水質(zhì) 雙酚類化合物的測定 高效液相色譜法（征求意見稿）

21Waterquality-Determinationofbisphenolcompounds-Highperformanceliquidch（征求意見稿）在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。IDB21/TXXXX—XXXX前言 II1適用范圍 2規(guī)范性引用文件 3方法原理 4試劑和材料 5儀器和設(shè)備 26樣品 37分析步驟 48結(jié)果計算與表示 59準確度 610質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 611廢物處置 712注意事項 7附錄A（規(guī)范性）方法的檢出限和測定下限 8附錄B（資料性）方法的準確度 9DB21/TXXXX—XXXX為貫徹《中華人民共和國環(huán)境保護法》《中華人民共和國水污染防治法》，防治生態(tài)環(huán)境污染，改善生態(tài)環(huán)境質(zhì)量，規(guī)范水中雙酚類化合物的測定方法，制定本文件。本文件為首次發(fā)布。本文件按照GB/T1.1-2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準化文件結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構(gòu)不承擔(dān)識別專利的責(zé)任。本文件由遼寧省生態(tài)環(huán)境廳提出并歸口。本文件主要起草單位：遼寧省葫蘆島生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心。本文件主要起草人：張哲、楊惠、宋大英、趙宇、張明洋、付曉燕、付征宇、苑芷茜、陶冶、么洪波、郭振江、王文華、于志輝、張旭鴻、張立劍、李赫、李玉博、付嬈、于群、滕維新。本文件發(fā)布實施后，任何單位和個人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進行反饋，我們將及時答復(fù)并認真處理，根據(jù)實際情況依法進行評估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省生態(tài)環(huán)境廳（遼寧省沈陽市渾南區(qū)雙園路30號甲），聯(lián)系電話標準起草單位通訊地址：遼寧省葫蘆島生態(tài)環(huán)境監(jiān)測中心（遼寧省葫蘆島市龍港區(qū)龍灣大街24號聯(lián)系電話1DB21/TXXXX—XXXX水質(zhì)雙酚類化合物的測定高效液相色譜法警告：實驗中所使用的甲醇、乙腈、雙酚類化合物、丙酮屬于有毒有機物，實驗操作時應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，溶液配制過程應(yīng)在通風(fēng)櫥內(nèi)進行，操作時應(yīng)按規(guī)定要求佩戴防護器具，避免吸入呼吸道、接觸皮膚和衣物。1適用范圍本文件規(guī)定了測定水中雙酚類化合物的高效液相色譜法。本文件適用于地表水、地下水、生活污水和工業(yè)廢水中雙酚A、雙酚B、雙酚AP、雙酚Z、四甲基雙酚A、雙酚P等6種雙酚類化合物的測定。當取樣體積為250ml，試樣的定容體積為1.0ml，進樣體積為20μl時，方法檢出限為0.03μg/L~0.06μg/L，測定下限為0.12μg/L~0.24μg/L。詳見附錄A。2規(guī)范性引用文件本文件引用了下列文件或其中的條款。凡是注明日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。HJ91.1污水監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ91.2地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ164地下水環(huán)境監(jiān)測技術(shù)規(guī)范HJ168環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制定技術(shù)導(dǎo)則HJ493水質(zhì)樣品的保存和管理技術(shù)規(guī)定3方法原理水中的雙酚類化合物在酸性條件下，經(jīng)固相萃取富集、凈化、洗脫、濃縮后使用具有熒光檢測器的高效液相色譜儀測定，根據(jù)保留時間定性，外標法定量。4試劑和材料除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑，實驗用水為新制備的不含目標化合物的超純水；實驗中所使用的玻璃器具需要用去污劑清洗、自來水沖洗和超純水淋洗，自然晾干，以除去可能來自于環(huán)境中的雙酚類化合物。