分子生物學(xué)考試重點絕對是考點你懂得

分子生物學(xué)主要內(nèi)容復(fù)習(xí)2011-6熒光標記的為重點看的。名詞解釋看：啟動子（第1章課件）、增強子（第1章課件）、反義RNA（第一章課件上老師補充）、基因組(P20)、Alu序列(P23)、衛(wèi)星DNA(第2章課件上，老師補充)、引發(fā)體(P33)、轉(zhuǎn)錄泡（P60）、操縱子（考研書-生化篇，基因表達調(diào)控），核酸分子雜交、PCR、基因組文庫、cDNA文庫。真核生物基因組的特點真核生物的基因組龐大，除了結(jié)構(gòu)基因的結(jié)構(gòu)與原核生物大不相同以外，還存在大量的非結(jié)構(gòu)基因區(qū)域。真核細胞基因組具有結(jié)構(gòu)基因呈斷裂基因形式、以單順反子轉(zhuǎn)錄、結(jié)構(gòu)基因在基因組中所占比例小于非編碼區(qū)域的特點。真核細胞基因組存在大量重復(fù)序列，可以分為高度重復(fù)序列、中毒重復(fù)序列和單拷貝或低度重復(fù)序列等3種。真核基因組的另一特點是存在多基因家族。原核生物基因組的特點特點：1、基因組中很少有重復(fù)序列；2、編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因多為單拷貝基因，但編碼rRNA的基因仍然是多拷貝基因；3、結(jié)構(gòu)基因在基因組中所占的比例遠遠大于真核基因組，但小于病毒基因組；4、許多結(jié)構(gòu)基因在基因組中以操縱子為單位排列。5.結(jié)構(gòu)基因的編碼是連續(xù)的。原核生物DNA復(fù)制的特點（P31最下面一段）簡述開放復(fù)合體的形成（P33最上一段）真核生物DNA復(fù)制的特點（P35）P36表格P67氨基酰-tRNA合成酶的作用P69肽鏈延伸的步驟詳看分子生物學(xué)復(fù)習(xí)答題1、DNA的結(jié)構(gòu)、性質(zhì)及特點①一級結(jié)構(gòu)是指DNA分子中核苷酸的排列順序，二級結(jié)構(gòu)是指兩條DNA單鏈形成的雙螺旋結(jié)構(gòu)、三股螺旋結(jié)構(gòu)和四股螺旋結(jié)構(gòu)；三級結(jié)構(gòu)是指雙鏈DNA進一步扭曲盤旋形成的超螺旋結(jié)構(gòu)。②DNA一級結(jié)構(gòu)的基本特點：4種脫氧核糖核苷酸以3′，5′—磷酸二酯鍵相連，形成長鏈，鏈中的脫氧核糖和磷酸都是相同的。組成DNA的堿基有腺嘌呤（A）、鳥嘌呤（G）、胞嘧啶（C）和胸腺嘧啶（T）。③DNA是由兩條單鏈結(jié)合在一起形成的雙鏈分子，兩條單鏈都是由A、T、G、C以千變?nèi)f化的排列組合而形成的。大多數(shù)生物的遺傳信息都是儲存在DNA分子中。④DNA分子主要攜帶兩類遺傳信息，即有功能活性的DNA序列所攜帶的信息和調(diào)控信息。⑤DNA二級結(jié)構(gòu)是指DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)，其特點為：脫氧核糖與磷酸交替排列構(gòu)成了DNA主鏈；兩條脫氧核苷酸鏈是反向平行排列，一條是5′→3′方向，另一條為3′→5′方向；以右手方向盤繞成雙螺旋構(gòu)型；A配T，G配C。⑥生物體的閉環(huán)DNA都以超螺旋形式存在，如細菌質(zhì)粒、一些病毒、線粒體的DNA等。2、RNA的結(jié)構(gòu)、功能、特點①由4種基本的核苷酸以3′，5′-磷酸二酯鍵連接而成的長鏈，堿基中沒有T，而為尿嘧啶（U）。②分為mRNA（信使RNA），tRNA（轉(zhuǎn)RNA，轉(zhuǎn)運氨基酸）和核蛋白體RNA（rRNA）。mRNA結(jié)構(gòu)特點：不穩(wěn)定、代謝活躍，更新迅速，壽命短。原核生物mRNA具有操縱子結(jié)構(gòu)，主要是多順反子，mRNA5′端無帽子結(jié)構(gòu)，3′端一般無多聚A尾巴，沒有修飾堿基；真核mRNA5′端有帽子結(jié)構(gòu)、3′端大多有多聚腺苷酸尾巴、分子中可能有修飾堿基，主要有甲基化、有編碼區(qū)和非編碼區(qū)。tRNA的結(jié)構(gòu)特點及作用：作用：在蛋白質(zhì)合成過程轉(zhuǎn)運氨基酸，參與蛋白質(zhì)的翻譯。一級結(jié)構(gòu)含有稀有堿基如DHU，3′端為3個同樣的核苷酸序列（CCA）序列，此序列是tRNA結(jié)合和轉(zhuǎn)運安基酸而生成氨酰tRNA所必需的。5′端為G、具有TΨC；二級結(jié)構(gòu)為三葉草形，三級結(jié)構(gòu)為倒L形；C、rRNA即核蛋白體RNA：為細胞內(nèi)含量最豐富的RNA，約占細胞總RNA的80%以上,參與組成核蛋白體，作為蛋白質(zhì)生物合成的場所。