奶牛場布魯氏菌病凈化技術規(guī)范DB41-T 2067-2020

ICS65.020.30

CCSB41

41

河南省地方標準

DB41/T2067—2020

奶牛場布魯氏菌病凈化技術規(guī)范

2020-12-30發(fā)布2021-03-30實施

河南省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB41/T2067—2020

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：新鄉(xiāng)市動物疫病預防控制中心、河南科技學院、河南省動物疫病預防控制中心。

本文件主要起草人：荊汝頂、秦保亮、李春艷、杜海燕、王英華、馮春花、朱方兵、馬健、牛可可、

孫照霞、王超、胡元春、郝曉鵬、姜金慶、劉長忠、常衛(wèi)波、趙智燦、李磊。

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奶牛場布魯氏菌病凈化技術規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了奶牛場布魯氏菌病的診斷、凈化、維持、生物安全與防護等要求。

本文件適用于獨立封閉飼養(yǎng)規(guī)模100頭以上奶牛場布魯氏菌病的凈化。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T18646—2018動物布魯氏菌病診斷技術

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.布魯氏菌病防治技術規(guī)范.2007

中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部.跨省調運乳用種用動物產(chǎn)地檢疫規(guī)程.2019

中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.病死及病害動物無害化處理技術規(guī)范.2017

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

3.1

布魯氏菌病

由布魯氏菌屬細菌引起的人獸共患傳染病。

3.2

布魯氏菌病凈化

對奶牛場采取一系列防控措施，用血清學檢測血清均為陰性，奶牛場連續(xù)2年無個體發(fā)病和無感染

狀態(tài)，即達到布魯氏菌凈化標準。

4診斷

4.1臨床診斷

4.1.1流行特點

布魯氏菌?。ㄒ韵潞喎Q“布病”）是由布魯氏菌引起的一種細胞內寄生疾病，主要侵害動物的淋巴

系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)。病畜主要通過流產(chǎn)物、精液和乳汁排菌，污染環(huán)境。母畜比公畜，成年畜比幼年畜發(fā)

病多。在母畜中，第一次妊娠母畜發(fā)病較多。帶菌動物，尤其是病畜的流產(chǎn)胎兒、胎衣是主要傳染源。

消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途徑，也可通過損傷的皮膚、黏膜等感染。常呈地方性流行。

4.1.2臨床癥狀

潛伏期一般為14d～180d。最顯著癥狀是懷孕母畜發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)后可能發(fā)生胎衣滯留和子宮內

膜炎，從陰道流出污穢不潔、惡臭的分泌物。新發(fā)病的畜群流產(chǎn)較多；老疫區(qū)畜群發(fā)生流產(chǎn)的較少，但

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發(fā)生子宮內膜炎、乳房炎、關節(jié)炎、胎衣滯留、久配不孕的較多。公畜往往發(fā)生睪丸炎、附睪炎或關節(jié)

炎。

4.1.3剖檢病變

警示——對本病疑似病例剖檢采樣過程中應當嚴格按照相關生物安全要求，防止病原微生物擴散及

人員感染。

主要病變?yōu)樯称鞴俚难仔詨乃?，脾、淋巴結、肝、腎等器官形成特征性肉芽腫（布病結節(jié)）。有

的可見關節(jié)炎。胎兒主要呈敗血癥病變，漿膜和黏膜有出血點和出血斑，皮下結締組織發(fā)生漿液性、出

血性炎癥。

4.2實驗室診斷

4.2.1血清學診斷

4.2.1.1虎紅平板凝集試驗（RBT）（按GB/T18646—2018規(guī)定）

4.2.1.2乳牛全乳環(huán)狀試驗(MRT)（按GB/T18646—2018規(guī)定）

4.2.1.3試管凝集試驗(SAT)（按GB/T18646—2018規(guī)定）

4.2.1.4補體結合試驗(CFT)（按GB/T18646—2018規(guī)定）

4.2.1.5間接酶聯(lián)免疫吸附試驗（iELISA）（按GB/T18646—2018規(guī)定）

4.2.1.6競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗（cELISA）（按GB/T18646—2018規(guī)定）

