注冊(cè)審評(píng)對(duì)PD-L1檢測(cè)試劑性能研究的關(guān)注點(diǎn)

注冊(cè)審評(píng)對(duì)PD-L1檢測(cè)試劑性能研究的關(guān)注點(diǎn)（中國(guó)器審2024年07月11日）程序性死亡配體1（programmed-deathligand1，PD-L1）是程序性死亡受體1（programmed-Death1，PD1）的主要配體，為Ⅰ型跨膜蛋白，參與細(xì)胞調(diào)節(jié)和免疫反應(yīng)，廣泛表達(dá)于抗原提呈細(xì)胞和非淋巴組織等。PD-1與PD-L1結(jié)合后，下游的脾酪氨酸激酶和磷脂酰肌醇3激酶發(fā)生去磷酸化，從而傳遞抑制性信號(hào)，發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用。腫瘤細(xì)胞可能表達(dá)PD-L1，PD-L1與PD-1結(jié)合，使腫瘤細(xì)胞逃避T細(xì)胞的攻擊。PD-1/PD-L1通路的阻斷現(xiàn)已證明可用于多種癌癥類型的治療，腫瘤細(xì)胞和/或腫瘤相關(guān)免疫細(xì)胞的PD-L1表達(dá)水平與免疫治療療效及患者預(yù)后密切相關(guān)。國(guó)內(nèi)外指南文件和專家共識(shí)推薦將PD-L1作為多種腫瘤免疫治療的生物標(biāo)志物，以識(shí)別或輔助預(yù)測(cè)可能從免疫治療中獲益的患者。免疫組織化學(xué)方法是評(píng)估PD-L1表達(dá)狀態(tài)的有效且最常用方法。目前我國(guó)已批準(zhǔn)丹麥DAKO、美國(guó)Ventana、廈門艾德、蘇州邁杰公司生產(chǎn)的多項(xiàng)檢測(cè)試劑，用于納武利尤單抗等免疫抑制劑的伴隨診斷或補(bǔ)充診斷。此類產(chǎn)品較一般免疫組織化學(xué)檢測(cè)試劑而言，具有預(yù)期用途變化快、評(píng)分規(guī)則復(fù)雜、陽性判斷值來源于藥品臨床試驗(yàn)三個(gè)突出特點(diǎn)。針對(duì)PD-L1檢測(cè)試劑的特殊性，注冊(cè)審評(píng)應(yīng)予以特殊關(guān)注并提出相應(yīng)的研究要求。一、產(chǎn)品技術(shù)要求產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)主要包括以下性能指標(biāo)：外觀、符合性、批內(nèi)重復(fù)性、批間重復(fù)性、穩(wěn)定性等?？紤]到PD-L1表達(dá)在不同腫瘤組織存在差異，其中“符合性”和“重復(fù)性”指標(biāo)，應(yīng)明確采用包含不同表達(dá)水平的適用腫瘤組織類型組織片進(jìn)行檢測(cè)。二、分析性能研究（一）免疫反應(yīng)性1.正常組織：對(duì)30種正常人體組織，每種組織類型不少于3例，進(jìn)行特異性評(píng)價(jià)，同時(shí)對(duì)著色位置及染色特點(diǎn)進(jìn)行描述。2.非正常組織：對(duì)相關(guān)良性、惡性病變組織進(jìn)行特異性評(píng)價(jià)。如有采用申報(bào)產(chǎn)品為試驗(yàn)材料進(jìn)行研究的相關(guān)文獻(xiàn)資料，也可提交文獻(xiàn)資料驗(yàn)證抗體試劑或檢測(cè)試劑盒與非正常組織的免疫反應(yīng)性。非正常組織包括：腎上腺皮質(zhì)癌、星形細(xì)胞癌、基底細(xì)胞癌、鱗狀上皮癌、大細(xì)胞癌、胸腺瘤、乳頭狀腺癌、小細(xì)胞未分化癌、鱗狀細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜透明細(xì)胞癌、移行細(xì)胞癌，淋巴瘤、惡性室管膜瘤、間質(zhì)肉瘤等。（二）特異性1.交叉反應(yīng)研究應(yīng)進(jìn)行與PD-1、PD-L2的交叉反應(yīng)研究，可利用免疫組織化學(xué)方法對(duì)表達(dá)不同蛋白的細(xì)胞/組織檢測(cè)，驗(yàn)證抗體的特異性。