原核生物核糖體由50S和30S兩個大小亞基組成，30S小亞基含16SrRNA和21種蛋白質(zhì),50S大亞基含23S和5SrRNA以及34種蛋白質(zhì)；真核生物細胞核糖體的沉降系數(shù)為80S，由大小亞基組成，40S小亞基含18SrRNA及30多種蛋白質(zhì)，60S大亞基含3種rRNA(28S.5.8S.5S)以及大約45種蛋白質(zhì)。④hnRNA即核內(nèi)不均-RNA，為真核生物轉(zhuǎn)錄生成的mRNA前體。⑤SnRNA即小分子核內(nèi)RNA，不單獨存在，常與多種特異的蛋白質(zhì)結(jié)合在一起，形成小分子核內(nèi)核蛋白顆粒，在mRNA的剪接中起重要作用。⑥反義RNA，又稱調(diào)節(jié)RNA，主要封閉RNA。5、端粒的主要特點和功能：特點為：位于真核生物染色體末端、端粒酶催化端粒DNA延長、在決定細胞壽命中起重要作用、含短的高度重復(fù)序列。其主要功能有：保護線性DNA的完整復(fù)制、保護染色體末端、決定細胞的壽命。9、遺傳密碼具有以下特點：A、連續(xù)性：兩個密碼子之間沒有任何核苷酸加以分隔，即密碼是無標點的。B、方向性：mRNA中密碼子的排列是有方向性的，即起始密碼子總是位于編碼區(qū)5’末端，而終止密碼子位于3’末端。每個密碼子的三個核苷酸也是5’10、轉(zhuǎn)錄的過程及特點①轉(zhuǎn)錄是以DNA為模板，以4種NTP為原料，依堿基配對規(guī)律，在DNA指導(dǎo)的RNA聚合酶催化下合成RNA的過程，其過程包括：起始、延長和終止三個階段。②轉(zhuǎn)錄的特點：A、對于一個基因組來說，轉(zhuǎn)錄只發(fā)生在一部分基因，而且每個基因的轉(zhuǎn)錄都受到相對獨立的控制。B、轉(zhuǎn)錄是不對稱的。C、轉(zhuǎn)錄時不需要引物，而且RNA鏈的合成是連續(xù)的。D、轉(zhuǎn)錄的單向性，即RNA生物合成時，只能向一個方向進行聚合，所依賴的模板DNA鏈的方向為3’→5’，而RNA鏈的合成方向為5’→311、原核生物DNA復(fù)制的過程及特點①復(fù)制過程包括：起始（復(fù)制起始位點識別、解螺旋酶解開DNA雙鏈，引發(fā)體合成RNA引物）延伸（DNA聚合酶催化聚合反應(yīng)，連續(xù)合成前導(dǎo)鏈，不連續(xù)合成隨從鏈）。終止（RNA引物去除、岡崎片段連接、在特殊的終止結(jié)構(gòu)區(qū)域停止）。②復(fù)制的共同特點為：半保留復(fù)制和半不連續(xù)復(fù)制、聚合反應(yīng)都需要模板、底物、DNA聚合酶及其它酶和蛋白質(zhì)。12、真核生物染色體DNA復(fù)制的特點：（原核相反）①復(fù)制起始點為多個；②復(fù)制叉移動速度慢；③復(fù)制方向大多數(shù)為雙向；④RNA引物短；⑤岡崎片段短，⑥不可連續(xù)復(fù)制13、翻譯的主要過程及特點①起始：形成翻譯起始復(fù)合物②延長：指每加一個氨基酸經(jīng)過進位、成肽和轉(zhuǎn)位，使肽鏈從N端向C端延長。③終止（當(dāng)mRNA分子中的終止密碼子出現(xiàn)后，多肽鏈合成停止，肽鏈從肽酰-tRNA中釋出，mRNA、核蛋白體等分離）。蛋白制合成是一個耗能過程，每生成一個肽鍵，要消耗2個高能磷酸鍵，氨基酸活化要消耗2個高能磷酸鍵，整個過程可能多于4個高能磷酸鍵。14、原核生物mRNA的加工：轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA分子不需加工。tRNA結(jié)構(gòu)基因的初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需要加工，才能成為具有生物功能的成熟分子。tRNA前體的加工包括剪切作用（切除多余核苷酸）、添加和修復(fù)3'端CCA序列，某些堿基的化學(xué)修飾（成熟tRNA分子中有稀有堿基）。16、真核生物mRNA的加工包括：①5′端加帽（由加帽酶催化5′端加入7-甲苷烏苷酸，形成帽子結(jié)構(gòu)m7GpppmNP-）。②3′端加入Poly(A)尾（A、組蛋白的成熟mRNA無需加polyA尾；B、加尾信號包括AAUAAA和富含GU的序列；C、加尾不需模板；D剪切過程需要多種蛋白質(zhì)因子的輔助）。③mRNA前體的剪接（剪接加工以除去內(nèi)含子序列，并將外顯子序列連接成為成熟的有功能的mRNA分子。內(nèi)含子兩端的結(jié)構(gòu)通常是5′-GU……AG-3′。