戊型肝炎病毒實驗活動風險評估報告

戊型肝炎病毒實驗活動風險評估報告一、生物學特性（一）種類和病毒分型戊型肝炎病毒（HepatitisEvirus,HEV）是單股正鏈RNA病毒，呈球形，無包膜，平均直徑為32～34nm，全長7.2～7.6kb，含3個開放閱讀框（ORF），即ORF-1編碼非結(jié)構(gòu)蛋白，ORF-2編碼核殼蛋白，ORF-3與ORF-2部分重疊，可能部分編碼核殼蛋白。HEV核衣殼呈二十面體立體對稱。目前，認為HEV至少存在8個基因型，其中，基因型I和基因型II分別以緬甸株（HEV-B）和墨西哥株（HEV-M）為代表。在我國流行的HEV為基因型I和基因型IV。（二）來源HEV引起的戊型肝炎是一種經(jīng)糞—口途徑傳播的急性傳染病。自1955年印度由水源污染發(fā)生了第一次戊型肝炎大暴發(fā)以來，先后在印度、尼泊爾、蘇丹、蘇聯(lián)及我國新疆等地都有流有。1986年，我國新疆南部發(fā)生戊型肝炎大流行，約12萬人發(fā)病，700余人死亡，是迄今為止世界上最大的一次流行。1989年，美國學者Reyes等成功地克隆了HEV基因組，并將其正式命名為HEV。HEV體外培養(yǎng)困難，迄今為止仍不能在細胞中大量培養(yǎng)。（三）傳染源潛伏期末和急性期初的患者糞便的排毒量最大，傳染性最強，是本病的主要傳染源。（四）傳播途徑HEV的傳播途徑與HAV相似，主要經(jīng)糞—口途徑傳播。（五）易感性人群普遍易感。HEV感染后可產(chǎn)生免疫保護作用，防止同株，甚至不同株HEV再感染。但抗-HEVIgG持續(xù)時間在不同病例中的差異較大，多數(shù)于發(fā)病后6～12個月轉(zhuǎn)陰，但亦有持續(xù)幾年，甚至十多年者。（六）潛伏期潛伏期為10～60d，平均為40d，病毒經(jīng)胃腸道進入血流，在肝細胞內(nèi)復(fù)制，然后釋放到血液和膽汁中，經(jīng)糞便排出體外。（七）劑量—效應(yīng)關(guān)系目前，尚未見有HEV對人準確感染劑量的報道，HEV的感染主要與暴露途徑和感染方式密切相關(guān)。（八）致病性人感染HEV后可表現(xiàn)為臨床型和亞臨床型，成人中以臨床型多見。隨糞便排出的病毒污染水源、食物和周圍環(huán)境而造成傳播。HEV通過對肝細胞的直接損傷和免疫病理作用引起肝細胞的炎癥或壞死。臨床上表現(xiàn)為急性戊型肝炎（包括急性黃疸型和無黃疸型）、重癥肝炎以及膽汁瘀滯性肝炎。孕婦感染HEV后病情常較重，尤以懷孕6～9個月最為嚴重，常發(fā)生流產(chǎn)或死胎，病死率達10%～20%。戊型肝炎為自限性疾病，多數(shù)患者于發(fā)病后6周左右即好轉(zhuǎn)并痊愈，不發(fā)展為慢性肝炎或病毒攜帶者?？?HEVIgG常于發(fā)病后4周左右轉(zhuǎn)為陽性，多數(shù)患者于5～6個月后逐漸消失。因此，多數(shù)人雖然在兒童期曾感染過HEV，但青壯年后仍可再次感染。（九）變異性在我國流行的HEV為基因型I和基因型IV。南京地區(qū)的程險峰、戴星等曾利用生物信息學軟件對國內(nèi)I型和IV型毒株加以比較，發(fā)現(xiàn)HEVIV型毒株的變異程度比I型高，不同年份的HEVIV型毒株變異不同，有新的亞型出現(xiàn)，且變異有隨時間推移而增大的趨勢。另外，朱永豹、黃元成等檢測并分析了武漢地區(qū)基因IV型HEV開放讀碼框3（ORF-3）基因變異情況，發(fā)現(xiàn)武漢地區(qū)基因IV型HEVORF-3存在多個位點核苷酸替換。他們采用逆轉(zhuǎn)錄—巢式聚合酶鏈反應(yīng)（RT-nPCR）擴增41株基因IV型HEVRNA兩個基因片段（nt5020～nt5392和nt5347～nt5956），并對PCR產(chǎn)物進行測序，然后使用ContigExpress將測序結(jié)果進行拼接（含有HEVORF-3全序列），使用MegAlign（DNAStar軟件包）對ORF-3進行比對，查看ORF-3基因及其編碼蛋白變異情況，結(jié)果顯示41株基因IV型HEVRNA兩個基因片段均擴增出來的毒株為18株，18株HEVORF-3檢測出47個位點存在核苷酸替換，其中21個替換發(fā)生在密碼子第1、2位核苷酸，26個替換發(fā)生在密碼子第3位核苷酸，其編碼蛋白存在19個位點的氨基酸變異。（十）環(huán)境中的穩(wěn)定性HEV在堿性環(huán)境下較穩(wěn)定，對高熱、氯化銫、三氯甲烷等敏感，在-70～8℃的條件下易裂解，但在液氮中保存穩(wěn)定。（十一）藥物敏感性目前，尚無針對HEV的特效藥物。