化妝品中壬二酸及其鹽類、非那西丁、羥基癸酸、石棉、葡糖醛酸等14種原料的檢驗(yàn)方法

附件6化妝品中葡糖醛酸等14種原料的檢驗(yàn)方法DeterminationofGlucuronicAcidandOther13KindsofComponentsinCosmetics1范圍本方法規(guī)定了高效液相色譜法測(cè)定化妝品中葡糖醛酸等14種原料的含量。本方法適用于液體類、凝膠類、膏霜乳類化妝品中葡糖醛酸等14種原料含量的測(cè)定。本方法所指的14種原料包括葡糖醛酸、酒石酸、羥基乙酸、蘋(píng)果酸、乳酸、檸檬酸、2-羥基丁酸、乳酸甲酯、扁桃酸、乳酸乙酯、乳酸丁酯、二苯乙醇酸、檸檬酸三乙酯、羥基辛酸。2方法提要以水提取化妝品中葡糖醛酸等14種原料，用高效液相色譜儀進(jìn)行分離，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，以保留時(shí)間和紫外光譜圖定性，峰面積定量，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算含量。本方法中14種原料的檢出限、定量下限及取樣量為1.0g，定容體積為10mL時(shí)檢出濃度和最低定量濃度見(jiàn)表1。表114種原料的檢出限、定量下限和檢出濃度、最低定量濃度序號(hào)原料名稱檢出限定量下限檢出濃度最低定量濃度（μg）（μg）（μg/g）（μg/g）1葡糖醛酸0.080.241604802酒石酸0.030.09601803羥基乙酸0.020.06401204蘋(píng)果酸0.020.06401205乳酸0.050.151003006檸檬酸0.020.064012072-羥基丁酸0.040.12802408乳酸甲酯0.040.12802409扁桃酸0.0010.0032610乳酸乙酯0.040.128024011乳酸丁酯0.040.128024012二苯乙醇酸0.0010.0032613檸檬酸三乙酯0.040.128024014羥基辛酸0.020.06401203試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純或以上規(guī)格，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。3.1磷酸氫二銨。3.2磷酸，優(yōu)級(jí)純。3.3甲醇，色譜純。3.4乙腈，色譜純。3.5甲酸，色譜純。3.60.05mol/L的磷酸氫二銨溶液：稱取6.60g磷酸氫二銨，加水1000mL溶解，用0.22μm濾膜過(guò)濾。3.7標(biāo)準(zhǔn)品：14種原料標(biāo)準(zhǔn)品信息詳見(jiàn)附錄A。3.8葡糖醛酸等9種組分混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液分別精密稱取（精確到0.0001g）葡糖醛酸、酒石酸、羥基乙酸、蘋(píng)果酸、乳酸、檸檬酸、2-羥基丁酸、扁桃酸和二苯乙醇酸（3.7）適量于同一容量瓶中，加水適量，60℃超聲15min使溶解，用水定容，搖勻，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液備用，轉(zhuǎn)入棕色儲(chǔ)液瓶中，4℃避光保存，有效期1個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液濃度見(jiàn)表2。3.9羥基辛酸單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液精密稱?。ň_到0.0001g）羥基辛酸（3.7）適量于容量瓶中，加水適量，60℃超聲15min使溶解，用水定容，配制成單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液備用，轉(zhuǎn)入棕色儲(chǔ)液瓶中，4℃避光保存，有效期1個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液濃度見(jiàn)表2。3.10乳酸甲酯等3種組分混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液分別精密稱?。ň_到0.0001g）乳酸甲酯、乳酸乙酯、檸檬酸三乙酯（3.7）適量于同一容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液備用，轉(zhuǎn)入棕色儲(chǔ)液瓶中，4℃避光保存，有效期1個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液濃度見(jiàn)表2。3.11乳酸丁酯單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液精密稱?。ň_到0.0001g）乳酸丁酯（3.7）適量于容量瓶中，加2mL甲醇（3.3）溶解，用水定容，搖勻，配制成單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液備用，轉(zhuǎn)入棕色儲(chǔ)液瓶中，4℃避光保存，有效期1個(gè)月。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液濃度見(jiàn)表2。4儀器和設(shè)備4.1高效液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器。4.2天平，感量分別為0.1mg、0.01mg。4.3超聲波清洗器，功率100W。4.4高速離心機(jī)，轉(zhuǎn)速≥14000r/min。4.5pH計(jì)，精度0.01。4.6渦旋振蕩器。