選擇性剪接的作用機制包括；A使用不同的剪接位點，B選擇使用外顯子，C、反式剪接，D、使用不同的啟動子，E、使用不同的多腺苷酸化位點）。④RNA的編輯（發(fā)生于轉(zhuǎn)錄后水平，改編mRNA序列，C→U或A→G，增加遺傳信息容量）。17、基因表達是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合成特定的蛋白質(zhì)，進而發(fā)揮特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的全過程。但并非所有基因表達過程都產(chǎn)生蛋白質(zhì)，tRNA、rRNA編碼基因轉(zhuǎn)錄生成RNA的過程也屬于基因表達?；虮磉_受到多級水平的調(diào)控，具有階段特異性（時間特異性）和組織特異性（空間特異性）。基因表達分為幾個階段：基因活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工等、產(chǎn)物是RNA和有功能的蛋白質(zhì)。。20、反式作用因子：指能直接或間接辨認和結(jié)合轉(zhuǎn)錄上游區(qū)段DNA的蛋白質(zhì)，其主要特點包括三個功能結(jié)構(gòu)域（DNA識別結(jié)合域、轉(zhuǎn)錄活性域、結(jié)合其它蛋白的結(jié)合域）、能識別并結(jié)合上游調(diào)控區(qū)的順式作用元件、對基因表達有正性和負性調(diào)控作用。其活性調(diào)節(jié)方式：表達式調(diào)節(jié)，共價修飾，配體結(jié)合及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。DNA結(jié)構(gòu)域包括：鋅指、螺旋—轉(zhuǎn)角—螺旋、亮氨酸拉鏈和螺旋—環(huán)—螺旋。轉(zhuǎn)錄激活域富含：酸性氨基酸、脯氨酸和谷氨酰胺。22、結(jié)構(gòu)基因突變的類型包括點突變、缺失、插入和倒位四類，遺傳密碼的改變分為錯義突變、無義突變、同義突變和移碼突變。23、癌基因惡性激活的機制包括：①原癌基因點突變，②原癌基因獲得外源啟動子而激活，③原癌基因因甲基化程度降低而激活，④基因易位或重排使原癌基因激活。29、原癌基因產(chǎn)物的類型及細胞定位①生長因子及其類似物，由細胞分泌，如C-sis家族（sis編碼血小板源生長因子，表達產(chǎn)物與PDGF鏈結(jié)構(gòu)同源）。②跨膜生長因子受體型的酪氨酸蛋白激酶，如erb-B,表皮細胞生長因子（EGF）受體；fims,巨噬細胞集落刺激因子受體；定位于質(zhì)膜。③細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)分子，定位于胞夜,包括A、低分子量G蛋白，如H-ras等基因表達產(chǎn)物；B、胞內(nèi)蛋白激酶（包括與膜結(jié)合的蛋白酪氨酸激酶和胞漿絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶），如src、abl。④核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子：如myc、fos等，定位于細胞核內(nèi)。⑤胞漿調(diào)節(jié)蛋白，如crk的產(chǎn)物是存在于胞漿中的調(diào)節(jié)蛋白，定位于胞漿。⑥可溶性蛋白酪氨酸激酶受體和非蛋白激酶受。30、細胞周期的主要調(diào)控點細胞周期的運行受多種因素所調(diào)控，有2個主要調(diào)控點，亦稱為檢測點。①G1/S期檢測點：在酵母中稱起點，在哺乳細胞中稱限制點,是控制細胞進入S期檢測點（G1期檢測點）,cyclinB與CDK4和CDK6結(jié)合，cyclinE與CDK2，CDK3結(jié)合，通過磷酸化使它們活化。cyclin-CDK復(fù)合物可使Rb蛋白磷酸化，從而釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，促進DNA復(fù)制相關(guān)基因的表達。CDK2也可和cyclinA、cyclinA1結(jié)合，促進早S期DNA合成的起始。②G2/M期檢測點：是控制細胞進入M期檢測點（G2期檢測點），促有絲分裂因子（MPF）由cyclinB和CDK1組成，是啟動有絲分裂的關(guān)鍵因子。細胞何時進入M期取決于Cdc2的磷酸化狀態(tài)。36、乳糖操縱子的正、負調(diào)節(jié)機制乳糖操縱子包含3個結(jié)構(gòu)基因Z.Y.A（編碼β-半乳糖苷酶，β-半乳糖苷通透酶和轉(zhuǎn)乙酰基酶）、3個調(diào)控元件（啟動子、操縱基因和CAP結(jié)合位點）和1個調(diào)節(jié)基因（編碼阻遏蛋白）。