《畜禽養(yǎng)殖場細(xì)菌耐藥性水平評價(jià)技術(shù)規(guī)范》編制說明

編制說明標(biāo)準(zhǔn)名稱畜禽養(yǎng)殖場細(xì)菌耐藥性水平評價(jià)技術(shù)規(guī)范任務(wù)來源（項(xiàng)目計(jì)劃號）安徽省市場監(jiān)督管理局關(guān)于下達(dá)2024年第三批安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃的通知》（皖市監(jiān)函〔2024〕377號），計(jì)劃編號為2024-3-109項(xiàng)負(fù)責(zé)起草單位安徽省飼料獸藥監(jiān)察所單位地址安徽省合肥市洞庭湖路3355號參與起草單位安徽省動物疫病控制中心、安徽省農(nóng)機(jī)安全監(jiān)理總站、安徽華澳生物技術(shù)有限公司、安徽賽如分析檢測科技有限公司標(biāo)準(zhǔn)起草人（全部起草人，應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)文本前言中起草人排序一致）序號姓名單位職務(wù)職稱電話編制情況1、編制過程簡介2024年9月2日，收到《安徽省市場監(jiān)督管理局關(guān)于下達(dá)2024年第三批安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃的通知》（皖市監(jiān)函〔2024〕377號），本標(biāo)準(zhǔn)的計(jì)劃編號為2024-3-109項(xiàng)，隨后成立標(biāo)準(zhǔn)編制小組，成員有劉發(fā)全、吳昊、許世富等人。標(biāo)準(zhǔn)起草過程：2024年9月，安徽省飼料獸藥監(jiān)察所聯(lián)合安徽省動物疫病控制中心、安徽省農(nóng)機(jī)安全監(jiān)理總站、安徽華澳生物技術(shù)有限公司、安徽賽如分析檢測科技有限公司成立了標(biāo)準(zhǔn)制定工作小組，分工負(fù)責(zé)標(biāo)準(zhǔn)起草相關(guān)工作，編制小組以科學(xué)、規(guī)范、可操作性強(qiáng)為原則，按GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》起草本標(biāo)準(zhǔn)，采取召開座談會、發(fā)電子郵件等方式，征求起草單位、相關(guān)企業(yè)等行業(yè)內(nèi)的專家意見和建議，完成了本標(biāo)準(zhǔn)征求意見稿。2、制定標(biāo)準(zhǔn)的必要性和意義必要性：抗菌藥物在人類和畜牧業(yè)中得到了廣泛應(yīng)用，為規(guī)?；?、集約化養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展提供了重要支撐。然而，抗菌藥物的大量使用也導(dǎo)致了動物源細(xì)菌耐藥性日益加劇。這不僅加大了畜禽疫病的防控難度，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失，而且耐藥細(xì)菌及耐藥基因還可能在人、動物和環(huán)境中轉(zhuǎn)移，對人類健康和公共衛(wèi)生造成潛在威脅。我省各級獸醫(yī)主管部門和獸用抗菌藥使用減量化示范企業(yè)的努力，初步建立并執(zhí)行獸藥安全使用管理制度，做到規(guī)范科學(xué)用藥，落實(shí)獸用處方藥制度、獸藥休藥期制度和“獸藥規(guī)范使用”承諾制度等多項(xiàng)有章可循的制度，并取得了較好的成績，在有效遏制動物源細(xì)菌耐藥性方面，我省雖然啟動了養(yǎng)殖場細(xì)菌耐藥性監(jiān)測工作，但對某一獸用抗菌藥使用減量化示范企業(yè)來說，是否能通過獸用抗菌藥使用減量化方案有效遏制細(xì)菌耐藥性，不僅需要持續(xù)對其耐藥性進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測，還需要細(xì)化細(xì)菌耐藥性的評價(jià)方案。