4.2.2病原學診斷

警示——以下病原學操作包括但不僅限于涂片染色鏡檢、分離培養(yǎng)、聚合酶鏈式反應（PCR）檢測

中涉及細菌活菌操作等，均應在BSL-3級生物安全實驗室內進行，操作人員應采取針對性防護措施。

4.2.2.1涂片染色鏡檢按《布魯氏菌病防治技術規(guī)范》要求采集流產(chǎn)胎衣、絨毛膜水腫液、肝、脾、

淋巴結、胎兒胃內容物等組織，按GB/T18646—2018規(guī)定制成抹片，布魯氏菌體染成紅色球桿狀小桿

菌，而其它菌為藍色。

4.2.2.2分離培養(yǎng)按《布魯氏菌病防治技術規(guī)范》要求，新鮮病料可用胰蛋白瓊脂面或血液瓊脂斜

面、肝湯瓊脂斜面、3%甘油0.5%葡萄糖肝湯瓊脂斜面等培養(yǎng)基培養(yǎng)；若為陳舊病料或污染病料，可用

選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)。組織樣品、陰道沖洗液、精液、關節(jié)液、胃內容物、乳樣按GB/T18646—2018規(guī)

定處理，每份樣品均一式兩份，分別置于普通培養(yǎng)箱和5%～10%二氧化碳培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)3d～10d。

4.2.2.3聚合酶鏈式反應（PCR）檢測主要包括普通PCR和熒光定量PCR，普通PCR操作方法按GB/T

18646—2018第4章13節(jié)布魯氏菌Bruce-Ladder檢測方法操作，熒光定量PCR可按商品化試劑盒操作。

4.3結果判定

4.3.1具有4.1時，判定為疑似病例。

4.3.2符合4.1，且4.2.1.1或4.2.1.2陽性時，判定為患病奶牛。

4.3.3未免疫場奶牛的結果判定如下：

a)4.2.1.1或4.2.1.2或4.2.1.5陽性時，判定為疑似患病奶牛；

b)4.2.1.3或4.2.1.4或4.2.1.6或4.2.2診斷陽性時，判定為患病奶牛；

c)符合疑似患病奶牛但4.2.1.3或4.2.1.4或4.2.1.6陰性時，30d后應重新采樣檢測，4.2.1.1

或4.2.1.3或4.2.1.4或4.2.1.6陽性的判定為患病奶牛。

4.3.4免疫場動物的結果判定如下：

a)開展奶牛場布魯氏菌病凈化應連續(xù)兩年以上未進行布病疫苗免疫；

b)免疫場奶牛最后一次布病疫苗免疫后間隔二年后，按照4.3.3進行判定；

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c)對免疫背景不清的奶牛場，具有4.1時，按照4.2.2.3普通PCR進行毒株鑒別，田間流行毒

株檢測陽性的按患病動物處置。

5凈化

5.1凈化要求

以奶牛場為單位，連續(xù)2年無臨床病例，且按4.2.1血清學監(jiān)測結果連續(xù)1年以上無陽性。

5.2技術路線

按照檢測、隔離、撲殺相結合的策略，對奶牛場進行凈化；疑似病例一旦確診為布病陽性牛，直接

撲殺；同欄疑似病例及陰性牛群分別進行隔離觀察，間隔3個月后按4.2.1進行血清學檢測，檢測結果仍

為陽性者進行撲殺，同時加強消毒和提高綜合飼養(yǎng)管理水平等措施，提高布病凈化工作效果。

5.3凈化過程

5.3.1犢牛檢測、隔離、撲殺

犢牛于20日齡時采用4.2.1.1琥紅平板凝集試驗（RBT）或4.2.1.5間接酶聯(lián)免疫吸附試驗（iELISA）

進行第一次普檢，100～120日齡時，進行第二次普檢。對檢出陽性牛隔離并采用4.2.1.3試管凝集試驗

(SAT)或4.2.1.6競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗（cELISA）進行復核，對確診陽性畜進行撲殺；間隔3個月再次

普檢，撲殺確診陽性牛。陰性牛參照假定健康牛群管理。

5.3.2布病疑似牛群檢測、隔離、撲殺

采用4.2.1.1琥紅平板凝集試驗（RBT）或4.2.1.5間接酶聯(lián)免疫吸附試驗（iELISA）對污染牛群進

行普檢，以后每間隔3個月進行1次普檢，對檢出陽性牛隔離并采用4.2.1.3試管凝集試驗(SAT)或4.2.1.6

競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗（cELISA）進行復核，對確診陽性牛進行撲殺，直至全部陰性。

