乳腺癌治療的明日之星：AKT抑制劑

乳腺癌治療的明日之星：AKT抑制劑前言AKT激活是多種生命活動及疾病的信號中樞，而AKTSer473位的磷酸化是AKT完全激活的必要步驟。AKT抑制劑藥物三期臨床實驗結(jié)果表明其能有效延長荷爾蒙受體陽性乳腺癌患者的無進(jìn)展生存期。在AKT相關(guān)研究中，磷酸化抗體是最重要的工具之一，義翹神州為了助力研究現(xiàn)向大家免費提供磷酸化抗體試用裝。01AKT分子機制AKT的蛋白名為RAC-alphaserine/threonine-proteinkinase或ProteinkinaseB(PKB)。AKT在所有人源細(xì)胞類型中皆有表達(dá)，人源AKT激酶有三種：AKT1、AKT2、AKT3，三種AKT同源性較高，結(jié)構(gòu)域類似。AKTN端有pleckstrinhomology(PH)結(jié)構(gòu)域，能夠和PIP3結(jié)合，C端包含激酶結(jié)構(gòu)域（KD）和C末端結(jié)構(gòu)域（CTD）。AKT蛋白結(jié)構(gòu)（圖片源自/10.1186/s13045-021-01137-8）靜息狀態(tài)下，AKT的PH結(jié)構(gòu)域和C端激酶結(jié)構(gòu)域靠近（PH-in構(gòu)象），抑制AKT激活。當(dāng)細(xì)胞接受PDGFa、IGF1等多種細(xì)胞因子刺激后，通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，PI3K將PI4,5P2轉(zhuǎn)變?yōu)镻IP3。AKT的PH結(jié)構(gòu)域與PIP3結(jié)合，釋放C端激酶結(jié)構(gòu)域（PH-out構(gòu)象）。其后，PDK1磷酸化AKT1的308位蘇氨酸，初步激活A(yù)KT，然后mTORC2磷酸化AKT1的473位絲氨酸（對應(yīng)AKT2Ser474，AKT3Ser472）。AKT1Ser473位的磷酸化對于T308位磷酸化的維持有重要作用，是AKT完全激活的標(biāo)志。AKT激活過程（圖片源自/10.1016/j.cell.2017.04.001）AKT能夠激活包括mTORC1、GSK3β、FOXO在內(nèi)的100多種底物，是信號通路的中央樞紐之一，調(diào)控了細(xì)胞及機體的代謝、生存、增殖。在多種腫瘤中，AKT的正向調(diào)控原件PI3K往往產(chǎn)生突變，異常激活，而負(fù)向調(diào)控原件PTEN突變失活，這最終導(dǎo)致了AKT的過度激活，增強了腫瘤細(xì)胞的生存遷移能力。因此，以AKT為靶點的治療藥物是研發(fā)熱點。02AKT抑制劑研究進(jìn)展在乳腺癌等多種腫瘤中，由于上游調(diào)控原件PI3K異常激活或PTEN的突變失活，AKT會持續(xù)激活，開啟下游一系列信號通路，進(jìn)而增強腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移能力。Capivasertib是一種吡咯嘧啶衍生的化合物，能夠和AKT的ATP結(jié)合位點結(jié)合，導(dǎo)致AKT無法磷酸化底物，抑制下游信號通路。Capivasertib能夠在10nM級別抑制所有AKT激酶（AKT1IC50=3nM，AKT2IC50=7nM，AKT3IC50=7nM）。2023年6月1日，英國癌癥研究院等在新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志上發(fā)表了Capivasertib的三期臨床試驗結(jié)果。該試驗?zāi)技?08例荷爾蒙受體陽性、表皮生長因子2型受體陰性的進(jìn)展期乳腺癌患者，與僅接受fulvestrant治療的患者（無進(jìn)展生存期PFS=3.6Months）相比，接受Capivasertib-fulvestrant聯(lián)合治療的患者無進(jìn)展生存期（7.2Months）顯著增強（HR=0.6,95%CI:0.51-0.71,P<0.001）。該結(jié)果為Capivasertib-fulvestrant療法以及其他AKT靶點藥物開發(fā)提供了光明前景。03AKTser473磷酸化抗體無論是生理研究，還是病理研究中，AKTSer473的磷酸化都是AKT是否激活的關(guān)鍵指標(biāo)，是相關(guān)信號通路研究中必不可少的檢測靶點。相比于普通抗體，磷酸化抗體不僅需要識別特定的蛋白，還需要識別是否在蛋白的特定氨基酸上發(fā)生磷酸化。AKTSer47磷酸化抗體能夠特異性的檢測AKT是否在第473位的絲氨酸發(fā)生磷酸化。義翹神州現(xiàn)在推出AKTSer473磷酸化抗體（Cat:110591-R0113）。通過自有的兔單B流式分選技術(shù)制備的兔單克隆抗體具有高特異性（內(nèi)源性驗證、競爭驗證）、高靈敏度（1:200000）等特點。?義翹神州磷酸化抗體驗證數(shù)據(jù)內(nèi)源性驗證Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedNIH-3T3,untreated(-);treatedwithPDGFA(Cat:13081-H07Y)(5μg/mL,5min;+),usingPhospho-AKT(Ser473)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110591-R0113)at1:2000dilution(upper)oranti-Aktantibody(lower).Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedA431,untreated(-);treatedwithEGF(Cat:GMP-10605-HNAE)(200ng/mL,15min;+),usingPhospho-AKT(Ser473)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110591-R0113)at1:2000dilution(upper)oranti-Aktantibody(lower).特異性驗證Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedNIH-3T3,untreated(lineA);treatedwithPDGFA(Cat:13081-H07Y)(5μg/mL,5min),withoutpeptide(lineB)orantigen-specificphosphopeptide(lineC)orantigen-specificpeptide(lineD)usingPhospho-AKT(Ser473)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110591-R0113)at1:2000dilution.超高稀釋度Westernblotanalysisofextractsfromserum-starvedNIH-3T3treatedwithPDGFA(Cat:13081-H07Y)(5μg/mL,5min;+),usingPhospho-AKT(Ser473)rabbitmonoclonalAntibody(Cat:110591-R0113)at1:1000,1:50000,1:200000dilution.磷酸化抗體相關(guān)產(chǎn)品貨號產(chǎn)品名稱13081-H07YPDGFAProtein,Human,Recombinant(HisTag)GMP-10605-HNAEEGFProtein,Human,Recombinant(ECD),HPLC-verified110396-R0001RecombinantPhospho-p70S6Kinase1(Thr389)Antibody,RabbitMonoclonal10099-T38Anti-S6K1/RPS6KB1Antibody,RabbitPolyclonal【參考文獻(xiàn)】1.Andrikopoulou,A.,etal.Theemergingroleofcapivasertibinbreastcancer.Breast,2022./10.1016/j.breast.2022.03.0182.Davies,B.R.,etal.PreclinicalpharmacologyofAZD5363,aninhibitorofAKT:pharmacodynamics,antitumoractivity,andcorrelationofmonotherapyactivitywithgeneticbackground.MolCancerTher,2012./10.1158/1535-7163.Mct-11-0824-t3.Hua,H.,etal.TargetingAktincancerforprecisiontherapy.JHematolOncol,2021,/10.1186/s13045-021-01137-84.Manning,B.D.,&Toker,A.AKT/PKBSignaling:Navigatingthe