（十二）消毒劑敏感性HEV對氯化銫、三氯甲烷、過氧乙酸等均敏感。（十三）物理滅活HEV對高熱敏感。耐高溫、不怕水的物品，如餐具、茶具等廚房用品可加蓋煮沸15～30min；衣物、毛巾、被服等可以煮沸30min；不能煮沸的書籍票證等可以用微波消毒，用微波消毒時掌握好消毒時間，一般2min即可。（十四）在宿主體外存活HEV對外界環(huán)境的抵抗力較強，在水和食物中可存活較長時間，?？梢鹚突蚴澄镄土餍?。（十五）與其他生物和環(huán)境的交互作用HEV目前尚不能在體外組織培養(yǎng)，但黑猩猩、食蟹猴、恒河猴、非洲綠猴、須狨猴對HEV敏感，可用于分離病毒。（十六）預(yù)防和治療方案1.預(yù)防措施 HEV的傳播途徑對HAV相似，主要經(jīng)糞—口途徑傳播，因此，其一般性預(yù)防原則與甲型肝炎相同，主要是保護水源，做好糞便管理，加強食品衛(wèi)生管理，注意個人和環(huán)境衛(wèi)生等，并做好衛(wèi)生宣教工作。2.治療措施 “重組戊型肝炎疫苗（大腸埃希菌）”由我國著名專家夏寧邵教授帶領(lǐng)的研究組歷經(jīng)14年研制成功，2012年獲得國家一類新藥證書，成為世界上第一個用于預(yù)防戊型肝炎的疫苗，目前尚無特異性抗病毒藥物可供治療。二、實驗室相關(guān)活動風險評估與控制（一）實驗室感染性因子的種類、來源和危害1.感染性因子的種類 本實驗室可能的感染因子為HEV本身。2.感染性因子的來源（1）用于HEV—抗體檢測的血液樣本。（2）樣本采集與檢測過程中涉及的所有實驗場所。（3）實驗室操作中可能產(chǎn)生的含病毒的氣溶膠。3.感染性因子可能造成的危害（1）被污染的實驗器材、器皿等對實驗室環(huán)境造成污染。（2）實驗室廢棄物對環(huán)境造成污染。（3）實驗人員暴露后感染。（4）實驗室含病毒的氣溶膠對實驗室環(huán)境造成污染。（二）實驗室常規(guī)活動過程中的風險評估與控制1.實驗方法（1）風險點識別 若采用國家標準、行業(yè)標準之外的其他未經(jīng)確認的實驗方法，或在使用國家標準、行業(yè)標準之前未進行技術(shù)確認，操作時可能存在安全風險。（2）風險控制措施 盡量采用國家標準、行業(yè)標準或經(jīng)過充分驗證的實驗方法；在使用新的或變更過的國家標準、行業(yè)標準之前，必須經(jīng)過嚴格的技術(shù)確認。2.樣本采集（1）所用器材 一次性采血針、真空采血針、消毒棉簽及一次性利器盒。（2）風險點識別①采血過程中若被戊型肝炎患者或亞臨床感染者的血液污染了皮膚、黏膜或被含有戊型肝炎病毒的血液污染了的針頭刺破皮膚，則有被HEV感染的風險，但概率很小。②血液標本濺灑出來可能造成人員或環(huán)境污染。（3）風險控制措施 采血前做好個人防護，穿戴防護服、口罩、帽子、手套；用過的針頭直接放入利器盒內(nèi)，禁止用手直接接觸使用后的針頭或?qū)⑹褂煤蟮尼橆^重新套上針頭套；采血管用真空抗凝管，采好血后直立于試管架中，防止倒翻；消毒棉簽等污染物放入醫(yī)療廢棄物專用袋中，統(tǒng)一進行消毒處理。3.樣本的包裝和運輸（1）所用器材 真空采血管，95千帕樣品運輸罐，B類標本運輸箱（UN3373冷藏箱），運送車輛。（2）風險點識別 若使用不合格包裝進行運輸，容器密封不嚴，則將不能安全有效地防止運輸過程中包裝容器意外破損，從而產(chǎn)生污染擴散的可能。（3）風險控制措施 嚴格按照生物安全的要求，采用三層容器包裝。第一層采用真空采血管裝樣本，應(yīng)密閉防滲漏；第二層采用95千帕樣品運輸罐，可容納并保護第一層容器，密封不易破碎、耐壓力、防滲漏且易消毒；第三層采用B類標本運輸箱，要容納并保護、固定第二層容器，且易于消毒。樣本應(yīng)由中心專車運回實驗室。4.樣本接收（1）風險點識別 如果在運輸途中有樣本管破裂、血液溢漏的情況，則可能會對樣本接收人員造成污染。（2）風險控制措施 樣本直接送至實驗室，由專業(yè)檢驗人員接收，接收樣本前做好個人防護，穿戴好防護服、帽子、口罩、手套。若有樣本管意外破裂的情況，則應(yīng)立即在生物安全柜內(nèi)將尚存留的樣本移出，將廢棄物放入帶蓋的防刺破的塑料罐中，被污染的容器用施康等消毒液浸泡后再清洗。5.樣品檢測（1）所用器材 離心機、生物安全柜、移液器、洗板機及酶標儀等設(shè)備。（2）風險點識別①離心過程中離心管破裂造成離心機污染。②實驗操作過程中血液樣本濺灑，造成人員或臺面、地面等環(huán)境污染。③洗板、讀板時液體濺出污染設(shè)備表面或工作臺面。