四川省天府名校2024-2025學(xué)年高三3月統(tǒng)一測試（一模）生物試題含解析

四川省天府名校2024-2025學(xué)年高三3月統(tǒng)一測試（一模）生物試題請考生注意：1．請用2B鉛筆將選擇題答案涂填在答題紙相應(yīng)位置上，請用0．5毫米及以上黑色字跡的鋼筆或簽字筆將主觀題的答案寫在答題紙相應(yīng)的答題區(qū)內(nèi)。寫在試題卷、草稿紙上均無效。2．答題前，認(rèn)真閱讀答題紙上的《注意事項》，按規(guī)定答題。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．如圖為真核細(xì)胞細(xì)胞核中某代謝過程示意圖，下列說法錯誤的是（）A．此過程在線粒體中也可發(fā)生B．①需通過兩層生物膜才能與細(xì)胞溶膠中的核糖體結(jié)合C．該過程是RNA生物合成的最主要方式D．該過程中堿基的配對方式有3種2．CD20是一種廣泛存在于正?；驉盒訠淋巴細(xì)胞表面的標(biāo)志性抗原，該抗原在其他正常組織細(xì)胞中并不表達(dá)。1997年，第一個針對B淋巴瘤治療的人鼠嵌合型單克隆抗體—利妥昔單抗上市，該抗體通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等方式來殺死腫瘤細(xì)胞：2002年，鼠源單克隆抗體—替伊莫單抗上市，該抗體除了促進(jìn)細(xì)胞凋亡外，還結(jié)合了相關(guān)的放射性藥物，進(jìn)一步增強了對B淋巴瘤細(xì)胞的殺傷效果；2017年，人源單克隆抗體—奧美珠單抗上市，該抗體免疫原性（自身作為異物引起免疫應(yīng)答的性能）更低，治療效果更明顯。分析以上材料，下列敘述正確的是（）A．利妥昔單抗只對B淋巴瘤發(fā)揮作用B．替伊莫單抗結(jié)合的放射性藥物能與CD20特異性結(jié)合C．鼠源抗體有可能作為抗原被人體免疫系統(tǒng)破壞D．奧美珠單抗可以治療各種癌癥3．若用同一顯微鏡觀察同一標(biāo)本4次，每次僅調(diào)整目鏡或物鏡和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，結(jié)果得到下面各圖。其中視野最暗的是A． B．C． D．4．科學(xué)家用植物體細(xì)胞雜交方法，將番茄的原生質(zhì)體和馬鈴薯的原生質(zhì)體融合，成功地培育出了“番茄——馬鈴薯”雜種植株（如圖所示），其中①～⑤表示過程，英文字母表示細(xì)胞、組織或植株。據(jù)圖敘述錯誤的是（）A．該過程所涉及到的原理為細(xì)胞膜的流動性和植物的組織培養(yǎng)技術(shù)B．④和⑤過程細(xì)胞的分裂方式只有有絲分裂；C．如果番茄為二倍體，馬鈴薯為四倍體，f植株為六倍體D．f植株的花藥離體培養(yǎng)形成的植株含有三個染色體組，為單倍體5．植物的光補償點是指該植物光合作用吸收的二氧化碳量與呼吸作用釋放的二氧化碳量相等時的光照強度。某興趣小組利用多支裝有等量水、水草和某種中性指示劑（中性時無色，偏堿性時呈藍(lán)色，弱酸性時呈黃色）的試管，分別用不同強度的光照處理，測定該水草的光補償點。下列說法正確的是（）A．該實驗中可以用一定濃度的NaHCO3溶液代替水溶液B．試管中顏色的變化是實驗的自變量C．不同溫度條件下水草的光補償點相同D．無顏色變化的試管所接受的光照強度即該水草的光補償點6．真核細(xì)胞有邊界，有分工合作的若干組分，有對細(xì)胞的遺傳和代謝進(jìn)行調(diào)控的信息中心。下列有關(guān)真核細(xì)胞的敘述正確的是（）A．細(xì)胞生命系統(tǒng)的邊界是細(xì)胞的最外層結(jié)構(gòu)B．細(xì)胞的信息中心就是細(xì)胞代謝和遺傳的中心C．植物細(xì)胞內(nèi)的色素均存在于原生質(zhì)層內(nèi)D．高等動物體內(nèi)的大多數(shù)細(xì)胞不會形成紡錘體二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）斑馬魚的HuC基因在早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞中選擇性表達(dá)，研究人員構(gòu)建了HuC基因的表達(dá)載體，并導(dǎo)入到斑馬魚細(xì)胞中研究其作用，請回答：（1）為獲取HuC基因，研究人員從早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞中提取HuC基因的mRNA，通過_________獲得大量的DNA，進(jìn)而構(gòu)建出HuC基因的______________。（2）DraⅢ，SnaBⅠ等是質(zhì)粒上不同限制酶的切割位點。為獲得HuC基因——綠色熒光蛋白基因的表達(dá)載體，需要對HuC基因和質(zhì)粒選用圖中的____________酶進(jìn)行切割，這樣做的原因是_________。不選擇NotⅠ酶切割的原因是_____________。（3）用Ca2+處理大腸桿菌，大腸桿菌細(xì)胞即能夠______________。實驗過程中可以采用在熒光顯微鏡下觀察________________________或者在培養(yǎng)基中添加______________，篩選出導(dǎo)入表達(dá)載體的大腸桿菌。8．（10分）下圖是某基因工程中構(gòu)建重組質(zhì)粒的過程示意圖，載體質(zhì)粒P0具有四環(huán)素抗性基因（tetr）和氨芐青霉素抗性基因（ampr）。請回答下列問題：（1）EcoRⅤ酶切位點為，EcoRⅤ酶切出來的線性載體P1為_______末端。（2）用TaqDNA聚合酶進(jìn)行PCR擴增獲得目的基因片段，其兩端各自帶有一個腺嘌呤脫氧核苷酸，載體P1用酶處理，在兩端各添加了一個堿基為_______的脫氧核苷酸，形成P2，P2和目的基因片段在_______酶作用下，形成重組質(zhì)粒P3。PCR技術(shù)中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內(nèi)的DNA聚合酶，其最主要的特點是_____________________________________。

