吳醫(yī)銀翹防疫方對慢性脂多糖誘導肺損傷小鼠肺黏膜免疫及其相關因子的影響-國際中醫(yī)藥研究

【摘要】目的研究吳醫(yī)銀翹防疫方對脂多糖（LPS）誘導的慢性肺損傷小鼠肺黏膜免疫及其相關細胞II、ACE和ACE2蛋白分布與強度變化。結(jié)果與對照和充血水腫，以及伴隨大量的炎性浸潤情況等，且病理組織學損傷評分明顯升高（P＜0.05模型組小鼠），吳醫(yī)銀翹防疫方以劑量依賴性減輕了肺損傷小鼠肺組織破壞程度（P＜0.05），各劑量組明顯抑制肺損傷小）；【關鍵詞】吳醫(yī)銀翹防疫方；肺黏膜損傷；呼吸道黏膜免疫；小GSWS2023015）；2024年蘇州市吳門醫(yī)派驗方評價與轉(zhuǎn)化重點實驗室項目（編EffectsofWuyiYinqiaoFangyiPrescription1SuzhouHospitalofChineseMedicineAffiliatedtoNanji2SuzhouWumenMedicalSchoolKeyLaboratoryofPrescriptionEvaluationand【Abstract】ObjectiveTostudytheeffectsofWuyiyinqiaoJiangu吳醫(yī)銀翹防疫方對慢性脂多糖誘導肺損傷小鼠肺黏膜免andrelatedcytokinesinmicewithLPSinducewasestablishedbyrepeatedinfusionofLPS(crudedrug/kg)andhigh(20.0gcrudedrug/kg)dosegroups.Aftersuccessfanesthetizedandkilledafter3weeksafterretissuewereextracted.HEstainingwasusedtoobservethepathologicalchangesoflungtissue.ThelevelsofIL-4,andthedistributionandintensityofAngII,ACEandACE2proteinsinlungmucosaweandimmunohistochemistry,respectively.Resseptumwidening,hyperemiaandedema,andalargenumberofinflammatoryinfiltrateswereobservegroup,andthehistopathologicproteinsinlungmucosaltissuesofmiceinmodelgroupincontrolgroup(P<0.05).ThemeanopticaldistributioninlungmucosaltissueofmiceinmodelgroupwassignificantlyhigherproteinandtheincreasedlevelsofIL-6andIFN-γinlungmucosaltiseachdosegroup(P<0.05).TheelevatedlevelsofIL-4,TGF-βandTNF-αinlthatWuyiyinqiaoJianguoprescriptioninhibitedtheenhancementofAngII,ACEdistributionandtheincreaseofaverageopticaldensityintensityinlungmucosaltissuesofmicewithlunginjuryadose-dependentway.Codosegroups(P<0.05).ConclusionByregulatingtheexpressionofIgAandpIgR,aswellas6,TGF-β,IFN-γandTNF-α,WuyiYinjujianprescriptioncactivityinlungmucosa.Inthisway,thelungmucosalimmunefunctioncanberegulalungmucosalinjuryinducedbyLPS.