（3）風險控制措施 所有檢測操作均在BSL-2實驗室中進行，檢測人員在實驗前按照二級生物安全防護要求做好個人防護；加樣移液操作在生物安全柜內(nèi)進行，動作輕緩；判讀結(jié)果時酶標板輕拿輕放，避免液體濺出；待實驗完畢，先消毒手部，再脫去手套并立即洗手；若有意外情況發(fā)生，應(yīng)及時采取有效措施。①若離心過程中離心管破裂，應(yīng)立即關(guān)閉電源，讓離心機停止工作，并靜止30min。然后，緩慢打開離心機蓋，將離心杯平穩(wěn)地拿到生物安全柜中。如果發(fā)生泄漏，則將配制好的1%的次氯酸鈉消毒液灌入離心杯腔體中消毒30min，然后棄去消毒液和離心管碎片，將離心杯清洗后擦干。②若樣本濺灑污染設(shè)備表面，則可用施康等消毒液進行擦拭消毒。③臺面、地面及人員暴露于污染物的處理措施同采樣部分。④在任何可能導(dǎo)致潛在的傳染性物質(zhì)濺出的操作過程中，應(yīng)保護好面部、眼睛和嘴；發(fā)生液體濺出、溢出等事故或明顯暴露于傳染源時，應(yīng)立即向科室負責人報告，及時處理并對事故的發(fā)生與處理作記錄，必要時進行適當?shù)尼t(yī)學評估、觀察和治療并保留書面記錄。6.陽性樣本保存（1）所用器材 生物安全柜、移液器、帶螺旋蓋的塑料管及可密封的塑料凍存盒。（2）風險點識別 戊肝IgM抗體陽性樣本若保存不當，則易造成人員或環(huán)境污染。（3）風險控制措施 按照二級生物安全防護要求做好個人防護；樣本的保留在生物安全柜內(nèi)進行，動作要輕緩；所有樣本的血清或血漿都保留在帶螺旋蓋的塑料管內(nèi)，再裝入可密封的塑料凍存盒中，置于-20℃以下冰箱內(nèi)保存，雙人雙鎖管理。7.實驗室的清潔和消毒（1）風險點識別 工作完畢后，若不及時對工作臺面、生物安全柜等進行消毒，則有可能會造成實驗室環(huán)境污染或人員感染。（2）風險控制措施工作完畢后應(yīng)及時對檢測所涉及的工作臺面、地面和生物安全柜進行消毒，使用100倍稀釋的施康清洗消毒液Ⅰ擦拭、用消毒液清潔后要干燥20min以上。生物安全柜用70%～75%的酒精擦拭消毒。待實驗和消毒完畢后，先脫去手套，再脫去防護服，并正確使用肥皂和流水洗手。8.廢棄物處置（1）所用器材醫(yī)療廢棄物專用袋、硬質(zhì)耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。（2）風險點識別剩余的陽性樣本管是很大的污染源，采血過的針頭處理不當易造成人員被刺傷的風險。（3）風險控制措施實驗過程中產(chǎn)生的所有感染性廢棄物，包括不再需要的剩余樣本、酶標反應(yīng)板、移液頭等及所有實驗過程涉及的用品等，需置于裝有醫(yī)療廢棄物專用袋的硬質(zhì)耐高壓且防滲漏的垃圾桶中，于121℃高壓滅菌15～20min后才可運出實驗室；針頭、破碎玻璃等損傷性廢棄物必須放入利器盒。利器盒嚴禁再次打開，裝滿針頭等利器的一次性利器盒嚴禁再次打開，須密封好后，同上述垃圾一起處理。所有處理完畢的廢棄物集中存放，由有資質(zhì)的醫(yī)療廢棄物處理單位上門收集，集中處置，同時做好交接記錄。所有相關(guān)記錄定期整理歸檔。（三）實驗室常規(guī)活動中其他風險評估與預(yù)防控制措施1.電力（1）風險點識別若實驗室沒有布置雙路供電，或電力供應(yīng)不穩(wěn)定，則有可能造成實驗活動突然中斷、實驗設(shè)備停止工作等所帶來的相關(guān)安全風險。（2）預(yù)防控制措施實驗室盡量要布置雙路供電，沒有布置雙路供電的應(yīng)配置備用電源，以確保高壓滅菌器、生物安全柜等重要設(shè)備的安全運行。2.電氣操作（1）風險點識別實驗室活動涉及的電氣操作，包括實驗室工作區(qū)內(nèi)電氣設(shè)備的啟動、關(guān)閉、安裝和維修；設(shè)備層內(nèi)UPS、空調(diào)機組等電氣設(shè)備的啟動、關(guān)閉和維修等。這些電氣操作的過程可能存在觸電、電擊、電氣故障等風險。（2）預(yù)防控制措施①電氣設(shè)備的設(shè)計及制造符合相關(guān)安全標準的要求。實驗室工作區(qū)內(nèi)若有380V電源插座，則需明確標識，并由有資質(zhì)的專業(yè)人員進行操作。②新的、改裝過的或修理過的電氣設(shè)備在未經(jīng)專業(yè)人員（如有資質(zhì)的電工）完成電氣安全測試和設(shè)備符合安全使用要求之前，不允許使用。③電氣設(shè)備使用人員接受正確操作的培訓(xùn)，操作方式不降低電氣安全性。電氣設(shè)備使用人員要定期檢查設(shè)備可能存在引起電氣故障的破損。只有專業(yè)人員可從事電氣設(shè)備和電路工作。