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DB34DB34/T3305—2018石榴干腐病檢測(cè)與鑒定技術(shù)規(guī)程DetectionandIdentificationofPilidiellagranati2018-12-29發(fā)布2019-01-29實(shí)施安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I1GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)病原菌：石榴殼座月孢（Pilidiellagranati）分類地位：屬真菌界Fungi，子囊菌門Ascomycota，子囊菌綱Sordariomycetes，間座殼目Diaporthales，黑盤孢科Melanconidaceae，殼座月孢屬Pilidiella。5.1高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≤15000r/5.5恒溫培養(yǎng)箱：20℃~30℃5.7恒溫水浴鍋：4℃~100℃25.14顯微鏡：物鏡頭10×~40×6.1PCR試劑：2×PCRTaqMa異戊醇（25：24：1氯仿，異丙醇，TE（Tris-HCL10mmol/L，EDTA1mmol/L，pH8.0）基中培養(yǎng)。待長(zhǎng)出菌絲后，轉(zhuǎn)至PDA培養(yǎng)基平板和孢子形態(tài)（參見(jiàn)附錄A.3）。進(jìn)行單孢分離與純化后從培養(yǎng)好的菌落邊緣用打孔器取10塊直徑為養(yǎng)5d，過(guò)濾收集菌絲，經(jīng)液氮冷凍研磨成粉，加），將上清轉(zhuǎn)移至新的EP管中，加入等體積氯仿，輕輕顛倒混勻，常溫條件下12000rpm離心5min；者TE（pH8.0）溶解沉淀（含20），——GF-F：5’-AAGGACACAACCCCAGATAC-3’；3膠在1×TAE緩沖液中電泳，用凝膠成像系統(tǒng)分析。若陽(yáng)性對(duì)照出現(xiàn)一條450bp的DNA片段，陰性分離并鑒定為石榴干腐病菌的菌株，應(yīng)妥善保存。短期保存可將菌株接種到PDA培4

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