目前還沒有相關(guān)細(xì)菌耐藥性評價(jià)的國家標(biāo)準(zhǔn)和農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，為了能從遏制細(xì)菌耐藥性的角度量化獸用抗菌藥使用減量化實(shí)施效果，有必要建立畜禽養(yǎng)殖場細(xì)菌耐藥性水平評價(jià)技術(shù)規(guī)范，能科學(xué)評估細(xì)菌耐藥性監(jiān)測結(jié)果，指導(dǎo)養(yǎng)殖場科學(xué)合理的使用抗菌藥，評估全省養(yǎng)殖場獸用抗菌藥使用減量化效果，以標(biāo)準(zhǔn)的形式在安徽區(qū)域建立一個(gè)詳細(xì)的細(xì)菌耐藥性水平評價(jià)技術(shù)規(guī)范供養(yǎng)殖場及耐藥性監(jiān)測相關(guān)單位使用。意義：1.保障動物健康和生產(chǎn)效益，通過定期監(jiān)測和評價(jià)，可以及時(shí)了解養(yǎng)殖場內(nèi)流行的耐藥菌株及其耐藥模式，為疾病的精準(zhǔn)診斷和治療提供依據(jù)，有助于制定有效的治療方案，監(jiān)測結(jié)果可以幫助養(yǎng)殖者了解養(yǎng)殖場的衛(wèi)生狀況和管理水平對細(xì)菌耐藥性產(chǎn)生的影響，從而針對性地改進(jìn)養(yǎng)殖環(huán)境、飼養(yǎng)管理方式和生物安全措施，降低疾病的發(fā)生率，減少對抗生素的依賴，提高養(yǎng)殖效益;2.保護(hù)公共衛(wèi)生安全，養(yǎng)殖場內(nèi)的耐藥細(xì)菌可能通過食物鏈傳播給人類，導(dǎo)致人類感染耐藥菌，引發(fā)食源性疾病，給公共衛(wèi)生安全帶來威脅。開展耐藥性監(jiān)測與評價(jià)，可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)潛在的公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)，采取相應(yīng)的防控措施，保障食品安全和人類健康，通過對養(yǎng)殖場的耐藥性監(jiān)測與評價(jià)，可以掌握耐藥菌的傳播途徑和流行趨勢，為制定區(qū)域或全國范圍內(nèi)的耐藥菌防控策略提供數(shù)據(jù)支持，有效遏制耐藥菌的傳播和擴(kuò)散;3、合理使用抗生素，耐藥性監(jiān)測與評價(jià)結(jié)果可以為獸醫(yī)和養(yǎng)殖者合理選擇和使用抗生素提供科學(xué)依據(jù)，避免濫用和誤用抗生素，減少不必要的抗生素使用，降低耐藥性的產(chǎn)生速度，為政府制定和調(diào)整抗生素使用政策、監(jiān)管措施提供數(shù)據(jù)支持，促進(jìn)抗生素的合理使用和管理，保障養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展;5.生態(tài)環(huán)境保護(hù)，抗生素在畜禽體內(nèi)不能完全代謝，部分會隨糞便、尿液等排泄物進(jìn)入環(huán)境。通過耐藥性監(jiān)測與評價(jià)，可以促使養(yǎng)殖者合理控制抗生素的使用劑量和使用時(shí)間，減少抗生素向環(huán)境中的排放，降低對土壤、水體等生態(tài)環(huán)境的污染，過度使用抗生素導(dǎo)致的細(xì)菌耐藥性問題，可能會破壞環(huán)境中的微生物群落結(jié)構(gòu)和生態(tài)平衡。通過耐藥性監(jiān)測與評價(jià)，有助于了解抗生素對生態(tài)環(huán)境的影響，采取相應(yīng)的生態(tài)修復(fù)措施，維護(hù)生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定和健康。總之，科學(xué)監(jiān)測細(xì)菌耐藥性，不僅需要建立專門針對畜禽養(yǎng)殖環(huán)節(jié)的常見細(xì)菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)的技術(shù)規(guī)范，還需要建立畜禽養(yǎng)殖場細(xì)菌耐性水平評價(jià)技術(shù)規(guī)范，正確評估畜禽養(yǎng)殖場的細(xì)菌耐藥性情況，為國家提供更科學(xué)的養(yǎng)殖環(huán)節(jié)細(xì)菌耐藥性水平監(jiān)測結(jié)果及變化趨勢，對科學(xué)評估動物源細(xì)菌耐藥性的公共衛(wèi)生安全影響具有重要意義。3、制定標(biāo)準(zhǔn)的原則和依據(jù)，與現(xiàn)行法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系。