乳糖操縱子的轉(zhuǎn)錄起始是由CAP和阻遏蛋白兩種調(diào)控因子來調(diào)控的。（1）阻遏蛋白的負調(diào)控：無乳糖時，阻遏蛋白結(jié)合操縱基因，妨礙RNA聚合酶結(jié)合啟動子，從而抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。有乳糖時，生成半乳糖（誘導(dǎo)劑）結(jié)合阻遏蛋白，使阻遏蛋白構(gòu)象改變，變構(gòu)的阻遏蛋白不能與操縱序列結(jié)合，阻遏機制解除，結(jié)構(gòu)基因可以轉(zhuǎn)錄，基因得以表達。③cAMP-CAP復(fù)合物的正調(diào)控:無葡萄糖時，cAMP濃度高，形成的cAMP-CAP復(fù)合物結(jié)合于CAP結(jié)合位點，增強啟動子轉(zhuǎn)錄活性，促進下游基因得以表達；有葡萄糖時，cAMP濃度低，cAMP-CAP復(fù)合物形成受阻，影響轉(zhuǎn)錄活性。④正、負調(diào)控機制相輔相成：cAMP-CAP復(fù)合物是轉(zhuǎn)錄必需的，同時阻遏蛋白進一步控制轉(zhuǎn)錄啟動。綜上，乳糖操縱子最強的表達條件是有乳糖而無葡萄糖。40、原核生物和真核生基因表達調(diào)控特點的比較。①相同點：轉(zhuǎn)錄起始是基因表達調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)②不同點：A、原核基因表達調(diào)控主要包括轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；真核基因表達調(diào)控主要包括染色質(zhì)活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工多個層次。B、原核基因表達調(diào)控主要為負調(diào)節(jié)，真核主要為正調(diào)節(jié)。C、原核轉(zhuǎn)錄起始不需要轉(zhuǎn)錄因子，RNA聚合酶直接結(jié)合啟動子，由σ因子決定基因表達的特異性；真核轉(zhuǎn)錄起始需要基礎(chǔ)、特異兩類轉(zhuǎn)錄因子，依賴DNA-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活。D、原核基因表達調(diào)控主要采用操縱子模型，轉(zhuǎn)錄出多順反子RNA，實現(xiàn)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)；真核基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子RNA，功能相關(guān)蛋白質(zhì)的協(xié)調(diào)表達機制更為復(fù)雜。42、真核生物基因組結(jié)構(gòu)與功能的特點。①每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目，體細胞一般為雙倍體。②真核基因組遠遠大于原核生物的基因組，具有許多復(fù)制起點。③真核基因組由一個結(jié)構(gòu)基因與相關(guān)的調(diào)控區(qū)組成，轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子，即一分子mRNA只能翻譯一種蛋白質(zhì)。④真核生物分子含有大量重復(fù)順序。⑤真核生物基因組內(nèi)非編碼的順序占90%以上。⑥真核基因是斷裂基因。⑦功能相關(guān)的基因構(gòu)成各種基因家族。⑧真核生物基因組中也存在一些可移動的遺傳因素。45、DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄的異同。相同點：①模板是DNA②遵守堿基互補規(guī)律③新鏈合成方向為5'→3'④催化核苷酸以磷酸二酯鏈連接⑤合成部位在細胞核。不同點：①復(fù)制的原材料是dNTP，轉(zhuǎn)錄的原料是NTP②復(fù)制的主要酶類是DNA聚合酶，轉(zhuǎn)錄酶是RNA聚合酶③復(fù)制需要RNA引物，轉(zhuǎn)錄不需要引物④復(fù)制的產(chǎn)物是雙鏈DNA，轉(zhuǎn)錄的產(chǎn)物是單鏈RNA⑤復(fù)制的模板是DNA雙鏈（半保留復(fù)制），轉(zhuǎn)錄的模板是DNA單鏈（不對稱轉(zhuǎn)錄）⑥復(fù)制的功能是傳遞遺傳信息給子代,轉(zhuǎn)錄是表達信息所需步聚.第十一章細胞異常增生性的分子機制1.

