大二上- zs生理學實驗

實驗三、坐骨神經腓腸肌標本制備及不同強度和頻率刺激對肌肉收縮的影響

指導教師：韓璐吉林大學生命科學學院一、實驗目的1、學會坐骨神經腓腸肌標本的制備掌握制備標本的基本操作技術，掌握蛙類手術器械的使用方法。

2、觀察骨骼肌收縮性質不同刺激強度時骨骼肌收縮的反應，不同刺激頻率對骨骼肌收縮形式的影響。3、學習微機生物信號采集處理系統(tǒng)的使用二、實驗原理一個刺激是否能使組織發(fā)生興奮，不僅與刺激形式有關，還與刺激強度、刺激時間、強度－時間變化率三要素有關。骨骼肌由許多肌纖維組成，刺激強度不同，肌纖維的興奮性不同，隨著刺激強度的增加，收縮強度也增加，當所有的肌纖維都興奮時，再增加刺激強度，收縮強度也不會再增加。在一定范圍內，肌肉收縮幅度與刺激強度成正相關。

閾刺激：生理學中把剛能引起肌肉收縮的最小刺激強度成為閾強度，該刺激即為閾刺激。閾下刺激:<閾強度,腓腸肌不收縮；閾上刺激:>閾強度。概念＜閾刺激閾下刺激＜閾上刺激有效刺激(a)單收縮（twitch）:骨骼肌在受到一次閾上刺激后產生的收縮。(b)不完全強直收縮（pletetetanus）：后一刺激引起的肌肉收縮落在前一刺激引起肌肉收縮曲線的舒張期時，表現(xiàn)為鋸齒狀收縮波，產生不完全性強直收縮。(c)完全性強直收縮（completetetanus）：后一刺激引起的肌肉收縮落在前一刺激引起肌肉收縮曲線的收縮期時，則骨骼肌處于持續(xù)的收縮狀態(tài)，鋸齒波消失，產生完全性強直收縮。三、實驗材料和方法1.材料：蟾蜍

2.試劑：任氏液組成：由無機鹽和蒸餾水配置而成，每升溶液含NaCl6.5g、KCl0.14g、CaCl20.12g,、NaHCO30.20g、NaH2PO40.01g。任氏液的理化特性與蛙的組織液近似?？捎糜谕艿慕M織、器官潤濕和營養(yǎng)。3.器材:蛙板、剪刀、鑷子、探針、玻璃分針、神經標本盒、鐵支架、微調固定器、張力換能器、計算機、RM6240C生物信號采集處理系統(tǒng)。

四、實驗步驟1、雙毀髓（腦、脊髓）；2、去下肢皮膚；3、去掉內臟、上肢、頭；4、分開兩腿；5、在大腿部找到坐骨神經；6、剪去脊柱骨，剪去大腿部分的肌肉，保留膝關節(jié)與部分股骨；7、跟腱下穿線并結扎跟腱，游離腓腸??；8、檢查神經活性(鋅銅弓刺激)。1、雙毀髓（腦、脊髓）；左手握蟾蜍,用拇指按壓背部，用食指下壓頭部前端使頭前俯。右手持探針由枕骨沿正中線向脊柱端觸劃，當觸到凹陷處即枕骨大孔.將探針由此垂直刺入,然后將針折向前插入顱腔并左右攪動，搗毀腦組織。而后退針至皮下，針尖向后刺入椎管并左右攪動以破壞脊髓。當蟾蜍四肢松軟、呼吸消失則表示腦脊髓被完全毀壞，否則應按上法重復操作。操作過程中要防止毒腺分泌物射入眼內。

2、去下肢皮膚；

腰部皮膚環(huán)切，左手夾住脊柱端(注意鑷子不要夾住或觸及坐骨神經)，右手捏住皮膚邊緣，向下剝掉后肢的皮膚。

3、去掉內臟、上肢、頭；看到神經叢，在神經叢上緣用粗剪刀剪斷脊柱,并將頭和前肢及內臟一并剪去。

4、分開兩腿；

用粗剪刀縱向剪開脊柱(注意勿損傷坐骨神經)，并從恥骨聯(lián)合中央剪開兩側大腿。將分離的標本浸于盛有任氏液的培養(yǎng)皿中。5、在大腿部找到坐骨神經；

腹面向上,用玻璃分針沿脊柱旁游離坐骨神經；背面向上，循坐骨神經溝(半膜肌與股二肌間的裂縫處),找出坐骨神經大腿段;玻璃分針輕輕勾起，剪斷其所有分支并一直游離至膝關節(jié)后側。6、剪去脊柱骨，只保留發(fā)出坐骨神經的脊髓節(jié)段，剪去大腿部分的肌肉，保留膝關節(jié)與部分股骨；7、跟腱下穿線并結扎跟腱，游離腓腸??；8、檢查神經活性(鋅銅弓刺激)。

儀器連接1．記錄不同刺激強度對肌肉收縮的幅度值。2．分別記錄下引起肌肉單收縮，不完全強制收縮和完全強制收縮時的刺激頻率和收縮幅度（張力）。五、實驗結果六、主意事項1、處理蟾蜍標本時，小心蟾酥濺入眼內。2、分離神經時，避免手、金屬器械觸碰或夾傷神經。3、經常給標本滴加任氏液，保持標本良好的興奮性。4、股骨要保留一部分（2/3），脊柱保留一段。5、實驗過程中保持換能器與標本連線的張力不變。6、連續(xù)刺激后讓肌肉休息，避免神經肌肉疲勞。7、找準最大刺激強度，不能刺激過強而損傷神經。

七、思考