（3）PCR技術(shù)可以臨床用于診斷感染性疾病、腫瘤及遺傳病等，它是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學(xué)技術(shù)，其標(biāo)準(zhǔn)步驟為_______、退火、__________。（4）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了___________________。若該目的基因是從cDNA文庫中分離獲取的蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體中，然后在_______為唯一含碳營養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測。9．（10分）稻瘟病是水稻最重要的病害之一，為達(dá)到防治目的，科研人員通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗稻瘟病水稻品種。回答下列問題：（1）通過RT-PCR技術(shù)以抗稻瘟病基因的RNA為模板擴增出cDNA。在PCR過程中，兩個引物是_____酶的結(jié)合位點；用cDNA單鏈與該抗性水稻植株的單鏈DNA進(jìn)行分子雜交，可能出現(xiàn)游離的單鏈區(qū)，其原因是_____。（2）利用RT-PCR技術(shù)擴增基因時，設(shè)計兩種引物的堿基序列的主要依據(jù)是_____，為了便于擴增后的X基因與質(zhì)粒連接，常在兩條引物上設(shè)計加入不同的限制酶酶切位點，主要目的是_____。（3）基因工程中，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入植物細(xì)胞采用最多的方法是_____，導(dǎo)入動物受精卵采用的方法是_____。（4）若要檢測抗稻瘟病基因是否翻譯出相應(yīng)蛋白質(zhì)，可采用的分子水平的檢測方法是_____。10．（10分）乙烯具有促進(jìn)果實成熟的作用，ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄細(xì)胞合成乙烯的兩個關(guān)鍵酶。利用反義DNA技術(shù)（原理如圖1），可以抑制這兩個基因的表達(dá)，從而使番茄具有耐儲存、宜運輸?shù)膬?yōu)點。圖2為融合ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因的反義表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)示意圖。（1）圖2中的2A11為特異性啟動子，則2A11應(yīng)在番茄的____________（器官）中表達(dá)。（2）從番茄成熟果實中提取___________為模板，利用反轉(zhuǎn)錄法合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因，以進(jìn)行拼接構(gòu)成融合基因并擴增。（3）合成出的ACC氧化酶基因兩端分別含限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的酶切位點，ACC合成酶基因兩端含SacⅠ和XbaⅠ的酶切位點，用限制酶____________對上述兩個基因進(jìn)行酶切，再串聯(lián)成融合基因，相應(yīng)的Ti質(zhì)粒應(yīng)用限制酶_______________進(jìn)行切割，確保融合基因能夠插入載體中。（4）為了實現(xiàn)圖1中反義基因的效果，應(yīng)將融合基因_______（正向/反向）插入在啟動子2A11的下游即可構(gòu)成反義融合基因。將表達(dá)載體與農(nóng)桿菌菌液混合后，接種在含有___的培養(yǎng)基中，可篩選出含有反義融合基因的農(nóng)桿菌，再利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)基因番茄。（5）在檢測番茄細(xì)胞中是否存在反義融合基因時，____________（填“能”/“不能”）用放射性物質(zhì)標(biāo)記的ACC氧化（合成）酶基因片段做探針進(jìn)行檢測，理由是____________。11．（15分）下圖是“?；~塘”簡化模式圖，請據(jù)圖回答下列問題：（1）圖中屬于生態(tài)系統(tǒng)基石的生物有_______，它們所需的能量最終都來自于_________。（2）蠶糞中碳元素可以以___________形式被魚食用，這是第_________營養(yǎng)級的同化能量流向魚，而魚產(chǎn)生的糞便可以作為肥料經(jīng)過____________________作用后被桑樹利用。（3）從能量流動的角度分析，蠶糞、豬糞等再度被利用，體現(xiàn)了桑基魚塘能實現(xiàn)能量的多級利用，提高了能量的__________________。該生態(tài)系統(tǒng)中的甘蔗必須在光照時間為11.5h～12.5h時才會開花，這體現(xiàn)了信息傳遞的作用是___________________。（4）科研小組又對蠶的能量流動情況進(jìn)行分析，結(jié)果如表（數(shù)字為能量值，單位是kJ/（cm2?a））蠶攝入的能量蠶糞便中的能量蠶用于生長發(fā)育和繁殖的能量蠶呼吸作用散失的能量47.825.4？21.2（4）據(jù)表分析，蠶用于生長發(fā)育和繁殖等的能量是_________。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、B【解析】