病毒癌基因

反轉(zhuǎn)錄病毒中一些能在體外轉(zhuǎn)化細胞，在體內(nèi)使宿主患腫瘤的基2.

細胞癌基因（正常宿主細胞中與病毒癌基因同源的基因，往往編碼生長因子或其他信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，為細胞生長所必需；只有特定條件下被活化后才有致癌性，又稱為原癌基因。3.

抑癌基因（一類編碼產(chǎn)物起抑制細胞增殖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、負性調(diào)節(jié)細胞周期的作用，從而抑制細胞增殖和抑制腫瘤生成的基因。）4.

細胞凋亡（在生理或病理狀態(tài)下，由細胞內(nèi)特定基因的程序性表達而介導(dǎo)的細胞死亡。）5.原癌基因活化的機理。原癌基因的活化機制包括(1)

點突變；(2)

DNA重排；(3)

基因擴增(4)

染色體易位；(5)

病毒啟動子及增強子的插入?；罨?，基因編碼產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化和（或）表達的量增加，導(dǎo)致細胞增殖信號增強。6.以p53為例說明抑癌基因的調(diào)控功能抑癌基因的表達產(chǎn)物起著抑制細胞增殖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、負性調(diào)節(jié)細胞周期的作用，從而抑制細胞增殖(1)p53蛋白與p300/CBP結(jié)合，促進靶基因p21和GADD45轉(zhuǎn)錄，阻止細胞通過G1-S檢驗點，進行基因修復(fù)(2)促進BAX、IGF－BP3（胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3）及FAS基因的轉(zhuǎn)錄，促進細胞凋亡。7.簡述Rb的作用機制(1)