5.3.3假定健康牛群檢測

每年春、秋兩季各進行一次普檢，采用4.2.1.1琥紅平板凝集試驗（RBT）或4.2.1.5間接酶聯(lián)免疫

吸附試驗（iELISA）初篩，疑似陽性牛按5.3.2進行處置管理。

5.3.4持續(xù)監(jiān)測

5.3.4.1連續(xù)2次以上試管凝集試驗(SAT)或競爭酶聯(lián)免疫吸附試驗（cELISA）檢測結果均陰性的畜群

為布病凈化畜群，否則按照凈化步驟循環(huán)進行。

5.3.4.2每次樣品的采集、檢測、陽性牛的處理均應在10天內完成。

5.3.4.3凈化畜群建立后，每6個月按全群20%的比例采集血清樣品進行1次抗體監(jiān)測，以持續(xù)維持

凈化畜群的健康狀態(tài)。

5.3.4.4按照《跨省調運乳用種用動物產(chǎn)地檢疫規(guī)程》進行檢疫，奶牛引入必須來自于非疫區(qū)，調入

后應隔離飼養(yǎng)45d，經(jīng)當?shù)貏游锓酪弑O(jiān)督機構檢疫合格后，方可混群飼養(yǎng)。

6生物安全與防護

6.1人員防護

6.1.1采樣人員防護

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采樣前，采樣人員需佩戴一次性醫(yī)用乳膠手套、口罩、帽子、鞋套，著工作服，必要時佩戴護目鏡。

對采樣器械進行消毒。采樣結束后，收集采樣物品進行消毒處理，并更換衣服清洗消毒。

6.1.2檢測人員防護

應在符合相應級別生物安全實驗室中操作，病原分離培養(yǎng)需在BSL-3級實驗室操作，未經(jīng)培養(yǎng)的感

染性材料和滅活性實驗在BSL-2級實驗室操作。檢測人員需佩戴一次性醫(yī)用乳膠手套、口罩、帽子、鞋

套，著工作服、護目鏡。

6.1.3飼養(yǎng)人員防護

進入圈舍佩戴口罩、穿工作服、膠鞋等必備的防護用品，避免破損皮膚接觸牲畜的排泄物、分泌物。

犢牛助產(chǎn)和處理流產(chǎn)胎兒、死胎兒時，除備有工作服、橡皮圍裙、帽子、口罩和膠鞋外，還應戴乳膠手

套和長袖橡膠手套，備有接羔袋和消毒液，禁止赤手接觸流產(chǎn)胎兒，接產(chǎn)后進行自身清洗消毒。

6.2環(huán)境消毒

6.2.1地面消毒

采用氫氧化鈉和生石灰等堿類消毒劑。用2%氫氧化鈉水溶液，噴灑6h～12h后用清水沖洗干凈，

生石灰應加等重量的水，均勻灑布于需消毒場所。

6.2.2圈舍消毒

可選用2%燒堿等有效消毒藥進行噴灑消毒。

6.2.3設施工具消毒

對金屬設施、設備采取火焰、熏蒸等方式消毒。

對運輸病畜的車輛和其它工具選用過氧乙酸、次氯酸、二氧化氯等消毒劑進行噴灑消毒。

6.3病死動物處理

6.3.1家畜的流產(chǎn)胎兒、胎盤、胎衣或死胎等，采取深埋或焚燒等方法進行無害化處理；流產(chǎn)死胎落

下和被羊水污染的場地，用2%氫氧化鈉浸透墊草和地面。

6.3.2從畜群中檢出并剔除布魯氏菌病畜后，應對畜舍、用具及運動場所等進行緊急消毒；按照《病

死及病害動物無害化處理技術規(guī)范》的要求，對病死和撲殺的病畜進行無害化處理。

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由河南省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳提出并歸口。

本文件起草單位：新鄉(xiāng)市動物疫病預防控制中心、河南科技學院、河南省動物疫病預防控制中心。

本文件主要起草人：荊汝頂、秦保亮、李春艷、杜海燕、王英華、馮春花、朱方兵、馬健、?？煽伞?/p>

孫照霞、王超、胡元春、郝曉鵬、姜金慶、劉長忠、常衛(wèi)波、趙智燦、李磊。

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奶牛場布魯氏菌病凈化技術規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了奶牛場布魯氏菌病的診斷、凈化、維持、生物安全與防護等要求。

本文件適用于獨立封閉飼養(yǎng)規(guī)模100頭以上奶牛場布魯氏菌病的凈化。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期