據(jù)圖分析可知：圖示過程為以DNA分子的一條鏈合成RNA的過程，是轉(zhuǎn)錄過程，據(jù)此分析作答?！驹斀狻緼、真核細(xì)胞的線粒體中也可發(fā)生轉(zhuǎn)錄過程，A正確；B、細(xì)胞核內(nèi)形成的①為RNA鏈，在細(xì)胞核內(nèi)完成加工后經(jīng)核孔復(fù)合物運到細(xì)胞核外，該過程不通過膜，B錯誤；C、轉(zhuǎn)錄是RNA合成的主要方式，C正確；D、轉(zhuǎn)錄過程中堿基互補配對方式有A-U、T-A、C-G三種，D正確。故選B。能根據(jù)題圖判斷出轉(zhuǎn)錄過程是解題突破口。2、C【解析】

單克隆抗體的特點：特異性強、靈敏度高、可大量制備?！驹斀狻緼、利妥昔單抗對正?；驉盒訠淋巴細(xì)胞均起作用，A錯誤；B、替伊莫單抗能與CD20特異性結(jié)合，放射性藥物不能，B錯誤；C、鼠源抗體有可能作為抗原，誘發(fā)機體的免疫反應(yīng)，被人體免疫系統(tǒng)破壞，C正確；D、奧美珠單抗只能用于治療B淋巴瘤，不能治療其他癌癥，D錯誤。故選C。3、C【解析】

1、高倍鏡與低倍鏡觀察情況比較物像大小看到細(xì)胞數(shù)目視野亮度物像與裝片的距離視野范圍高倍鏡大少暗近小低倍鏡小多亮遠(yuǎn)大2、低倍鏡換高倍鏡的步驟：低倍鏡下調(diào)清晰，并移動物像到視野中央→轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，換上高倍物鏡→緩緩調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使物像清晰?！驹斀狻坑煞治隹芍阂曇白畎档氖歉弑剁R下的視野，其細(xì)胞特征是細(xì)胞體積大、數(shù)目少，故C符合題意，C正確。故選C。4、A【解析】