本標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)抗菌藥使用減量化的實(shí)際需要，編制遵循“前沿性、科學(xué)性、實(shí)用性、規(guī)范性”的原則，按照《中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化法》和《安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》等有關(guān)法律、法規(guī)制定。本標(biāo)準(zhǔn)遵循現(xiàn)行的國家標(biāo)準(zhǔn)、農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)法規(guī)的規(guī)定。4、主要條款的說明，主要技術(shù)指標(biāo)、參數(shù)、試驗(yàn)驗(yàn)證的論述（詳細(xì)說明）本文件規(guī)定了畜禽養(yǎng)殖場細(xì)菌耐藥性水平評價(jià)的設(shè)備和材料、樣品采集、菌株分離與藥物敏感性試驗(yàn)、飼養(yǎng)管理、評價(jià)方法、記錄和生物安全的要求。本文件適用于安徽省畜禽養(yǎng)殖場的細(xì)菌耐藥性水平評價(jià)。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB4789.1 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)總則GB4789.28 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求GB/T6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB19489 實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求GB4789.28-2024食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn)培養(yǎng)基和試劑的質(zhì)量要求NY/T4141 動物源細(xì)菌耐藥性監(jiān)測樣品采集技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T4142 動物源細(xì)菌抗菌藥物敏感性測試技術(shù)規(guī)程微量肉湯稀釋法NY/T4143 動物源細(xì)菌抗菌藥物敏感性測試技術(shù)規(guī)程瓊脂稀釋法NY/T4144 動物源細(xì)菌抗菌藥物敏感性測試技術(shù)規(guī)程紙片擴(kuò)散法NY/T4146 動物源沙門氏菌分離與鑒定技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T4145 動物源金黃色葡萄球菌分離與鑒定技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T4147 動物源腸球菌分離與鑒定技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T4148 動物源彎曲桿菌分離與鑒定技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T4149 動物源大腸埃希菌分離與鑒定技術(shù)規(guī)程SN/T1944 動物及其制品中細(xì)菌耐藥性的測定紙片擴(kuò)散法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1細(xì)菌耐藥性ResistancetoDrug細(xì)菌對于抗菌藥物作用的耐受性。3.2抗菌藥物敏感性試驗(yàn)AntimicrobialSusceptibilityTesting，AST測定抗菌藥物在體外對病原微生物有無抑制作用的一種試驗(yàn)方法。通過該試驗(yàn)可以判斷引起感染的病原微生物對各種抗菌藥物的敏感程度，從而為選擇最有效的抗菌藥物進(jìn)行治療提供重要依據(jù)，以指導(dǎo)臨床合理選用藥物的微生物學(xué)試驗(yàn)。3.3敏感Sensitive表示被測菌能被常用劑量的抗菌藥物所抑制。3.4中介Intermediate表示被測菌對常規(guī)劑量抗菌藥物的反應(yīng)性較低，提高藥物劑量可能有效。3.5耐藥Resistant表示被測菌不能被常規(guī)劑量的抗菌藥物所抑制。3.6最低抑菌濃度MinimumInhibitoryConcentration，MIC在體外試驗(yàn)中抑制特定微生物生長所需的最低抗菌藥物濃度，用以判斷測試菌株對抗菌藥物的敏感程度。