為避免雙酚物的污染，實驗過程中盡量不使用塑料制品，確需使用的塑料或其他材質(zhì)的制品，應(yīng)進行空白試驗。4.1硫代硫酸鈉（Na2S2O3·5H2O)：優(yōu)級純。2DB21/TXXXX—XXXX4.2鹽酸（HCl）：ρ（HCl）=1.19g/ml，優(yōu)級純。4.3鹽酸溶液：φ（HCl）=50%量取100ml鹽酸（4.2），緩慢加入到100ml實驗用水中，混勻。4.4甲醇（CH3OH）：色譜純。4.5甲醇溶液：φ（CH3OH）=30%。分別量取30ml甲醇（4.4）和70ml實驗用水，混勻。4.6乙腈（CH3CN）：色譜純。4.7超純水：電阻率>18.2MΩ·cm（25℃),不含目標化合物。4.8二氯甲烷（CH2Cl2農(nóng)殘級。4.9丙酮（CH3COCH3）：農(nóng)殘級。4.10雙酚A：純度為≥99.9%。4.11雙酚B：純度為≥99.23%。4.12雙酚P：純度為≥97.4%。4.13雙酚Z：純度為≥99.6%。4.14雙酚AP：純度為≥99.9%。4.15四甲基雙酚A：純度為≥99.9%。4.16雙酚類標準貯備液：ρ=1000μg/ml。分別稱取0.0100g雙酚A（4.10）、雙酚B（4.11）、雙酚P（4.12）、雙酚Z（4.13）、雙酚AP（4.14）和四甲基雙酚A（4.15）置于50ml玻璃燒杯中，加少量甲醇（4.4）溶解，轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，用甲醇（4.4）稀釋至標線，混勻。制備的標準貯備液于4℃以下冷藏、密封、避光保存，保存期為1年。也可購買市售有證標準溶液，按標準溶液證書保存。4.17雙酚類標準中間液：ρ=100μg/ml。準確移取1.00ml雙酚類標準貯備液（4.16）于10ml容量瓶中，用甲醇（4.4）定容至標線，標準中間液于4℃以下，冷藏、密封、避光保存，保存期為6個月。4.18雙酚類標準使用液：ρ=10μg/ml。準確移取1.00ml雙酚類標準中間液（4.17）于10ml容量瓶中，用甲醇（4.4）定容至標線，標準使用液于4℃以下，冷藏、密封、避光保存，保存期為6個月。4.19石英濾膜：孔徑為0.45μm，使用前在400℃的馬弗爐中烘烤2h。4.20針頭過濾器：有機系，孔徑為0.45μm，經(jīng)甲醇（4.4）清洗晾干，確保沒有目標物。4.21氮氣：純度≥99.99%。5儀器和設(shè)備5.1采樣瓶：250ml，棕色細口玻璃瓶，配玻璃塞。使用前可用實驗用水、丙酮（4.9）依次清洗。3DB21/TXXXX—XXXX5.2高效液相色譜儀：具熒光檢測器。5.3色譜柱：填料粒徑5μm，柱長25cm，內(nèi)徑4.6mm的C18反相色譜柱，或其他等效色譜柱。5.4濃縮裝置：氮吹儀或其他性能相當?shù)臐饪s裝置。5.5固相萃取裝置：自動或手動固相萃取儀，可連固相萃取柱。5.6固相萃取柱：500mg/6ml，聚丙烯或者玻璃材質(zhì)，填料為C18或苯乙烯和二乙烯苯共聚物，或其他等效固相萃取柱。5.7玻璃注射器：5ml。5.8微量注射器：50μl、100μl、250μl、1000μl。5.9量筒：50ml、100ml、250ml。5.10玻璃燒杯：50ml、250ml。5.11容量瓶：10ml。5.12過濾裝置：配有砂芯濾器和真空泵，抽濾壓力勿超過-50kPa。5.13樣品超聲波提取儀：超聲頻率不低于40kHz，具備水溫監(jiān)控功能，保證樣品充分接受超聲萃取。5.14一般實驗室常用儀器和設(shè)備。6樣品6.1樣品的采集與保存按照HJ91.1、HJ91.2、HJ164的相關(guān)規(guī)定進行樣品采集和保存。用采樣瓶（5.1）采集樣品，如樣品中含有余氯，需向250ml樣品中加入硫代硫酸鈉（4.1）去除干擾，加50%鹽酸溶液（4.3）調(diào)節(jié)樣品pH值為1～2。樣品應(yīng)充滿250ml采樣瓶（5.1）并加蓋密封，于4℃以下冷藏、避光保存，7d內(nèi)完成分析。每批次樣品應(yīng)至少采集1個全程序空白樣品，將250ml實驗用水放入樣品瓶中密封，并帶到采樣現(xiàn)場，與采樣樣品瓶同時開蓋和密封，之后隨樣品運回實驗室。6.2試樣的制備6.2.1過濾準確量取250ml樣品經(jīng)石英濾膜（4.19）過濾，濾液置于250ml玻璃燒杯（5.10）中，全部用于固相萃取。過濾后的石英濾膜放入10ml玻璃管中，加入適量甲醇（4.4）使濾膜完全浸沒于甲醇中，超聲提取10min，將超聲提取液經(jīng)針頭過濾器（4.20）過濾后收集至濃縮瓶中。注：若樣品中不存在肉眼可見的懸浮物，無需過濾，準確量取250ml樣品進行固相萃取即可。6.2.2固相萃取1）柱活化依次用5ml甲醇（4.4）和5ml超純水活化固相萃取柱（5.6），在活化過程中，應(yīng)確保固相萃取柱中填料表面不露出液面。