禁止未經(jīng)授權(quán)的工作。④采取措施對設(shè)備去污染，以降低維護人員感染的風險。3.實驗室給排水設(shè)施設(shè)備（1）風險點識別實驗室含有給排水的設(shè)施設(shè)備，包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。當管道意外破裂、排水管道阻塞時，可能導(dǎo)致感染性材料溢出，有污染實驗人員和環(huán)境的風險。（2）預(yù)防控制措施實驗室產(chǎn)生的所有染菌物及器具，必須先經(jīng)高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌，產(chǎn)生的污水集中排入中心污水池消毒處理，嚴禁直接排放。按照GB18466要求，監(jiān)測總余氯、糞大腸菌群和其他致病菌。4.實驗室設(shè)施設(shè)備管道（1）風險點識別實驗室設(shè)施設(shè)備管道穿越維護結(jié)構(gòu)的部位可能存在密封不嚴的問題，當感染性材料溢出時，有污染環(huán)境的風險。（2）預(yù)防控制措施所有管道穿越維護結(jié)構(gòu)的部位應(yīng)嚴格密封，定期進行檢查，避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境。5.主要檢測儀器設(shè)備（1）離心機①風險點識別在分離血清的過程中，若沒有做好平衡，則可能存在離心管破裂、離心管蓋脫落、離心轉(zhuǎn)子和離心腔被污染的風險。②預(yù)防控制措施離心時配備耐離心壓力的且?guī)菪苌w的離心管，離心前做好平衡，選擇正確的離心速度和離心力；規(guī)范正確操作，定期維護，確保離心機性能正常；每次使用后做好清潔消毒和使用記錄，定期進行功能檢查。（2）酶標儀和洗板機①風險點識別在使用酶標儀和洗板機的過程中，可能存在陽性對照或在測樣品污染設(shè)備表面和工作臺面的風險。②預(yù)防控制措施酶標儀每年強檢一次，中途再做一次期間檢查；洗板機每年進行一次功能檢查；在洗板、讀板時，要做到動作輕緩，小心操作；倘若有液體濺出，立即進行消毒處理。6.生物安全設(shè)施設(shè)備（1）生物安全柜①風險點識別若不按照安全柜操作規(guī)程進行操作、維護與檢測，其防護屏障效果會明顯降低，甚至消失，失去安全防護效果；若長時間使用或未及時更換HEPA過濾膜，會使其功能喪失，造成工作窗口氣流速度降低或流向紊亂；使用后若不進行徹底消毒處理，則對清潔、維護人員將會產(chǎn)生污染。②預(yù)防控制措施正確選配生物安全柜，操作人員應(yīng)接受相關(guān)的操作、維護培訓(xùn)，日常操作和維護嚴格按照設(shè)備操作規(guī)程或使用說明書進行；每年請有檢測資質(zhì)的服務(wù)機構(gòu)對生物安全柜進行風速、氣流、塵埃粒子、紫外線強度等關(guān)鍵要素進行檢測，確保其性能正常；一旦造成污染，就應(yīng)及時進行消毒處理。（2）高壓滅菌器①風險點識別若不按照高壓滅菌器操作規(guī)程進行操作、維護，其效果會明顯降低，甚至失效，失去去污染與無害化的作用；若長時間使用又不定期檢測滅菌效果，則對其滅菌效果無從考證，可能產(chǎn)生功能缺損，則存在滅菌不徹底引起污染的隱患；在長期關(guān)停期間，若內(nèi)部水分不及時排干，則將會使內(nèi)部器件老化從而失去正常功能。②預(yù)防控制措施采用下排式高壓滅菌器，防止氣溶膠污染；規(guī)范操作，定期維護，確保高壓滅菌器性能正常；定期檢定、核查，做好使用記錄，持證上崗；日常進行滅菌效果監(jiān)測，以保證滅菌質(zhì)量。（3）個人防護用品①風險識別點個人防護用品若穿戴不規(guī)范、大小不合適或使用過期的防護用品等，則將會導(dǎo)致防護效果降低，甚至失效。②預(yù)防控制措施進行HEV血清學相關(guān)操作時要按二級生物安全防護水平進行個人防護，必須選擇大小合適、有效的防護用品，穿戴時應(yīng)相互檢查確認，避免使用有破損、缺陷和過期的防護用品。（4）應(yīng)急救治設(shè)施和用品①風險點識別實驗室若沒有配備洗眼器、應(yīng)急藥箱等必要的應(yīng)急設(shè)施和物品，或配備的急救用品種類不全、不合適或過期，則導(dǎo)致急用時無法發(fā)揮作用。②預(yù)防控制措施在實驗室內(nèi)正確配備洗眼器，確保功能正常。配備的75%乙醇、碘附或其他消毒劑、創(chuàng)可貼等急救物品與實驗活動相適應(yīng)，并在有效期內(nèi)使用，專人負責管理，定期維護、清理和更新。