DB63∕T 2291-2024 青稞育成品種DNA指紋圖譜鑒別規(guī)范

DB63青海省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I本文件起草單位：中國(guó)科學(xué)院西北高原生物研究所、青海省農(nóng)作物種子站、海南州農(nóng)牧業(yè)綜合服包天忠、李俊仁、李春橋、王健斌、趙璨、尤1標(biāo)準(zhǔn)名稱本文件規(guī)定了青稞（Hordeumvulgarevar.nudumHook.f.）育成品種DNA指紋圖譜采集的術(shù)語和定本文件適用于青稞育成品種DNA指紋圖譜的采集GB/T3543.2農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程GB/T3543.4農(nóng)作物種子檢驗(yàn)規(guī)程GB4404.1糧食作物種子第1部GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和GB/T30988多酚類植物基因組DNA提取純化GB/T34265Sanger法通過DNA檢測(cè)技術(shù)，獲得由多個(gè)位點(diǎn)上的等位基因組成的長(zhǎng)度不等4縮略語DNA：脫氧核糖核苷酸（DeoxyribonucleicSNP：?jiǎn)魏塑账岫鄳B(tài)性（SingleNucleotidePoly2PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PolymeraseChainReac見附錄A。超純水符合GB/T6682的要種子質(zhì)量應(yīng)符合GB4404.1的要求。按照GB/按照GB/T3543.4的規(guī)定進(jìn)行發(fā)芽，發(fā)芽的籽粒數(shù)需按照GB/T30988中的DNA純度、濃度測(cè)試將附錄C中引物稀釋至10μmol/L，DNA濃度稀釋至100ng/μl~200ng/μl。反應(yīng)體系為25μl,包含物0.5μl，TaqDNA聚合酶0.2μl，超純3參照附錄D中青稞育成品種的DNA圖譜，判斷所鑒定的品種是否為4A.1主要儀器設(shè)備器（2.5μl、10μl、100μl、1000μl）、微波爐、量筒、電泳裝置、電泳儀、凝膠成像系統(tǒng)或紫外A.2主要試劑乙二胺四乙酸二納、三羥甲基氨基甲烷、鹽酸、氫氧化鈉、氯化鈉、十六烷基三甲基溴化銨、β-巰基乙醇、Tris-飽和酚、三氯甲烷、異丙醇、無水乙醇、10×PCR反應(yīng)緩沖液、4種脫氧核糖核苷酸、TaqDNA聚合酶、瓊脂糖、溴酚藍(lán)、硼酸、二甲苯青、甘油、二甲基腈藍(lán)FF、溴化乙錠。5溶液配制B.1.10.5mol/L乙二胺四乙酸二納鹽（EDTApH8.0）溶液定容至50ml。在103.4kPa（121℃)條件下滅B.1.21mol/L三羥甲基氨基甲烷鹽酸（Tris-HClpH8稱取6.06g的Tris，加40mL的超純水，充分溶解。用1.8mL～2.2mL的濃HCl（36%~38%）準(zhǔn)確調(diào)節(jié)pH至8.0，定容至50ml。滅菌溫度和時(shí)間同B.1.1，（見B.1.2），4mLEDTA溶液（pH8.0）（見B.1.1），加超純水充分溶解后定容至400mL。滅菌溫度B.1.1），混合均勻，定容至100ml，分裝后滅菌。滅菌溫度和時(shí)間同），稱取EDTA8.7672g，二甲苯腈藍(lán)FF0.5g，溴酚藍(lán)0.5g，加入360ml甘油，調(diào)節(jié)PH至7.0，再用在100ml超純水中加入1g溴化乙錠，磁力攪拌數(shù)小時(shí)確保其完全溶解，棕色瓶室溫6F:GACACCGGCATGGACATR:ACCGCAAGGATAGTAGACR:CCTTTCACTATTATTGC7福8-4奠多吉1號(hào)門農(nóng)1號(hào)東青1號(hào)同德系選8號(hào)互青2號(hào)北青1號(hào)北青4號(hào)北青5號(hào)北青6號(hào)北青7號(hào)北青3號(hào)昆侖1號(hào)昆侖2號(hào)昆侖3號(hào)昆侖8號(hào)昆侖10號(hào)昆侖12號(hào)昆侖164S502產(chǎn)監(jiān)88繁34-202產(chǎn)監(jiān)88繁3102產(chǎn)監(jiān)91-4102品比17區(qū)91-88-5-4-102品比7區(qū)92-322002年93H2-28-202產(chǎn)監(jiān)98006(蘭)C02品比1區(qū)911-71喜馬拉雅4號(hào)康青1號(hào)康青3號(hào)康青6號(hào)甘