【Keywords】WuyiYinqiaoFangyipresc呼吸道感染性疾病是威脅人類健康的多發(fā)病和常見病。呼吸道黏膜免疫功能是機體防御外來有害物質(zhì)如病毒、細菌等入侵的第一道防線，而肺黏膜免疫機能是保護呼吸系統(tǒng)免受病原體、毒素和機械損傷的侵害最重要的防御屏障。疫苗和抗生素、激素等西藥即時能夠體現(xiàn)一定的效用，但是長遠來講很難避免病毒變異、耐藥和毒副作用[1]帶來的“問 題”?；趥鹘y(tǒng)中醫(yī)藥防治呼吸道感染性疾病長期功能是中醫(yī)理論“正氣”的主要表現(xiàn)和抗感染的主體，而中醫(yī)藥治療眾多感染性疾病的特色和優(yōu)勢即是維護機體之正氣，提高機體的免疫機能，主要通過調(diào)節(jié)黏膜局部紊亂的免疫功能狀態(tài)起到增強整體免疫機能和修復能力，對于抗呼吸道感染性疾病起到積吳醫(yī)銀翹防疫方為蘇州市中醫(yī)醫(yī)院吳門醫(yī)派專家組充分運用吳門醫(yī)派溫病學說理論和臨證經(jīng)驗，基于吳門醫(yī)派驗方和經(jīng)方（銀翹散、玉屏風散和藿究已經(jīng)表明吳醫(yī)銀翹防疫方輔助治療病毒性上呼吸其機制可能主要與調(diào)節(jié)炎癥因子和干預血管緊張素吳醫(yī)銀翹防疫方對慢性脂多糖誘導肺損傷小鼠肺黏膜免細胞外壁中的一種成分，它是誘發(fā)炎癥最主要的病原分子之一，被廣泛應用于建立急性和慢性炎癥的白受體（pIgR）蛋白表達異常降低[8]。基于期基礎和新近研究報道，本研究筆者進一步從改善呼吸道黏膜免疫功能低下的角度，以從鼻腔向呼吸鼠動物模型為研究對象，探究了吳醫(yī)銀翹防疫方對病的潛在效能而深入闡明黏膜免疫調(diào)節(jié)機制提供新的思路，以期為吳醫(yī)銀翹防疫方的綜合利用及新的上海一恒科學儀器有限公司。恒溫烘箱：上海恒一科學儀器有限公司；電泳儀（miniprote司。成像系統(tǒng)（5200）：Tanon公司。石蠟切片機（SQ2125）、攤片機（PPTHK-21B徠克公司。）：鼠飼養(yǎng)和實驗于領致生物科技（昆山）有限公司標中中藥飲片由蘇州市中醫(yī)醫(yī)院藥學部鑒定和提供，并由蘇州市吳門醫(yī)派驗方評價與轉(zhuǎn)化重點實驗室根購自北京百奧萊博科技有限公司，貨號：QN0166。（HE）和廣譜二抗：鴻泉生物科技有限公司產(chǎn)品。2.1LPS誘導的肺損傷模型小鼠模型建立及分40只ICR雌性小鼠，適應性飼養(yǎng)1周后隨機分參考文獻[9]并適當改良，采用從鼻腔向呼吸道內(nèi)反），），天和57天分別從鼻腔向小鼠呼吸道內(nèi)滴入生理鹽），術檢測目標組織中IgA蛋白表達情況，并采用ELISA法對應檢測各組肺黏膜組織中IgA相關細胞2.3pIgR的蛋白表達及其相關細吳醫(yī)銀翹防疫方對慢性脂多糖誘導肺損傷小鼠肺黏膜免術檢測目標組織中pIgR蛋白表達情況，并采用取各組經(jīng)甲醛固定的肺臟組織和肺黏膜組織，炎癥細胞浸潤程度等）。根據(jù)病理損傷嚴重程度進實驗數(shù)據(jù)用GraphPadprism軟件進行統(tǒng)計學-實驗小鼠適應性喂養(yǎng)期間，飲食正常、活動頻及造模進程中，相對于空白組，其它組實驗小鼠逐扎堆聚集以及呼吸喘促和身體顫抖的現(xiàn)象。經(jīng)過不組和模型組以生理鹽水灌胃）后，模型組小鼠身體顫抖狀況略有減輕，其他情況均未有改善，吳醫(yī)銀翹防疫方以劑量依賴性明顯改善了以上的一般情況。主要的表現(xiàn)為呼吸喘促、身體顫抖和精神萎靡狀況有所減輕，但是仍然偶爾有食欲欠佳和扎堆聚集的因子IL-4、IL-6和TGF-β水平均明顯升高（P均<3.3吳醫(yī)銀翹防疫方對肺黏膜pIgR的蛋白表鼠肺黏膜組織中pIgR蛋白表達明顯降低且相關細以不同劑量吳醫(yī)銀翹防疫方以灌胃干預肺損傷小鼠3周后，發(fā)現(xiàn)吳醫(yī)銀翹防疫方各劑量組明顯抑制肺3.4吳醫(yī)銀翹防疫方對對肺損傷小鼠肺組織病理學改變以及肺黏膜組織AngII、ACE和ACE2分鼠肺組織結(jié)構發(fā)生一定程度的破壞，主要變現(xiàn)為肺泡萎縮、間隔變寬和充血水腫，以及伴隨大量的炎以不同劑量吳醫(yī)銀翹防疫方以灌胃干預肺損傷輕了肺損傷小鼠肺組織破壞程度。