（5）消毒滅菌劑①風險點識別消毒產(chǎn)品無生產(chǎn)許可證、過期、配制方法或濃度不正確、種類選擇不合理，都將會導(dǎo)致消毒效果降低，生物滅活能力降低，或?qū)ξ锲犯g性增加，對皮膚造成刺激等問題。②預(yù)防控制措施選擇符合國家標準的正規(guī)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品，選擇合適的消毒劑，按照規(guī)定的消毒方法、消毒時間、消毒濃度（劑量）進行消毒，避免使用過期產(chǎn)品；消毒過程中消毒人員應(yīng)做好必要的個人防護，防止發(fā)生意外。根據(jù)HEV對不同消毒劑的敏感性，本實驗室選用施康消毒劑Ⅰ（主要成分為次氯酸鈉）、碘附、漂白粉等作為常用消毒劑。7.管理體系的風險（1）風險點識別管理體系（包括應(yīng)急預(yù)案）、程序文件、作業(yè)指導(dǎo)書和操作規(guī)程都是確保生物安全的主要因素。如果組織結(jié)構(gòu)不健全、設(shè)置不合理，體系文件與實際工作不匹配，以及部門職責不清或銜接不當?shù)?，就都可能帶來安全風險。（2）預(yù)防控制措施定期開展對管理體系的評審，要特別關(guān)注風險評估程序、應(yīng)急預(yù)案、檢測標準操作規(guī)范（SOP）等，發(fā)現(xiàn)問題因及時修訂、完善，以確保生物安全管理體系持續(xù)有效地進行。（四）工作人員的風險評估與預(yù)防控制措施1.風險點識別（1）人員數(shù)量人員過少會因缺少相互提示或因工作量增大而導(dǎo)致操作過程中工作失誤增加，風險增加。（2）人員結(jié)構(gòu)及資質(zhì)新進人員若沒有高資歷人員帶教操作，就不能很好地處理意外事件，風險會增加。實驗人員不熟悉實驗檢測方法及操作規(guī)范，在進行實驗前未進行相關(guān)的專業(yè)知識培訓(xùn)，無法保證工作質(zhì)量和安全。（3）職業(yè)操守責任心不強的人員參與該項工作，產(chǎn)生生物危害而危及人員安全、環(huán)境安全與社會安定的可能性較大。（4）健康管理健康狀況主要包括生理、心理素質(zhì)與免疫狀態(tài)。當身體出現(xiàn)腹瀉等胃腸道癥狀或其他不適合工作的情況時，職業(yè)暴露風險會增加。（5）生物安全培訓(xùn)及應(yīng)急事件處理能力工作人員上崗前沒有接受嚴格的生物安全，以及相關(guān)生物安全設(shè)備操作的技術(shù)培訓(xùn)，易導(dǎo)致生物安全事故的發(fā)生。上崗后沒有接受實驗室突發(fā)事件處理的培訓(xùn)，一旦發(fā)生意外事件，就不能有效地早期處理和控制生物安全事件。2.預(yù)防控制措施（1）人員數(shù)量盡量有2名工作人員同時進行采樣、檢測或有質(zhì)量監(jiān)督員對關(guān)鍵步驟進行監(jiān)督。（2）人員結(jié)構(gòu)及資質(zhì)實驗室檢測人員的年齡和資歷結(jié)構(gòu)應(yīng)配備合理，新進人員應(yīng)由高資歷人員帶教或監(jiān)督操作。檢測技術(shù)人員需經(jīng)過上崗培訓(xùn)和在崗持續(xù)培訓(xùn)。要求掌握相關(guān)專業(yè)知識和技能，能獨立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。（3）職業(yè)操守加強職業(yè)道德教育，培養(yǎng)工作責任心。（4）健康管理建立健康申報制度，遇有手部皮膚有開放性傷口及其他不適合工作的情況，應(yīng)及時向科室負責人報告并暫停工作；裸露皮膚的微小傷口、擦傷、皸裂等應(yīng)用防水材料嚴密覆蓋。（5）生物安全培訓(xùn)及應(yīng)急事件處理能力檢測人員必須接受上崗前培訓(xùn)和復(fù)訓(xùn)，每年參加本中心組織的生物安全知識或生物安全操作技術(shù)培訓(xùn)、考核。實驗室工作人員必須嚴格按照《實驗室意外事故和職業(yè)性疾病報告制度》和《病原微生物生物安全應(yīng)急處置技術(shù)方案》中規(guī)定的要求進行應(yīng)急事件的處置，強化職業(yè)暴露的應(yīng)急處理能力，規(guī)范工作中職業(yè)暴露后現(xiàn)場急救處理辦法。（五）實驗室非常規(guī)活動中的風險評估與預(yù)防控制措施1.實驗室主要的非常規(guī)活動（1）檢測外專業(yè)人員對實驗室設(shè)施設(shè)備的維護、維修、檢測驗證（如主要設(shè)施設(shè)備的檢測驗證）和更換（如高效過濾器等的更換）。