檢驗科血清堿性磷酸酶測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗科文件編號：JYK-3-SH-0010版本/修訂號：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：20110701第4頁共4頁編寫制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2013-08-01李永臣2013-08-01章林華2013-08-01血清堿性磷酸酶測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗申請單獨(dú)檢驗項目申請：血清堿性磷酸酶測定(縮寫ALP)；組合項目申請：血生化中肝功能測定。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗申請。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中。或采用含分離膠的真空采血管。2.1.2檢驗申請單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識符。2.1.3急診標(biāo)本采集后，在檢驗申請單上填寫標(biāo)本采集時間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗申請單一起及時運(yùn)送至檢驗科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3無法確認(rèn)標(biāo)本與申請單對應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清。2.2.2標(biāo)本保存時間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定48h，普通冰箱中（2～8℃）穩(wěn)定7天。-20℃保存穩(wěn)定60天。為避免標(biāo)本中水分揮發(fā)使血清濃縮，對保存時間超過1天的標(biāo)本均加塞密閉或覆蓋濕巾。2.2.3已完成測試的標(biāo)本保持完整的識別號，置4～8℃冰箱內(nèi)保存7天。2.3標(biāo)本采集的注意事項2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛、避免劇烈活動，和12h以上禁食空腹?fàn)顟B(tài)。2.3.2可以使用EDTA、枸櫞酸鹽、草酸鹽抗凝的血液標(biāo)本，但肝素抗凝劑可引起反應(yīng)液混濁。3方法原理無色的對硝基苯磷酸二鈉在堿性磷酸酶的作用下，生成在405nm處有特異吸收的淡黃色對硝基苯酚。通過測定在405nm處吸光度的變化速率來計算ALP的活性。堿性磷酸酶對硝基苯磷酸二鈉+H2O對硝基苯酚+H3PO44試劑及其他用品4.1試劑：堿性磷酸酶測定試劑盒，由北京利德曼生化技術(shù)有限公司出品。4.2試劑盒保存：未啟封試劑盒在2～8℃保存，可儲存至失效期。啟封使用的試劑置儀器試劑倉冰箱內(nèi)穩(wěn)定14天。開蓋后避免污染。4.3試劑盒準(zhǔn)備：液態(tài)雙試劑型，即開即用，無特殊準(zhǔn)備。4.4試劑盒主要成分：AMP（pH10.2）1000mmol/L，磷酸對硝基酚10mmol/L。含有穩(wěn)定劑與保護(hù)劑。5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式校準(zhǔn)品：不使用校準(zhǔn)品，以p-硝基苯的雙波長（410/470nm）毫摩爾消光系數(shù)計算ALP活性。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個不同水平未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：液態(tài)質(zhì)控血清，即開即用，無需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測定：在每一批標(biāo)本中測定兩個水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動生化分析儀器。8標(biāo)本檢測步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測項目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測定→結(jié)果復(fù)核→報告。9主要分析參數(shù)參見說明書。10結(jié)果計算公式中ΔA/min即單位時間中吸光度降低的值，VT為總反應(yīng)體積ml（試劑總量＋標(biāo)本量），Vs為標(biāo)本體積ml，l為比色皿光徑cm，ε為對硝基酚的410/470nm測定的毫摩爾消光系數(shù)。11檢驗結(jié)果的報告及范圍11.1結(jié)果的報告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報告。11.1.2報告單上標(biāo)明結(jié)果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報告單上指出。11.2報告范圍：5-1650U/L，超過此范圍的結(jié)果報告時必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度：批內(nèi)CV<3.5%；總CV<5.3%。12.2線性范圍：5-1000U/L。12.3方法的有限性及干擾因素：膽紅素濃度1197μmol/L，血紅蛋白濃度5g/L，甘油三酯濃度45.2mmol/L沒有明顯干擾。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍：男性<12歲:<500U/L;12-15歲：<750U/L；>20歲：45-125U/L.女性<15歲:<500U/L;>15歲：40-150U/L；20-49歲：35-100U/L；>=50：50-135U/L。14臨床意義14.1ALP在堿性條件下水解各種磷酸酯鍵，又具有磷酸轉(zhuǎn)移酶的作用。廣泛分布于各組織細(xì)胞膜上和體液中，以骨骼、肝、腎、腸和胎盤含量較多。ALP有4種同工酶。14.2血清ALP活性測定是鑒別肝膽疾病和骨質(zhì)增生不可缺少的檢查項目。肝膽疾病如膽結(jié)石、腫瘤或炎癥造成的膽汁郁積等ALP升高，骨疾病如Paget病、骨軟化癥（佝僂病）、骨轉(zhuǎn)移瘤和甲狀旁腺功能亢進(jìn)等也有ALP升高。14.3霍奇金病、充血性心衰、潰瘍性結(jié)腸炎等疾病時ALP可有中度升高。14.4妊娠3個月時可有非病理性升高。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗結(jié)果的審核。15.2認(rèn)真審核每一個測定結(jié)果，審核者對發(fā)出報告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項目：審核與肝功能組合中其他項目的關(guān)系。如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。16威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定暫無規(guī)定。17有關(guān)引用程序與文件17.1Abbott自動生化分析儀儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。17.2生化檢驗室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序。17.3檢驗結(jié)果審核程序。17.4標(biāo)本送檢和接收程序。18參考文獻(xiàn)18.1陸永綏，張偉民主編.臨床檢驗管