分析題圖：圖示為植物體細(xì)胞雜交過程示意圖，其中①表示去壁獲取原生質(zhì)體的過程；②表示人工誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合；③表示再生出新細(xì)胞壁的過程；④表示脫分化過程；⑤表示再分化過程?！驹斀狻緼、該過程所涉及到的原理為細(xì)胞膜的流動性和植物的全能性，A錯誤；B、④表示脫分化過程，⑤表示再分化過程，④和⑤過程細(xì)胞的分裂方式只有有絲分裂，B正確；C.如果番茄為二倍體，馬鈴薯為四倍體，則誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合后獲得的f植株為六倍體，C正確；D、f植株的花藥離體培養(yǎng)形成的植株雖然含有三個染色體組，但由花藥等配子發(fā)育而來的屬于單倍體，D正確。故選A。本題結(jié)合植物體細(xì)胞雜交過程示意圖，考查植物體細(xì)胞雜交和單克隆抗體制備的相關(guān)知識，要求考生識記植物體細(xì)胞雜交的原理、具體過程及意義；識記單克隆抗體制備的原理及具體過程，能準(zhǔn)確判斷圖中各步驟的名稱，再結(jié)合所學(xué)的知識答題。5、D【解析】

某種中性指示劑可用于檢測溶液中的PH變化，當(dāng)溶液為中性時，指示劑為無色，溶液偏堿性時指示劑呈藍(lán)色，溶液為弱酸性時指示劑呈黃色。當(dāng)植物的光合速率大于呼吸速率時，會消耗溶液中的二氧化碳，使溶液偏堿性，指示劑顯示藍(lán)色，當(dāng)植物的光合速率小于呼吸速率時，會釋放二氧化碳進(jìn)入溶液中，使溶液偏酸性，指示劑顯示黃色，當(dāng)植物的光合速率等于呼吸速率時，既不從溶液中吸收二氧化碳，也不釋放二氧化碳進(jìn)入溶液中，溶液偏中性，指示劑顯示無色?！驹斀狻緼、本實驗是通過中性指示劑顏色的變化反應(yīng)培養(yǎng)液中二氧化碳的含量變化，進(jìn)而反應(yīng)光合速率和呼吸速率的大小，而一定濃度的NaHCO3溶液能維持培養(yǎng)液中的二氧化碳恒定，不能反應(yīng)光合速率和呼吸速率的大小，所以不能用一定濃度的NaHCO3溶液代替水溶液，A錯誤；B、本實驗的自變量是光照強度，B錯誤；C、溫度既可影響光合酶的活性也可影響呼吸酶的活性，溫度不同，光合作用吸收CO?量與細(xì)胞呼吸釋放CO?量相等時的光照強度不同，所以不同溫度條件下水草的光補償點不相同，C錯誤；D、無顏色變化，說明水草光合速率等于呼吸速率，此時的光照強度即水草的光補償點，D正確。故選D。6、D【解析】

細(xì)胞核包括核膜（將細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)與細(xì)胞質(zhì)分開）、染色質(zhì)（主要由DNA和蛋白質(zhì)組成）、核仁（與某種RNA（rRNA）的合成以及核糖體的形成有關(guān)）、核孔（核膜上的核孔能實現(xiàn)核質(zhì)之間頻繁的物質(zhì)交換和信息交流）。細(xì)胞核的功能：細(xì)胞核是遺傳物質(zhì)貯存和復(fù)制的場所，是細(xì)胞遺傳和代謝的控制中心?！驹斀狻緼、真核生物包括動物、植物和真菌，植物和真菌細(xì)胞的最外層結(jié)構(gòu)是細(xì)胞壁，但細(xì)胞生命系統(tǒng)的邊界都是細(xì)胞膜，A錯誤；

B、細(xì)胞的信息中心是細(xì)胞核或擬核，代謝的中心是細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)，B錯誤；

C、植物細(xì)胞內(nèi)含色素的細(xì)胞器有葉綠體和液泡，原生質(zhì)層包括細(xì)胞膜、液泡膜以及兩層膜之間的細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞液中的色素不在原生質(zhì)層內(nèi)，C錯誤；

D、動物體內(nèi)只有進(jìn)行有絲分裂和減數(shù)分裂的細(xì)胞才會出現(xiàn)紡錘體，而動物體內(nèi)大部分細(xì)胞高度分化，不具有增殖能力，D正確。