4DB21/TXXXX—XXXX2）上樣將過濾后的樣品（6.2.1），以3ml/min～5ml/min的流速通過固相萃取柱。3）淋洗上樣結(jié)束后，用10ml甲醇溶液（4.5）淋洗固相萃取柱（5.6），去除固相萃取柱上的雜質(zhì)，然后用氮氣（4.21）吹干固相萃取柱。4）洗脫以2ml/min～4ml/min的流速，分別用2ml甲醇（4.4）和5ml二氯甲烷（4.8）洗脫，收集洗脫液至濃縮瓶中。注1：其他固相萃取的方式，經(jīng)驗證滿足要求，6.2.3濃縮再濃縮至約1ml，將溶劑完全置換為甲醇后，用甲醇（4.4）定容至1.0ml，用針頭過濾器（4.20）過濾后待測。注：置換溶劑時，不要將溶劑吹干，重復(fù)置換操作2～3次。6.3空白試樣的制備6.3.1實驗室空白用實驗用水代替樣品，按照與試樣的制備（6.2）相同的操作步驟，制備實驗室空白試樣。6.3.2全程序空白全程序空白樣品（6.1），按照與試樣的制備（6.2）相同的操作步驟，制備全程序空白試樣。7分析步驟7.1色譜參考條件流動相A：乙腈（4.6）70%，流動相B：實驗用水30%；柱溫：30℃;進樣體積：20μL；熒光檢測器：激發(fā)波長227nm，發(fā)射波長313nm；梯度洗脫程序見表1。表1梯度洗脫程序注：不具自動清洗程序的儀器，可在10min后延長2~3min7.2標準曲線的建立移取一定量的雙酚類標準使用液（4.18），用甲醇（4.4）逐級稀釋，配制至少5個濃度點的標準系列，各組分質(zhì)量濃度分別為50.0μg/L、100μg/L、250μg/L、500μg/L、1000μg/L（此為參考濃度），5DB21/TXXXX—XXXX按照色譜參考條件（7.1），由低濃度到高濃度依次進樣，以目標化合物濃度為橫坐標，以峰面積（或峰高）為縱坐標，建立熒光檢測器的標準曲線。7.3試樣的測定將制備好的試樣（6.2），按照與繪制工作曲線相同的測定條件（7.2）進行測定。當試樣濃度超出標準曲線濃度范圍時，應(yīng)適當稀釋后測定。7.4空白試驗按照與試樣的測定（7.3）相同的步驟，進行空白試樣（6.3）的測定。8結(jié)果計算與表示8.1定性分析根據(jù)樣品中目標化合物與標準系列中目標化合物的保留時間進行定性。必要時可以用高效液相色譜-質(zhì)譜儀做進一步確認。在本文件規(guī)定的色譜參考條件（7.1）下，目標化合物的標準色譜圖見圖1。圖1雙酚類化合物標準色譜圖（P＝500μg/L）8.2結(jié)果計算樣品中目標化合物的濃度，按照公式（1）進行計算。式中：P樣品中目標化合物的濃度，μg/L;P1由標準曲線計算所得的目標化合物濃度，μg/L;V1試樣的定容體積，ml；V取樣體積，ml；D試樣的稀釋倍數(shù)。6DB21/TXXXX—XXXX注：當試樣濃度超出標準曲線的范圍，應(yīng)對試樣進行稀釋。8.3結(jié)果表示測定結(jié)果小數(shù)點后的位數(shù)與方法檢出限一致，最多保留3位有效數(shù)字。9準確度9.1精密度3家實驗室分別對加標樣品進行6次重復(fù)測定，加標量分別為實驗用水0.050μg、地下水0.200μg和工業(yè)廢水0.750μg。實驗室內(nèi)相對標準偏差分別為：1.7%~9.0%，0.30%~8.7%，0.20%~5.5%。實驗室間相對標準偏差分別為：2.3%~16%，8.8%~16%，1.5%~9.6%。重復(fù)性限范圍分別為：0.01μg~0.01μg，0.02μg~0.03μg，0.04μg~0.07μg。再現(xiàn)性限范圍分別為：0.01μg~0.02μg，0.05μg~0.08μg，0.07μg~0.2μg。精密度結(jié)果參見附錄B中表B.1。9.2正確度3家實驗室分別對加標樣品進行6次重復(fù)測定，加標量分別為實驗用水0.050μg、地下水0.200μg、地表水0.500μg、生活污水0.500μg和工業(yè)廢水0.750μg。實驗用水加標回收率范圍為：71.3%~109%，加標回收率最終值為95.0%±19.3%。地下水加標回收率范圍為：70.2%~105%，加標回收率最終值為89.7%±21.6%。地表水加標回收率范圍為：72.5%~111%，加標回收率最終值為92.6%±22.1%。生活污水加標回收率范圍為：61.2%~107%，加標回收率最終值為85.6%±25.5%。工業(yè)廢水加標回收率范圍為：73.4%~101%，加標回收率最終值為85.4%±15.1%。正確度結(jié)果參見附錄B中表B.2。10質(zhì)量保證和質(zhì)量控制10.1空白試驗每20個樣品或批次(≤20個樣品）應(yīng)至少測定1個實驗室空白樣品和1個全程序空白樣品，測定結(jié)果應(yīng)小于方法檢出限。10.2標準曲線每批樣品應(yīng)繪制標準曲線，標