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畜禽血清中黃曲霉毒素B?生物標(biāo)志物的測定高效液相色譜法I本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)、安徽浩翔農(nóng)牧有限公司(農(nóng)業(yè)農(nóng)村部豬室)、望江縣小月山農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司、和縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局、望江縣畜牧獸畜禽血清中黃曲霉毒素B?生物標(biāo)志物的測定高效液相色譜法25.1.12AFB?生物標(biāo)志物標(biāo)準(zhǔn)品AFB?-Lysine(純度≥99%)。5.2.1高效液相色譜儀(含熒光檢測器、柱溫箱)。5.2.7天平(感量0.0001g)。1002223444665886736.2.1.3血清總蛋白含量計算公式見公式(1)、公式(2)、公式(3): (2) 3標(biāo)準(zhǔn)品1002354565706.2.2.3150μL血清白蛋白計算公式見公式(4)、公式(5)、公式(6): 4速順序分兩次各加入1mL水洗滌、1mL甲醇-水溶液(附錄A.1.4)和氫氧化銨(附錄A.1.8)洗滌,在0.5mL甲醇中洗脫后干燥,用1mL甲酸-水溶液(附錄A.1.5)洗脫純化兩次,收集洗脫液,干6.5.2檢測波長:激發(fā)波長405nm,發(fā)射波長470nm。時間%%056.6.1在6.5色譜條件下,將150.0μLAFB?生物標(biāo)志物標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(附錄A.2.2)按濃度從低到5高依次注入高效液相色譜儀,AFB?生物標(biāo)志物標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參考附錄B;待儀器條件穩(wěn)定后,以目標(biāo)物質(zhì)的濃度為橫坐標(biāo)(x軸),目標(biāo)物質(zhì)的峰面積為縱坐標(biāo)(y軸),對各個數(shù)據(jù)點進(jìn)行最小二乘線性擬合,標(biāo)準(zhǔn)曲線見公式(7):b——標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距。6.6.2標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中待測物的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器線性響應(yīng)范圍內(nèi),如果樣本含量超過標(biāo)準(zhǔn)曲6.7空白試驗不加入標(biāo)準(zhǔn)品,按6.3、6.4的步驟做空白實驗。確認(rèn)不含有干擾待測組分的物質(zhì)。7測定結(jié)果的表述樣品分析見公式(8):X——待測血清白蛋白中AFB?生物標(biāo)志物的含量,單位為皮克每毫克(pg/mg);Ci——待測物進(jìn)樣液中AFB?生物標(biāo)志物的濃度,單位為納克每毫升(ng/mL);V——定容體積,單位為毫升(mL);m——150.0μL血清中白蛋白含量,單位為毫克(mg)。8重復(fù)性血清樣本中AFB?生物標(biāo)志物含量在重復(fù)性條件下獲得的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。9檢出限與定量限本標(biāo)準(zhǔn)血清AFB?生物標(biāo)志物的最低檢出限為0.02ng/mL,定量限為1.0ng/mL。10回收率添加濃度在0.5ng/mL~1.0ng/mL時,回收率在75%~94%之間。6A.1.1磷酸二氫銨(20mmol/L,pH7.2水調(diào)pH至7.2,混合均勻。A.1.2疊氮化鈉(0.001%):稱取疊氮化鈉1.0mg,溶于100mL水,混合均勻。A.1.3甲醇-水溶液(25+75):分別量取250mL甲醇和750mL水,混合均勻。A.1.5甲酸-水溶液(2+98):分別量取2氯化鉀,用980mL水溶解,然后用鹽酸調(diào)整pH至7.4,最后用水稀釋至1000mL,混合均勻。A.1.8氫氧化銨-水溶液(1+99):分別量取10mL氫氧化銨和990mL水,混合均勻。A.2.1標(biāo)準(zhǔn)儲備溶
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