故選D。本題考查細(xì)胞核的結(jié)構(gòu)和功能，突出考查生命觀念、科學(xué)思維等核心素養(yǎng)。二、綜合題：本大題共4小題7、逆轉(zhuǎn)錄和PCR技術(shù)擴增cDNA文庫EcoRⅠ酶和BamHⅠ可以防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接破壞標(biāo)記基因無法篩選（且沒有啟動子）吸收周圍環(huán)境中的DNA分子表達(dá)的綠色熒光蛋白菌落卡那霉素【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA—分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)—抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻浚?）從早期胚胎神經(jīng)細(xì)胞中提取HuC基因的mRNA，通過逆轉(zhuǎn)錄過程合成目的基因，并通過PCR技術(shù)在體外擴增可獲得大量的目的基因，進(jìn)而構(gòu)建出HuC基因的cDNA文庫。（2）構(gòu)建基因表達(dá)載體時，不能破壞運載體上的啟動子、復(fù)制原點，以及運載體上需要保留標(biāo)記基因，為了防止目的基因和質(zhì)粒自身環(huán)化以及目的基因與質(zhì)粒反向連接，常用不同的限制酶切割質(zhì)粒和目的基因，結(jié)合圖示中各種限制酶的酶切位點可知，為獲得HuC基因——綠色熒光蛋白基因的表達(dá)載體，需要對HuC基因和質(zhì)粒選用圖中的EcoRⅠ酶和BamHⅠ酶進(jìn)行切割?？敲顾乜剐曰驗闃?biāo)記基因，若用NotⅠ酶切割，將會導(dǎo)致卡那霉素抗性基因被破壞，且切割后的質(zhì)粒會失去啟動子，使基因表達(dá)載體中缺少標(biāo)記基因無法選擇，且沒有啟動子無法轉(zhuǎn)錄，所以不選擇NotⅠ酶切割質(zhì)粒。（3）用Ca2+處理大腸桿菌使之成為感受態(tài)細(xì)胞，易于吸收周圍環(huán)境中的DNA分子。由于綠色熒光蛋白表達(dá)后會發(fā)綠光，所以實驗過程中可以采用在熒光顯微鏡下觀察表達(dá)的綠色熒光蛋白菌落或者在培養(yǎng)基中添加卡那霉素，篩選出導(dǎo)入表達(dá)載體的大腸桿菌。本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題。8、平胸腺嘧啶（T）DNA連接酶耐高溫變性延伸鑒別和篩選含目的基因的細(xì)胞蔗糖【解析】

1、基因表達(dá)載體的基本結(jié)構(gòu)包括復(fù)制原點、目的基因、標(biāo)記基因、啟動子、終止子等。其中標(biāo)記基因的作用是為了鑒定受體細(xì)胞中是否含有目的基因，從而將含有目的基因的受體細(xì)胞篩選出來，常用的標(biāo)記基因是抗生素抗性基因。根據(jù)題干信息和圖形分析，P0是載體質(zhì)粒，其含有的氨芐青霉素抗性基因（ampr）和四環(huán)素抗性基因（tetr）都屬于標(biāo)記基因，可以用檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細(xì)胞；EcoRV酶為限制酶，其切割質(zhì)粒后悔破壞了四環(huán)素抗性基因（tetr）。2、PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：①模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備；②模板DNA與引物的退火(復(fù)性)：模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至55℃左右，引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結(jié)合；③引物的延伸：DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下，以dNTP為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復(fù)制鏈?！驹斀狻浚?）根據(jù)題意分析，EcoRV酶識別的序列是-GATATC-，并且兩條鏈都在識別序列的堿基的中軸線T與A之間進(jìn)行切割，因此其切出來的線性載體P1為平末端。（2）據(jù)圖分析，目的基因兩側(cè)為粘性末端，且漏出的堿基為A，則在載體P1的兩端需要個加一個胸腺嘧啶堿基T形成具有粘性末端的載體P2，再用DNA連接酶將P2與目的基因連接起來形成重組質(zhì)粒P3。由于在PCR擴增技術(shù)中采用高溫使其變形解旋，因此需要使用的DNA聚合酶具有耐高溫的特點。（3）根據(jù)以上分析可知，PCR技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)步驟包括變性、退火、延伸。（4）根據(jù)以上分析可知，重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因?qū)儆跇?biāo)記基因，其作用是鑒別和篩選含目的基因的細(xì)胞。根據(jù)題意可知，該目的基因是從cDNA文庫中分離獲取的蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體中，在個體水平上鑒定目的基因是否表達(dá)，可以在以蔗糖為唯一碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)大腸桿菌，如果大腸桿菌細(xì)胞內(nèi)目的基因表達(dá)出了蔗糖轉(zhuǎn)運蛋白，該大腸桿菌能夠進(jìn)行正常的生長和繁殖，則說明目的基因完成了表達(dá)過程。本題考查基因工程的知識點，要求學(xué)生掌握限制酶的特點和切割后形成的末端類型，把握基因表達(dá)載體的構(gòu)成過程和組成，識記標(biāo)記基因的作用，掌握基因工程在中PCR擴增目的基因的過程和特點，理解目的基因的檢測和鑒定方法，特別是能夠根據(jù)題意把握在個體水平上的鑒定方法，這是該題考查的重點。9、熱穩(wěn)定DNA聚合DNA分子含有內(nèi)含子非編碼區(qū)等序列，mRNA分子中沒有相應(yīng)互補的堿基序列X基因兩端的部分脫氧核苷酸序列使X基因能定向插入表達(dá)載體，減少自連農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射法抗原-抗體雜交【解析】