（2）實驗室后勤保障人員對實驗室及公共環(huán)境的保潔、實驗器材洗刷消毒。（3）外部人員來實驗室參觀及上級部門對實驗室的檢查。（4）任何其他人員需要進入實驗室從事實驗活動外的行為。2.風險點識別（1）進入實驗室可能存在引起實驗室感染的風險，特別是在不慎打翻、打破血管或損壞儀器部件情況下。（2）實驗室運行過程中，某些人員需要進入實驗室參觀，存在影響實驗室正常運行的風險。3.預(yù)防控制措施（1）實行人員準入、登記制度。外部人員來參觀或檢查前，應(yīng)對實驗室作徹底消毒；任何外來人員進入實驗室時，應(yīng)由實驗室人員全程陪同。（2）進入人員絕對不能私自動用實驗室內(nèi)有標志的危險品（除非經(jīng)過授權(quán)），絕不能將未經(jīng)消毒處理的物品拿出實驗區(qū)。（3）在實驗室進行設(shè)施、設(shè)備維護維修過程中，若發(fā)生意外事件，則應(yīng)立即報告實驗室負責人，進行風險評估，并采取應(yīng)對措施。（4）對實驗室的設(shè)施、設(shè)備進行維護維修工作時，應(yīng)動作輕柔，避免產(chǎn)生氣溶膠。檢測維修后，離開實驗室前，必須洗手。（六）被誤用和惡意使用的風險與預(yù)防控制措施1.風險點識別若陽性標本未明確標識，未嚴格實行雙人雙鎖管理，實驗活動結(jié)束后不及時對操作場所進行消毒，其他工作人員在不知情的情況下可能誤用標本、實驗材料和設(shè)施設(shè)備等，則會導(dǎo)致人員感染和實驗室環(huán)境污染等。2.預(yù)防控制措施（1）實行嚴格的人員準入和持證上崗制度。（2）所有獲得批準進入實驗室工作的人員，必須嚴格按規(guī)程操作實驗材料和設(shè)施設(shè)備。（3）發(fā)生事故時必須及時報告并作必要的處理和記錄。（4）實驗所用材料和試劑等必須有明確的標識。（5）陽性標本實施嚴格雙人雙鎖管理。（七）相關(guān)實驗室已發(fā)生的事故分析和從中得到的啟示目前，雖然因HEV檢測明確引起實驗室人員感染的相關(guān)報道很少，但任何一種病原微生物都有可能導(dǎo)致實驗室感染的風險。因此，工作人員應(yīng)嚴格遵守實驗室相關(guān)規(guī)定，做好個人防護和規(guī)范操作，規(guī)避職業(yè)暴露風險。三、實驗室理化因素風險評估及安全防護措施（一）紫外線1.風險點識別二級生物安全實驗室和生物安全柜均使用紫外線燈進行物體表面消毒。紫外線波長為250～280nm，主要影響眼睛和皮膚，可引起急性角膜炎和結(jié)膜炎、慢性白內(nèi)障等眼部疾病，還可誘發(fā)皮膚癌。紫外線燈開啟時，人員在不知情的情況下進入，可受到傷害。2.安全防護措施在實驗室工作應(yīng)避免紫外線直接照射人體，特別是眼部。生物安全柜表面貼有紫外線危害的標識。在進行紫外線消毒時，實驗人員盡量遠離消毒區(qū)域。如此，基本可以規(guī)避紫外線對人體的危害。（二）輻射1.風險點識別實驗室籌建選址時未對周圍輻射源進行排查，未嚴格管理含輻射的儀器，存在輻射源或輻射事故間接導(dǎo)致病原微生物屏障系統(tǒng)破壞的隱患。2.防護控制措施實驗室籌建選址時應(yīng)嚴格排查周邊建筑群存在的輻射源。（三）施康清洗消毒劑Ⅰ1.風險點識別施康清洗消毒劑Ⅰ屬于含氯消毒劑，有效氯的含量為4.55%～5.55%，次氯酸鈉為主要殺菌因子。含氯的消毒液會殘留在空氣中不揮發(fā)，長期使用會使人感到頭疼、惡心。對于有過敏體質(zhì)的人，還容易引發(fā)過敏、哮喘等疾病。高濃度含氯消毒劑對人的呼吸道黏膜和皮膚有明顯的刺激作用，可使人流淚、咳嗽，并刺激皮膚和黏膜，嚴重者可發(fā)生氯氣中毒。急性中毒者出現(xiàn)躁動、惡心、嘔吐、呼吸困難等癥狀，甚至因窒息而死。2.安全防護措施按照使用說明，根據(jù)消毒對象不同而配制不同的濃度，避免使用不必要的高濃度的消毒液，稀釋和使用時戴好手套，消毒后及時開窗通風，基本可規(guī)避消毒液對人體的危害。（四）其他1.風險點識別實驗室內(nèi)的照明和聲音（生物安全柜等）有可能因強光和噪聲對人員造成損害。2.安全防護措施對實驗室的照明和聲音等參數(shù)進行檢測，確保合格，避免強光和噪聲對人員的損害。四、實驗室火災(zāi)風險評估與預(yù)防控制措施1.風險點識別（1）超負荷用電、電線過長。（2）電器和電源老化、電器保養(yǎng)不良，如電纜的絕緣層破舊或損壞。（3）用火不當?shù)纫l(fā)火災(zāi)。（4）儀器設(shè)備在不使用時未關(guān)閉電源。（5）使用的儀器設(shè)備不是專為實驗室環(huán)境設(shè)計。（6）易燃、易爆品處理、保存不當。