檢驗科體液總蛋白測定標準操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗科文件編號：JYK-3-SH-041版本/修訂號：C/0主題內容生化室作業(yè)指導書生效日期：20110701第1頁共4頁編寫制定日期審核審核日期：核準執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-0141、體液總蛋白測定標準操作規(guī)程1檢驗申請單獨檢驗項目申請：腦脊液與尿總量蛋白(CSF)，臨床醫(yī)生根據需要提出檢驗申請。2標本采集與處理采集與處理2.1受檢者的準備：尿樣：采用尿樣品隨機收集或收集24小時。腦脊液：采用腰椎穿刺。要嚴格掌握禁忌證、凡疑有顱內壓升高者必須做眼底檢查，如有明顯視乳頭水腫或有腦疝先兆者，禁忌穿刺。凡病人處于休克、衷竭或瀕危狀態(tài)以及局部皮膚有炎癥、顱后窩有占位性病變或伴有腦干癥狀者均禁忌穿刺。2.2樣本準備：腦脊液由臨床醫(yī)師進行腰椎穿刺采集，必要時可從小腦延腦池或側腦室穿刺獲得。穿刺后應由醫(yī)師用壓力測定，正常人腦脊液壓力臥位為0.78-1.76kpa(80-180mmH2O)，兒童為0.4-1.0kpa(40-100mmH2O)。任何病變使腦組織體積或腦脊液量增加時，腦脊液壓力均可升高。待壓力測定后將腦脊液分別收集于3個無菌試管中，第一管作細菌培養(yǎng)，第二管作化學分析和免疫學檢查，第三管作一般性狀及顯微鏡檢查。每管收集1-2毫升。腦脊液標本必須立即送驗及時檢查，放置過外將影響檢驗結果，是細胞破壞、變性、或細胞包裹于纖維蛋白凝塊中，導致細胞數(shù)降低、分類不準確等。存放中的腦脊液葡萄糖會分解，使之含量降低；細菌自溶或殘廢可影響細菌檢出率等。2.3抗凝劑：不使用抗凝劑。2.4標本處理：2.4.1尿樣品隨機收集或收集24小時。儲存在2-8℃或冰凍穩(wěn)定至測定前。2.4.2腦脊液樣品中不能有溶血。儲存在2-8℃可穩(wěn)定數(shù)天。3方法原理連苯三酚紅與鉬酸結合形成紅色復合物，在467nm有最大吸收。當這個復合物在酸性條件下與蛋白結合形成藍紫色復合物，在598nm有最大吸收。通過在600nm檢測生成物的吸光度，可以測量出樣本中總蛋白的含量。4試劑及其他用品組成溶液濃度連苯三酚紅緩沖液2.4mg/dlPH=2.5鉬酸鈉0.96mg/dl表面活性劑5校準品與校準模式5.1校準品：利德曼專用配套定標液。5.2校準類型和校準點數(shù)目：線性模式，1個校準點。5.3校準周期：校準間隔時間不限，試劑換批號使用時或質控結果超過規(guī)定的2SD范圍，需要定標。5.4校準液重建方法：校準液即開即用，無需特殊準備。6質控品與室內質控規(guī)則6.1質控品采用自配未定值質控血清。6.2質控液重建方法：分裝冰凍質控血清，復溶即用，無需特殊準備。6.3質控品測定：在每星期一或更換試劑時測質控血清一次。6.4質控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質控規(guī)則，由計算機程序進行檢索與判斷。6.5如出現(xiàn)失控情況，按室內質控標準操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認重新回復到控制狀態(tài)后開始標本檢測。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動生化分析儀器。8標本檢測步驟裝載試劑→進行校準→進行質控→輸入標本檢測項目→加載標本→標本測定→結果復核→報告。9主要分析參數(shù)參見說明書。10結果計算A標準c＝ΧCOA標準AA測定A標準尿總蛋白（mg）：c＝ΧCOΧVdlA標準式中：c——測定蛋白濃度，mg/dL；A測定——標本管吸光度；A標準——標準管吸光度；CO——校準液中蛋白濃度，mg/dL；Vdl：二十四小時尿液體積11檢驗結果的報告及范圍11.1結果的報告11.1.1結果經審核確認準確無誤后發(fā)出報告。11.1.2報告單上標明結果的計量單位、參考區(qū)間、報告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學信息。11.1.3如收到標本的質量可能對測定結果有影響的也在報告單上指出。11.2報告范圍：0～2mg/L，超過此范圍的結果報告時必須附有證明該結果準確可靠的文字說明，例如：系根據標本稀釋后重復測定的結果。12操作性能12.1精密度：批內CV<3.13%，批間CV<4.80%。（使用濃度為80mg/dl以上的標本）12.2線性范圍：0～2mg/L。12.3靈敏度：當CSF濃度為100mg/dL時，顯色吸光度A600約為0.384～0.427。13參考范圍及醫(yī)學決定水平腦脊液蛋白：0.15-0.45mg/l；尿蛋白：0-150mg/24小時。隨機尿液正常值范圍為:0.01～0.14mg/l。14臨床意義14.1尿總蛋白的測定是鑒別腎病的重要指標。尿總蛋白含量升高常見于腎小球滲透性過高、腎小管重吸收不全和蛋白分泌素異常等。14.2腦脊液蛋白和特異蛋白的測定常用于鑒別血液/腦屏蔽到血漿蛋白中滲透量的增加或鞘內的免疫球蛋白分泌素的增加。15結果審核以及分析與相關項目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負責檢驗結果的審核。15.2認真審核每一個測定結果，審核者對發(fā)出報告結果的準確性和可靠性負責，并在報告單的審核者處簽名。15.3相關項目：審核如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應分析與查找原因。無威脅生命的“緊急值”及報告規(guī)定17有關引用程序與文件17.1Abbott生化分析儀儀器標準操作規(guī)程。17.2生化檢驗室內質控標準操