進(jìn)程“清洗儀器”，檢查兩個(gè)管道是否

有氣泡

4.13更換參比和待測(cè)水樣管

取下參比水樣和待測(cè)水樣的進(jìn)水管，并更換新的管子。

4.14檢查散熱風(fēng)扇

檢查風(fēng)扇是否平穩(wěn)轉(zhuǎn)動(dòng)。

檢查風(fēng)扇和風(fēng)扇罩上是否有鹽粒和水滴。

如有，則清潔風(fēng)扇和風(fēng)扇罩。

4.15空調(diào)的維護(hù)

清理空調(diào)內(nèi)所有的過濾網(wǎng)。

4.16維護(hù)保養(yǎng)項(xiàng)目及時(shí)間

日常維護(hù)明細(xì)表

序號(hào)周期維護(hù)事項(xiàng)備注

清潔各個(gè)模塊擦洗

清潔黑色膠管和吸頭手揉搓黑管，注射器沖洗吸頭。

添加參比水

148

更換注射器

添加鹽溶液

添加毒性控制液

清洗水路管道揉搓

2每?jī)芍芴砑影l(fā)光菌

將所有模塊取下清潔請(qǐng)勿沖洗

清潔檢測(cè)器內(nèi)部擦洗

3每月清潔滑動(dòng)桿并滴加潤(rùn)滑液擦掉油污

清潔PMT內(nèi)傳動(dòng)桿并滴加潤(rùn)滑液同上

清潔空調(diào)濾網(wǎng)取下濾網(wǎng)輕輕拍打

更換黑色膠管和吸頭半年更換一次維護(hù)包即可

更換PMT內(nèi)密封墊圈同匕

4每三個(gè)目

更換樣品水管路以管路老化時(shí)間為準(zhǔn)

檢查風(fēng)扇

5.故障排除

5.1故障信息及處理

序

常見問題異常描述處理方法備注

號(hào)

可根據(jù)各地實(shí)際情況來使用參

1參比水使用純水CF值比較低更換參比水比水，更換之后讓儀器執(zhí)行參

比水、毒性兩項(xiàng)測(cè)試

該數(shù)值反應(yīng)的是樣水的水質(zhì)情

清洗水路，更換樣水或

2POS和NEG數(shù)值數(shù)值偏大或偏小況，以及菌種對(duì)毒性物質(zhì)的適

控制液

應(yīng)性

菌室內(nèi)液體體積更換為夏天模式的菌盒冷凝水等于稀釋了菌種濃度，

3菌種模塊冷凝水

增加(17cm)對(duì)結(jié)果無(wú)影響

觸發(fā)只針對(duì)“正常毒性測(cè)試”

工控觸發(fā)儀器失工控機(jī)不能觸發(fā)將儀器程序調(diào)節(jié)到“正

4一項(xiàng)，進(jìn)行完其他操作后必須

敗儀器常毒性測(cè)試”項(xiàng)

調(diào)回到該選項(xiàng)

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序

常見問題異常描述處理方法備注

毒性數(shù)值為負(fù)，查看菌種發(fā)光量，檢查

5TOX為負(fù)值

且數(shù)值較大參比水供應(yīng)。