（7）不相容化學品沒有正確隔離。（8）在易燃物品和蒸汽附近有能產(chǎn)生火花的設(shè)備。（9）通風系統(tǒng)不當或不充分。2.預(yù)防控制措施（1）定期檢查電器插座、電線絕緣層是否完好，保證用電負荷，對易燃、易爆等危險品進行有效區(qū)域隔離。（2）實驗室配備滅火器。放置在易取的地點，擺放部位張貼滅火器標識。該滅火器用于撲滅可控制的火災(zāi)，幫助人員撤離火場；對滅火器進行定期檢查和維護，確保其有效使用。（3）實驗室需裝設(shè)應(yīng)急燈，所有出口都有黑暗中可見的“緊急出口”標識；當出現(xiàn)緊急狀況時，實驗室所有出口的鎖必須處于開啟狀態(tài)，出口設(shè)計應(yīng)保證不經(jīng)過高危險區(qū)域就能逃脫，所有出口都能通向一個開放空間。（4）走廊、流通區(qū)域不放置障礙物，確保人員流動和滅火設(shè)備移動不受影響。（5）在實驗室工作區(qū)顯著位置張貼火警電話標識。實驗室每年對工作人員進行消防知識培訓(xùn)，包括消防器材的使用、火災(zāi)發(fā)生時的應(yīng)急行動等。五、自然災(zāi)害風險評估與安全防護措施自然災(zāi)害可能導(dǎo)致的實驗室緊急狀況主要包括水災(zāi)和地震等。（一）水災(zāi)1.風險點識別水災(zāi)可能導(dǎo)致實驗室維護結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，實驗室內(nèi)感染性材料隨水外溢。2.安全防護措施（1）在安全手冊中制定《實驗室緊急事件應(yīng)急預(yù)案》，并對所有實驗室人員進行培訓(xùn)。（2）實驗室一旦發(fā)生水災(zāi)報警時，應(yīng)立刻停止工作。首先，考慮實驗室內(nèi)感染性物質(zhì)和人員的轉(zhuǎn)移。實驗室負責人、中心主任根據(jù)條件及時采取對策，第一時間聯(lián)系相關(guān)消防人員。消防人員應(yīng)有防護措施，并在受過訓(xùn)練的實驗室工作人員陪同下，進入實驗室完成感染性物質(zhì)和人員的安全轉(zhuǎn)移。（二）地震1.風險點識別發(fā)生地震等自然災(zāi)害會導(dǎo)致實驗室維護結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，導(dǎo)致人員傷害和實驗室感染性材料外溢。2.風險控制措施實驗室應(yīng)采取措施降低自然災(zāi)害帶來的風險，保證發(fā)生后能夠安全撤離實驗室，減少對人員和環(huán)境的影響。發(fā)生地震后，首先，設(shè)立距實驗室維護結(jié)構(gòu)20m范圍內(nèi)的封鎖區(qū)。其次，對封鎖區(qū)進行消毒，然后由專業(yè)人員在做好個人防護的前提下對實驗內(nèi)部環(huán)境邊消毒邊清理。如果保藏樣品的容器沒有被破壞，可把它安全轉(zhuǎn)移到其他安全的實驗室存放。如果保藏樣品的容器已被破壞和發(fā)生外溢的情況，應(yīng)立即用可靠方法進行徹底消毒滅菌。六、生物安全及其他緊急事件（事故）處理預(yù)案（一）實驗室生物安全事件（事故）處理措施（1）當生物安全柜出現(xiàn)時序正壓時，應(yīng)立即停止操作，通知運行保障人員采取措施恢復(fù)負壓。如果不能及時恢復(fù)和保持負壓，應(yīng)停止實驗。發(fā)生此類事故或發(fā)生意外停電，造成具有傳染性物質(zhì)暴露潛在危險的事故和污染時，工作人員除了采取緊急措施外，還應(yīng)立即報告實驗室安全負責人，組織對實驗室進行終末消毒。（2）在離心過程中離心管破裂時，應(yīng)馬上關(guān)閉電源，讓離心機停止工作，并靜止30min。然后，緩慢打開離心機蓋，將離心杯平穩(wěn)地拿到生物安全柜中。如果發(fā)生泄漏，用1%的次氯酸鈉消毒液灌入離心杯腔體中消毒30min，之后棄去消毒液和離心管碎片，將離心杯清洗后擦干。（3）發(fā)生污染物潑濺或溢出時，立即用清潔布或吸水紙覆蓋污染處，并倒上10～25倍稀釋的施康消毒液，作用至少30min，方可清理全部污染物，用消毒劑擦拭污染區(qū)域。所有這些操作過程中都應(yīng)戴手套。如發(fā)生大范圍污染物擴散事故時，應(yīng)立即通知實驗室主管領(lǐng)導(dǎo)和安全負責人到達事故現(xiàn)場。待其查清情況，確定消毒方案，組織對實驗室進行終末消毒。（4）若發(fā)生針頭刺傷或血液標本濺灑而污染人員、器具或環(huán)境等，應(yīng)及時采取有效的消毒處理措施。