1、有關(guān)PCR技術(shù)的相關(guān)知識：（1）概念：PCR全稱為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。（2）原理：DNA復(fù)制。（3）前提條件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物。（4）過程：①高溫變性：DNA解旋過程；②低溫復(fù)性：引物結(jié)合到互補鏈DNA上；③中溫延伸：合成子鏈。PCR擴增中雙鏈DNA解開不需要解旋酶，高溫條件下氫鍵可自動解開。2、基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。【詳解】（1）在PCR過程中，兩個引物是熱穩(wěn)定DNA聚合酶的結(jié)合位點；用cDNA單鏈與該抗性水稻植株的單鏈DNA進(jìn)行分子雜交，由于DNA分子含有內(nèi)含子、非編碼區(qū)等序列，mRNA分子中沒有相應(yīng)互補的堿基序列，因此逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA中缺少該序列，所以出現(xiàn)游離的單鏈區(qū)。（2）用PCR技術(shù)擴增X基因時，設(shè)計兩種引物的堿基序列的主要依據(jù)是X基因兩端的部分脫氧核苷酸序列，為了便于擴增后的X基因與質(zhì)粒連接，常在兩條引物上設(shè)計加入不同的限制酶酶切位點，主要目的是使X基因能定向插入表達(dá)載體，減少酶切產(chǎn)物自身環(huán)化。（3）將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，農(nóng)桿菌能在自然條件下感染雙子葉植物和裸子植物，將質(zhì)粒上的T-DNA轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞。將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞常用顯微注射法，這也是將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法。（4）若要檢測抗稻瘟病基因是否翻譯出相應(yīng)蛋白質(zhì)，分子水平上可采用抗原-抗體雜交法進(jìn)行檢測。本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)問題，識記PCR技術(shù)的原理和過程，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題。10、果實RNAXbalBamHl和Sacl反向卡那霉素不能番茄細(xì)胞內(nèi)本來存在ACC合成酶基因，能與ACC合成酶基因探針發(fā)生分子雜交【解析】

分析題意和題圖：番茄細(xì)胞中原有靶基因控制合成的ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄細(xì)胞合成乙烯的兩個關(guān)鍵酶。圖1所示為反義基因轉(zhuǎn)錄成的RNA可與靶基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA形成RNA雙鏈，使靶mRNA不能與核糖體結(jié)合或被RNA酶降解，從而阻止了ACC氧化酶和ACC合成酶的合成，影響細(xì)胞中乙烯的合成，使番茄具有耐儲存、宜運輸?shù)膬?yōu)點。圖2所示的基因表達(dá)載體的組成包括復(fù)制原點、啟動子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因，目的基因插入點在啟動子和終止子之間?！驹斀狻浚?）乙烯具有促進(jìn)果實成熟的作用，因此圖2中的2A11為特異性啟動子，則2A11應(yīng)在番茄的果實中表達(dá)。（2）從番茄成熟果實中提取RNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄法合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因，以進(jìn)行拼接構(gòu)成融合基因并擴增。（3）合成出的ACC氧化酶基因兩端分別含限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的酶切位點，ACC合成酶基因兩端含SacⅠ和XbaⅠ的酶切位點，要將兩個基因融合，需用同一種限制酶即XbaⅠ酶對上述兩個基因進(jìn)行酶切，再用DNA連接酶串聯(lián)成融合基因，這樣融合基因上有三個限制酶切點：BamHⅠ、XbaⅠ、SacⅠ，其中限制酶BamHⅠ、S