5分析步驟5.1混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的制備分別精密移取不同體積的葡糖醛酸等9種組分混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.8）、羥基辛酸單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.9）、乳酸甲酯等3種組分混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.10）及乳酸丁酯單標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（3.11）于10mL容量瓶中，用水定容。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度見(jiàn)表2。表214種原料的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液和標(biāo)準(zhǔn)系列濃度原料名稱標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液濃度（mg/mL）混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度（mg/mL）葡糖醛酸0.824酒石酸40.012羥基乙酸0.824蘋(píng)果酸0.824乳酸100.1250.250.512.55檸檬酸100.1250.250.512.552-羥基丁酸100.1250.250.512.55乳酸甲酯500.1250.250.512.55扁桃酸0.20.00250.0050.010.020.050.1乳酸乙酯400.824乳酸丁酯500.1250.250.512.55二苯乙醇酸0.20.00250.0050.010.020.050.1檸檬酸三乙酯500.1250.250.512.55羥基辛酸500.1250.250.512.555.2樣品處理稱取混合均勻的樣品1.0g（精確到0.001g）于10mL具塞比色管中，加水至10mL刻度，充分渦旋混合30s，60℃超聲提取30min，取適量樣品在10000r/min下高速離心15min，取上清液過(guò)0.45μm的濾膜，取續(xù)濾液作為待測(cè)溶液。如樣品為油包水等難于在水中分散劑型，可先加入1mL異丙醇渦旋混合30s使分散均勻，再加水至10mL刻度。5.3參考色譜條件色譜柱：C18柱（250mm×4.6mm，5μm），或等效色譜柱；流動(dòng)相：A：0.05mol/L的磷酸氫二銨溶液（3.6），用磷酸（3.2）調(diào)pH值為3.0；B：甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng)：214nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：5μL。表3流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間/min流速/mL/minV（流動(dòng)相A）/%V（流動(dòng)相B）/%00.710006.50.710006.61.01000151.06040301.03070401.0307040.10.71000500.710005.4測(cè)定在“5.3”色譜條件下，取混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液（5.1）分別進(jìn)樣，進(jìn)行色譜分析，以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取“5.2”項(xiàng)下的待測(cè)溶液進(jìn)樣，根據(jù)保留時(shí)間和紫外光譜圖定性，測(cè)得峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)溶液中各原料的濃度。按“6”計(jì)算樣品中各原料的含量。6分析結(jié)果的表述6.1計(jì)算6.1.1葡糖醛酸等10種α-羥基酸式中：ω——化妝品中葡糖醛酸等10種α-羥基酸原料的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，μg/g；ρ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)原料的質(zhì)量濃度，mg/mL；V——樣品定容體積，mL；m——樣品取樣量，g；D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則取1）。6.1.2乳酸甲酯等3種乳酸酯類式中：ω——化妝品中乳酸甲酯等3種乳酸酯類原料的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（以乳酸計(jì)），μg/g；m——樣品取樣量，g；ρ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)原料的質(zhì)量濃度，mg/mL；V——定容體積，mL；D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則取1）；90.08——乳酸的摩爾質(zhì)量，g/mol。6.1.3檸檬酸三乙酯式中：ω——化妝品中檸檬酸三乙酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（以檸檬酸計(jì)），μg/g；m——樣品取樣量，g；ρ——從標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)原料的質(zhì)量濃度，mg/mL；V——定容體積，mL；D——稀釋倍數(shù)（不稀釋則取1）；192.12——檸檬酸的摩爾質(zhì)量，g/mol。在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的10%。