也可利用其它合理的方法進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。2.特異性識(shí)別研究采用免疫印記法或酶聯(lián)免疫法驗(yàn)證檢測(cè)試劑可特異性檢測(cè)PD-L1的性能。通過添加PD-L1抗原進(jìn)行檢測(cè)或檢測(cè)PD-L1基因敲除腫瘤細(xì)胞等方法，驗(yàn)證檢測(cè)試劑的特異性。（三）精密度考慮到不同PD-L1檢測(cè)試劑的評(píng)分規(guī)則具有較大差異，臨床中PD-L1表達(dá)情況的判讀在室間和人員間存在明顯差異，此類試劑的精密度評(píng)價(jià)應(yīng)更加充分，并在試驗(yàn)設(shè)計(jì)中考慮各項(xiàng)影響因素。精密度研究應(yīng)采用隨機(jī)盲法進(jìn)行，樣本應(yīng)為消除識(shí)別信息的預(yù)期樣本（未染色樣本），包括陰性、陽性及一定數(shù)量（建議不少于總樣本量的20%）陽性判斷值附近樣本，研究數(shù)據(jù)應(yīng)包含染色強(qiáng)度、評(píng)分結(jié)果及著色位置，采用合理的統(tǒng)計(jì)方法（如WilsonScore法）計(jì)算陰性一致率百分比（NegativePercentAgreement，NPA）、陽性一致率百分比（PositivePercentAgreement，PPA）、總體一致率（overallagreement,OPA）及雙側(cè)95%置信區(qū)間，并統(tǒng)計(jì)不同表達(dá)范圍水平%的一致率。研究應(yīng)制定適當(dāng)?shù)慕邮軜?biāo)準(zhǔn)，建議一致率95%置信區(qū)間下限不低于85%。1.內(nèi)部重復(fù)性（1）檢測(cè)內(nèi)精密度：對(duì)連續(xù)切片的預(yù)期組織類型樣本，進(jìn)行檢測(cè)重復(fù)性研究。（2）檢測(cè)間精密度對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，包括批次（不少于3批次）、適用機(jī)型、操作方法（手工/自動(dòng)）、日間和閱片者間。同一閱片者兩次閱片之間應(yīng)設(shè)置合理的清除期。2.外部重復(fù)性在至少3個(gè)外部檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行研究，研究應(yīng)包含對(duì)非連續(xù)日間、不同閱片者間、不同外部實(shí)驗(yàn)室間的評(píng)價(jià)。（四）靈敏度研究對(duì)不同分期、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性腫瘤的預(yù)期組織類型樣本的檢出能力。研究樣本應(yīng)包含不同表達(dá)水平%（0至100%）和染色強(qiáng)度，并計(jì)算所有樣本檢測(cè)的陽性率和不同染色強(qiáng)度的陽性樣本比例。（五）參加國(guó)內(nèi)外質(zhì)控機(jī)構(gòu)的質(zhì)控活動(dòng)情況建議企業(yè)積極參加國(guó)內(nèi)（衛(wèi)生計(jì)生委病理質(zhì)控評(píng)價(jià)中心）、國(guó)際質(zhì)控機(jī)構(gòu)（NordiQC、UKNEQUAS、CAP等）的質(zhì)控活動(dòng)，并提交質(zhì)控結(jié)果報(bào)告。三、陽性判斷值研究此類產(chǎn)品的陽性判斷值在藥品的臨床試驗(yàn)中確定，來源于藥物臨床試驗(yàn)的療效數(shù)據(jù)。典型的陽性判斷值研究包含建立和驗(yàn)證兩部分，兩部分研究樣本應(yīng)相互獨(dú)立。建立陽性判斷值使用的樣本應(yīng)滿足藥物臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)并考慮到不同的地理區(qū)域、民族（種族）、性別、年齡、不同病理分期等因素?？刹捎没谠u(píng)價(jià)指標(biāo)如客觀緩解率（ORR）的最佳總體反應(yīng)繪制受試者工作特征曲線（receiveroperatingcharac