Rb基因是發(fā)現(xiàn)的第一個抑癌基因，編碼產(chǎn)物定位于細胞核，含有病毒蛋白和細胞蛋白的結(jié)合位點及磷酸化位點(2)低磷酸化的pRb結(jié)合并滅活E2F1，細胞不能通過G1-S檢驗點(3)高磷酸化的pRb不結(jié)合E2F1，相關(guān)基因表達，細胞進入S期(4)

CyclinD1-CDK4復(fù)合體使pRb磷酸化程度增加。

1．基因克隆（指把一個生物體中的遺傳信息（基因片段）轉(zhuǎn)入另一個生物體內(nèi)進行無性繁殖，得到一群完全相同的基因片段，又稱為DNA克?。?．基因組文庫（指含有某種生物體全部基因片段的重組DNA克隆群體。即將原核或真核細胞染色體DNA提純，用機械法或限制性內(nèi)切酶將染色體DNA切割成大小不等的片段，插入適當(dāng)?shù)目寺≥d體中，繼而轉(zhuǎn)入受體菌擴增，由此獲得含有眾多克隆的基因組DNA文庫。）3．cDNA文庫（指含有某種組織細胞全部mRNA信息的重組DNA克隆群體。以細胞總mRNA為模板，利用逆轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補的cDNA第一鏈，進而形成cDNA雙鏈，與合適載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌擴增，由此建立cDNA文庫。）4．基因剔除（指通過基因同源重組定向地從活細胞的基因組中移除特定基因的過程，是通過lossoffunction途徑研究基因功能的重要手段）5．RNA干擾（由短雙鏈RNA誘導(dǎo)同源RNA降解的過程，是一種特異的轉(zhuǎn)錄后基因沉默現(xiàn)象，可以認為是生物體在核酸水平的免疫反應(yīng)。）6．Southern印跡（是DNA定性及定量分析的方法之一，過程為提取細胞中的總DNA，用限制性內(nèi)切酶水解后進行電泳，并轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，用DNA探針與結(jié)合在膜上的DNA分子退火形成雙鏈，檢測靶DNA的含量。）7．Northern印跡（是RNA定性及定量分析的方法之一，過程為將細胞中的總RNA分子進行電泳分離，并轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上，用DNA探針與結(jié)合在膜上的RNA分子退火形成雙鏈，檢測靶RNA的含量。）8．反轉(zhuǎn)錄PCR（提取細胞總RNA作為模板，由逆轉(zhuǎn)錄酶催化生成cDNA。再以cDNA為模板，由一對特異性引物引發(fā)，在TaqDNA聚合酶作用下，通過變性、復(fù)性、延伸三步循環(huán)，復(fù)制生成大量雙鏈DNA片段的過程）

1什么叫載體？載體應(yīng)具備哪些條件？載體是指能夠攜帶目的基因在宿主細胞內(nèi)擴增或表達的DNA分子，應(yīng)具備的條件(1)

有復(fù)制子(2)

有單一限制性內(nèi)切酶位點(3)

有篩選標志(4)

表達型載體具備完整的轉(zhuǎn)錄單位。2．基因克隆的基本過程是什么(1)獲得目的基因。(2)

限制性內(nèi)切酶消化載體。(3)

連接目的基因和載體。(4)重組DNA導(dǎo)入宿主細胞。(5)

篩選并擴增獲得重組克隆3．原核表達系統(tǒng)與真核表達系統(tǒng)各有何優(yōu)缺點？(1)

原核表達體系的優(yōu)點培養(yǎng)方法簡單、迅速、經(jīng)濟，適合大規(guī)模生產(chǎn)。(2)原核表達體系的缺點缺乏轉(zhuǎn)錄和翻譯后加工機制，表達的蛋白質(zhì)可能沒有生物學(xué)活性。(3)

真核表達體系的優(yōu)點①具有酵母、昆蟲以及哺乳動物細胞等多種表達系統(tǒng)。②具有轉(zhuǎn)錄和翻譯后修飾系統(tǒng)，表達獲得有功能的活性蛋白(4)真核表達體系的缺點操作有一定難度，費時、費力。

4．簡述Sanger法的DNA測序原理。．Sanger法的DNA測