①被采血針頭刺傷應(yīng)立即用肥皂和大量流水沖洗，盡可能擠出損傷處的血液，并對傷口進行消毒處理。②皮膚污染立即用肥皂和大量流水沖洗污染部位，并進行消毒處理。③黏膜污染用大量流水或生理鹽水沖洗污染部位。④物品污染耐煮沸的物品煮沸20min后清洗；對不能煮沸的衣服等物品，可用消毒液浸泡2h后，再用清水洗滌。⑤地面、墻面等環(huán)境污染可用紫外線照射、甲醛熏蒸或用含氯消毒劑消毒處理。（二）其他緊急事件（事故）處理措施在制訂的應(yīng)急預(yù)案中應(yīng)包括消防人員和其他緊急救助人員。應(yīng)事先告知他們哪些實驗室有潛在的感染性物質(zhì)，讓他們熟悉實驗室的布局和設(shè)備。在實驗室發(fā)生不可控制的火災(zāi)、水災(zāi)、爆炸或其他危險情況時，為確保工作人員的安全，要進行緊急撤離。所有實驗室人員須了解緊急撤離的行動計劃、撤離路線和集合地點。每年至少參加一次緊急撤離演習，包括急救設(shè)備使用和采取相應(yīng)急救措施。（三）生物安全及其他緊急事件（事故）報告和記錄（1）發(fā)生生物安全及其他緊急事件時，在緊急處理的同時必須向中心主管領(lǐng)導(dǎo)和生物安全委員會報告。（2）對于生物安全事件必須進行登記，記錄發(fā)生的時間、地點、詳細經(jīng)過和處理方法等。七、生物安全和生物安全保障風險管理（一）生物安全風險評估依據(jù)風險評估所依據(jù)的數(shù)據(jù)及擬采取的風險控制措施、安全操作規(guī)程等均應(yīng)以國家衛(wèi)生和計劃生育委員會、世界衛(wèi)生組織、國際標準化組織等機構(gòu)或行業(yè)權(quán)威機構(gòu)發(fā)布的指南、標準等為依據(jù)。（二）危險發(fā)生的概率評估（見表5-2）表5-2戊型肝炎病毒實驗危險發(fā)生的概率評估序號潛在危險因素危害程度發(fā)生概率固有風險措施合理性殘留風險風險可控程度1樣本運輸過程中容器意外側(cè)翻、破裂導(dǎo)致樣本泄露中度可能中度合理低風險可控2樣本接收、開啟及加樣等常規(guī)實驗活動中產(chǎn)生氣溶膠中度較大可能中度合理低風險可控3離心過程中樣本管破裂產(chǎn)生大量氣溶膠中度可能中度合理低風險可控4檢測未經(jīng)滅活的樣本對儀器與環(huán)境造成污染中度較大可能中度合理低風險可控5樣本、實驗材料及設(shè)施設(shè)備等被誤用中度較小可能中度合理低風險可控6陽性樣本被惡意使用高度較小可能高度合理低風險可控7廢棄物處理不當造成病原微生物擴散中度可能中度合理低風險可控8檢測人員及工勤人員破損的皮膚、黏膜接觸到血液樣本或被銳器刺傷等造成職業(yè)暴露

中度

可能

中度

合理

低風險

可控9檢測人員個人防護不當造成病原微生物擴散中度可能中度合理低風險可控10非檢測人員、進修實習等外來人員進入實驗室的不當操作造成病原微生物擴散

中度

可能

中度

合理

低風險

可控11水、電、火災(zāi)或自然災(zāi)害造成病原微生物擴散中度較小可能中度合理低風險不可控（三）風險評估人員由中心主任組織檢驗科、質(zhì)量管理科及其他科室熟悉HEV檢驗相關(guān)風險的專業(yè)人員進行風險評估并形成風險評估報告。形成的風險評估報告經(jīng)中心生物安全委員會審核，請省市熟悉相關(guān)病原微生物特征、實驗設(shè)施設(shè)備、操作規(guī)程及個體防護設(shè)備的不同領(lǐng)域的專家進行評估和討論，不斷修訂完善。（四）風險評估報告風險評估報告應(yīng)是實驗室采取風險控制措施、建立安全管理體系和制訂安全操作規(guī)程的依據(jù)。在記錄風險評估的過程中，風險評估報告應(yīng)注明評估時間、編審人員和所依據(jù)的法規(guī)、標準、研究報告、權(quán)威資料及數(shù)據(jù)等。（五）需重新進行風險評估的情況（1）生物安全實驗室改造前（或新建造前）和正式啟用前。（2）當收集到的資料表明HEV的致病性或傳染方式發(fā)生變化時，應(yīng)對其背景資料及時變更，并對其實驗操作的安全性進行重新評估。（3）開展新的實驗活動（增加新的項目），應(yīng)對該項目的實驗活動進行再評估。（4）生物安全實驗室操作人員在進行實驗活動中，發(fā)現(xiàn)有原評估報告中未涉及的隱患存在，或者在檢查過程中發(fā)現(xiàn)存在生物安全問題，應(yīng)進行在評估。（5）在實驗活動中發(fā)現(xiàn)陽性標本泄露或人員感染等意外事件或事故時，應(yīng)立即進行再評估。（6）當評估過的實驗活動（包括相關(guān)的設(shè)施、設(shè)備、人員