4設(shè)備和材料4.1 設(shè)備微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備按GB4789.1執(zhí)行，其他設(shè)備如下：——微量移液器：0.1μL～2.5μL、1μL～10μL、10μL～100μL、100μL～1000μL；——多通道微量加樣器：10μL～100μL；——麥?zhǔn)媳葷醿x：可測量范圍0.01～4.00麥?zhǔn)蠁挝?；——恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃；——低溫貯藏箱：2℃～8℃；——冰箱：2℃～8℃，-20℃，-80℃。4.2 材料——無菌培養(yǎng)皿：直徑90mm；——96孔透明無菌微孔板；——1μL一次性無菌接種環(huán)、10μL一次性無菌接種環(huán)；——一次性無菌采樣拭子；——標(biāo)準(zhǔn)比濁管；——藥敏試驗(yàn)板。4.3試劑4.3.1 實(shí)驗(yàn)用水除非另有說明,水應(yīng)符合GB/T6682三級水的規(guī)定。4.3.1無菌生理鹽水無菌生理鹽水的制備按GB4789.1執(zhí)行。4.3.2 培養(yǎng)基培養(yǎng)基制備按GB4789.28執(zhí)行。4.3.3 質(zhì)控菌株本標(biāo)準(zhǔn)中的質(zhì)控菌株為大腸埃希菌、沙門氏菌、糞腸球菌、彎曲桿菌、金黃色葡萄球菌，保存、傳代等應(yīng)按照GB4789.28的要求執(zhí)行。5樣品的采集與記錄5.1樣品的采集與記錄按NY/T4141規(guī)定執(zhí)行。6菌株分離6.1金黃色葡萄球菌分離與鑒定按NY/T4145規(guī)定執(zhí)行。6.2沙門氏菌分離與鑒定按NY/T4146規(guī)定執(zhí)行。6.3腸球菌分離與鑒定按NY/T4147規(guī)定執(zhí)行。6.4彎曲桿菌分離與鑒定按NY/T4148規(guī)定執(zhí)行。6.5大腸埃希菌分離與鑒定按NY/T4149規(guī)定執(zhí)行。7抗菌藥物敏感性試驗(yàn)按NY/T4142、NY/T4143或NY/T4144規(guī)定操作。 8評價(jià)對象8.1不同養(yǎng)殖階段的同批次動物針對不同的養(yǎng)殖階段的同批次動物及時(shí)進(jìn)行采樣、細(xì)菌分離和藥敏試驗(yàn),評價(jià)細(xì)菌耐藥性水平變化。8.2同一養(yǎng)殖場不同圈舍的動物在相同時(shí)間，針對同一養(yǎng)殖場不同圈舍的動物進(jìn)行采樣、細(xì)菌分離及藥敏試驗(yàn)。8.3不同養(yǎng)殖方式的動物評價(jià)不同養(yǎng)殖方式下的畜禽動物細(xì)菌耐藥性水平差異,采樣時(shí)間和方案應(yīng)完全一致。分離菌株數(shù)量和種類應(yīng)保持一致。8.4監(jiān)測時(shí)期的動物在進(jìn)行大規(guī)模耐藥性監(jiān)測時(shí)，應(yīng)在規(guī)定時(shí)間完成耐藥性水平評價(jià)。9評價(jià)方法9.1整體耐藥水平評價(jià)9.1.1耐藥強(qiáng)度系數(shù)統(tǒng)計(jì)養(yǎng)殖場分離的大腸埃希菌或腸球菌的MIC值，若MIC值超出藥敏板測定范圍，則以最大測定值的下一個(gè)二倍梯度作為MIC修正值。將全部MIC值（含修正值）取10的對數(shù)，求得平均值和中位值作為耐藥強(qiáng)度系數(shù)值。若耐藥強(qiáng)度系數(shù)低（高）于對照組或區(qū)域水平，則認(rèn)為耐藥水平低（高）。9.1.2多重耐藥率計(jì)算養(yǎng)殖場3重、5重和7重耐藥率。若多重耐藥率低（高）于對照組或區(qū)域水平，則認(rèn)為整體耐藥水平低（高）。9.2記錄應(yīng)保留原始的細(xì)菌分離鑒定以及藥敏結(jié)果，記錄表見附錄A。10生物安全10.1實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合GB4789.1和GB19489的要求。10.2廢棄物處理應(yīng)按照GB19489規(guī)定執(zhí)行。10.3菌株管理按照中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部令第16號文件中動物病原微生物菌(毒)種保藏管理相關(guān)規(guī)定執(zhí)行。5、標(biāo)準(zhǔn)中如果涉及專利，應(yīng)