主要體現(xiàn)為肺泡間隔厚度縮小、充血水腫緩解和炎性浸潤減少，且吳醫(yī)銀翹防疫方的高劑量能明顯抑制肺損傷小鼠肺以不同劑量吳醫(yī)銀翹防疫方以灌胃干預肺損傷蛋白染色分布增強及其平均光密度強度升高。與模型組比較，吳醫(yī)銀翹防疫方的中、高劑量能明顯抑吳醫(yī)銀翹防疫方對慢性脂多糖誘導肺損傷小鼠肺黏膜免注：A為空白組；B為LPS-肺損傷小鼠模型組；C-E為LPS-肺損傷小鼠+吳醫(yī)銀翹防疫方低、中、高（5.0g生藥/kg、10.0g生藥/kg、高20.0g生藥/kg）劑量組。與空白組比較，*P<0.05；與LPS-肺損傷小鼠模型組比較，#P＜0.05。以下結(jié)果標注均同此。-圖2吳醫(yī)銀翹防疫方對肺損傷小鼠肺黏膜組織中pIgR蛋白表達及其相關細胞因子I吳醫(yī)銀翹防疫方對慢性脂多糖誘導肺損傷小鼠肺黏膜免-傳統(tǒng)中醫(yī)將呼吸道感染性疾病歸為“疫病”的討吳門醫(yī)派在疫病治療方面有豐富的經(jīng)驗和許多經(jīng)典著作，吳門醫(yī)派歷代醫(yī)家結(jié)合流行病學和發(fā)熱病學結(jié)了診斷治療體系。在致病機理上：傳染病并非秋辨白疹子等方法，區(qū)別普通發(fā)熱與疫病，重視預防肺”，出現(xiàn)癥狀的肯定是呼吸系統(tǒng)。在臨床診治上：吳醫(yī)銀翹防疫方對慢性脂多糖誘導肺損傷小鼠肺黏膜免吳醫(yī)銀翹防疫方來源有三：吳門醫(yī)派溫病第一表、清熱解毒的作用，用于溫病初期邪在肺衛(wèi)之衛(wèi)分證。其可增加流感病毒感染小鼠支氣管肺泡灌洗而達到提高上呼吸道黏膜免疫功能的作用，方中的黃酮類物質(zhì)可以抑制流感病毒唾液酸酶的活性、抑制膜融合的作用，具有很好的抗病毒作用[14]。二是），其可通過修復腸道機械屏障和調(diào)節(jié)腸道免疫屏障來改善腸道環(huán)境[15]。原此，吳醫(yī)銀翹防疫方主要由金吳門銀翹防疫方結(jié)合西藥病毒性上呼吸道感染臨床研究表明，在癥狀緩解情況（體溫開始降低和翹防疫方參與調(diào)控呼吸道黏膜免疫關鍵靶點分子包（MPO）等；分子對接實驗表明，關鍵靶點與吳門是人類血管緊張素轉(zhuǎn)換酶同源物，是一種鋅金屬蛋是病毒的膜上結(jié)合受體之一，與病毒和宿主細胞的融合、入侵過程有關[16]。動物實驗研究報道證實小小鼠的分化期口腔頰黏膜上皮細胞中表達ACE2，基因，部分基因呈現(xiàn)特異性表達[17]。前期筆者也發(fā)現(xiàn)吳門銀翹防疫方可以抑制高寒冷致上呼吸道黏膜損傷模型小鼠為研究對象，從改善肺黏膜免疫功能低下的角度探究吳醫(yī)銀翹防疫方對呼吸道黏膜中CoV-2Spike-ACE2相互作用的潛在效能而深入闡明黏膜免疫調(diào)節(jié)機制提供新的思路。結(jié)果表明，吳醫(yī)銀翹防疫方通過調(diào)控肺組織損傷黏膜免疫屏障低其增強肺黏膜免疫功能發(fā)揮潛在的抗呼吸道感染性[1]李柔,凌飛翔,馬禮兵.疫苗在呼吸道感染性疾病的應用及研究現(xiàn)狀[J].實用醫(yī)學雜志,2023,39(0[2]郭媛媛,王飄,李江,等.中藥對上呼吸道感染的治療作用及機制研究進展[J].中國醫(yī)藥導刊,2023,25(05):4[3]蔣文杰,陸珍琦,陳江,等.吳門醫(yī)派疫病證治學術思想探析[J].中華中醫(yī)藥雜志,2021,36(08):4[4]袁杰,周運海,梁國強.蘇州市吳門醫(yī)派治療新型冠狀病[5]皋青青,梁國強,黃燕鳳,等.吳門銀翹方輔助治療病毒性上呼吸道感染的臨床研究[J].家庭藥師,2023,16(2):7-[6]HengXU,FangyuanLI,GuoqiangLIAPharmacology,MolecularDockingandExperimentalExploringMolecularMechanismsofYinqiaoAnti-Epid