6.2回收率和精密度方法回收率為85%~115%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于10%。7圖譜圖114種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖1：葡糖醛酸（3.619min）；2：酒石酸（4.024min）；3：羥基乙酸（4.573min）；4：蘋(píng)果酸（5.534min）；5：乳酸（7.180min）；6：檸檬酸（8.439min）；7：2-羥基丁酸（12.588min）；8：乳酸甲酯（14.366min）；9：扁桃酸（17.194min）；10：乳酸乙酯（17.958min）；11：乳酸丁酯（26.831min）；12：二苯乙醇酸（27.449min）；13：檸檬酸三乙酯（28.625min）；14：羥基辛酸（30.465min）

附錄A（資料性附錄）葡糖醛酸等14種原料標(biāo)準(zhǔn)品信息表表A.1葡糖醛酸等14種原料標(biāo)準(zhǔn)品信息表序號(hào)中文名稱英文名稱CAS登錄號(hào)分子式相對(duì)分子質(zhì)量1葡糖醛酸Glucuronicacid6556-12-3C6H10O7194.142酒石酸Tartaricacid87-69-4C4H6O6150.093羥基乙酸Glycolicacid79-14-1C2H4O376.054蘋(píng)果酸Malicacid97-67-6C4H6O5134.095乳酸Lacticacid79-33-4C3H6O390.086檸檬酸Citricacid77-92-9C6H8O7192.1272-羥基丁酸2-HydroxybutyricAcid600-15-7C4H8O3104.108乳酸甲酯Methyllactate547-64-8C4H8O3104.119扁桃酸Mandelicacid90-64-2C8H8O3152.1510乳酸乙酯Ethyllactate97-64-3C5H10O3118.1311乳酸丁酯Butyllactate138-22-7C7H14O3146.2112二苯乙醇酸Benzilicacid76-93-7C14H12O3228.2413檸檬酸三乙酯Triethylcitrate77-93-0C12H20O7276.2814羥基辛酸Hydroxycaprylicacid617-73-2C8H16O3160.21注：標(biāo)準(zhǔn)品可能存在不同形式，其CAS號(hào)也會(huì)不同，當(dāng)與目標(biāo)成分不同時(shí)需進(jìn)行必要的折算。附錄B（規(guī)范性附錄）葡糖醛酸等14種原料陽(yáng)性結(jié)果的確證因α-羥基酸極性大，紫外吸收接近截止波長(zhǎng)，測(cè)定時(shí)易出現(xiàn)干擾，必要時(shí)可采用液相色譜－質(zhì)譜法確證結(jié)果，以排除基質(zhì)中其他組分的干擾。在相同的液相色譜－質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)條件下，如果樣品中色譜峰的保留時(shí)間和紫外光譜圖與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)成分一致（相對(duì)偏差在±2.5%之內(nèi)），所選擇的監(jiān)測(cè)離子對(duì)的相對(duì)豐度比與相當(dāng)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液的離子對(duì)的相對(duì)豐度比的偏差不超過(guò)表B.1規(guī)定范圍，則可以判定樣品中存在對(duì)應(yīng)的測(cè)定成分。表B.1結(jié)果確證時(shí)相對(duì)離子豐度比的最大允許偏差相對(duì)離子豐度（k）k＞50%50%≥k＞20%20%≥k＞10%k≤10%允許的最大偏差±20%±25%±30%±50%B.1儀器參考條件B.1.1色譜條件色譜柱：C18柱（100mm×2.1mm，1.8μm），或等效色譜柱；流動(dòng)相：A：乙腈（含0.1%甲酸）；B：0.1%甲酸水溶液；表B.2流動(dòng)相梯度洗脫程序時(shí)間/minV（流動(dòng)相A）/%V（流動(dòng)相B）/%0010040100159551795517.10100220100流速：0.2mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5μL。B.1.2質(zhì)譜條件離子源：電噴霧離子源（ESI源）；監(jiān)測(cè)模式：正、負(fù)離子多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式；監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相關(guān)電壓參數(shù)設(shè)定見(jiàn)表B.3；鞘氣流速：11L/min；干燥氣流速：14L/min；鞘氣溫度：350℃；干燥氣溫度：230℃；碰撞氣：Ar，20psi；離子源電壓（IS）電壓：正離子：4000V；負(fù)離子：3000V。表B.314種原料的監(jiān)測(cè)離子對(duì)及相關(guān)電壓參數(shù)設(shè)定表序號(hào)組分名稱母離子（m/z）子離子（m/z）CE(V)1葡糖醛酸193.2113.1*-14131.1-112酒石酸149.173.0*-1487.1-183羥基乙酸75.247.1*-1645.1-154蘋(píng)果酸133.2115.0*-1671.2-175乳酸89.243.1*-1345.1-156檸檬酸191.1111.1*-1287.1-1172-羥基丁酸103.257.1*-1345.1-168乳酸甲酯104.945.0*933.0159扁桃酸151.2107.1*-1576.