DB34T 1943-2013 豬瘟病毒強(qiáng)毒株與疫苗株鑒別檢測套式RT-PCR方法_第1頁
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DB34DB34/T1943—2013豬瘟病毒強(qiáng)毒株與疫苗株鑒別檢測套式MethodofdetectionanddifferentiationofvirulentandvaccinestrainsofclassicalswinefevervirusbynestedRT-PCR安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了豬瘟病毒（Classicalswinefevervirus，CSFV）野毒株與疫苗株鑒別檢測的套式GB/T27540豬瘟病毒實(shí)時熒光RT-PCR檢測方法能夠引起機(jī)體免疫應(yīng)答，但不能或輕微能使豬產(chǎn)生臨床癥狀的RNA提取試劑，包裝瓶用錫箔紙包裹，于4℃~8℃保存。2去離子水中加入0.1％DEPC，37℃作用1h121±2）℃,高壓滅菌15min。4.8dNTP（2.5mmol/——套式第二步上游引物F2：5-ACCC——共用下游引物R：5-AAAGTGCTGTTAAAAATGAG3滅菌牙簽和0.5mL或1.5mL離心管經(jīng)（121±2）℃,高壓滅菌15min；剪刀、鑷子經(jīng)160℃器中充分研磨，3000g離心15min，取上清液轉(zhuǎn)入離心管中編號備用。號，送實(shí)驗(yàn)室。取50mg～100mg待檢樣品，按1:5倍體積加入DEPC水，于研缽用無菌注射器抽取全血，注入含1/104％EDTA溶液的無菌容器中，充分混勻挑取少許糞便樣本于離心管中，加入適量生理鹽采集或處理的樣品在2℃~8℃條件下保存應(yīng)不超過24h；若需長期保存，應(yīng)放置-70℃冰箱，4），），7.1.5于4℃、12000g離心15min（離心），——0.5μLdNTP（10mmol/L）將混合物吹打均勻后，至PCR儀中擴(kuò)增，條件如下：95

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