羊肚菌液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

ICS65.020.20

CCSB05

DB1308

承德市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB1308/T314—2022

羊肚菌液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

2022-10-31發(fā)布2022-11-01實(shí)施

承德市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB1308/T314—2022

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。

本文件起草單位：平泉市希才應(yīng)用菌科技發(fā)展有限公司。

本文件主要起草人：梁曉生、劉海軍、柳鳳玉、李大港、張晨光、梁希才、梁宏麗、孫彥平、孟凡

飛、劉紹蒼、王彥玲、王帥。

I

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羊肚菌液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了羊肚菌液體菌種生產(chǎn)的生產(chǎn)環(huán)境、前期準(zhǔn)備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。

本文件適用于羊肚菌液體菌種生產(chǎn)的過程管理。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引

用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

改單）適用于本文件。

本文件沒有規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4生產(chǎn)環(huán)境

生產(chǎn)車間環(huán)境整潔，通風(fēng)良好，溫度20℃～23℃，符合安全生產(chǎn)需求。

5前期準(zhǔn)備

5.1制種設(shè)備

由無菌空氣過濾系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、冷卻系統(tǒng)、停電保護(hù)裝置、耐高壓罐體等組成。

5.2其他設(shè)備工具

發(fā)酵罐、高壓滅菌鍋﹑磁力攪拌機(jī)、電磁爐﹑顯微鏡、搖床、電子秤、玻璃杯、500ml三角瓶﹑1000

ml燒杯﹑玻璃棒、磁力攪拌子、棉塞、小勺﹑刀、菜板、牛皮紙、繩、pH試紙等。

5.3原料

新鮮土豆﹑葡萄糖粉﹑化學(xué)純磷酸二氫鉀﹑化學(xué)純硫酸鎂﹑化學(xué)純蛋白胨﹑瓊脂粉、100目豆粕粉、

食品級(jí)消泡劑等。

6操作流程

母種擴(kuò)繁培養(yǎng)液制作→發(fā)酵罐準(zhǔn)備→原種制作→檢驗(yàn)→備用。

7操作方法

１

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7.1母種擴(kuò)繁培養(yǎng)液制作

用燒杯量取1000ml水，放電爐上燒開，依次將豆粕5g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g

倒入燒杯中，用玻璃棒不斷攪拌均勻，使其完全溶解。培養(yǎng)液配制好后，裝入500ml三角瓶中，每瓶裝

150ml，加入1顆磁力攪拌子，加棉塞后再包扎牛皮紙封口。在1.5kg/cm2壓力（121℃）下滅菌30min，

取出冷卻到30℃以下時(shí)，接入一塊約2cm2的斜面母種或6～10塊2mm2的斜面母種。于23℃～25℃下靜

置培養(yǎng)48h，再置放到復(fù)式搖床上振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為80～100次/min，振幅6cm～10cm。如果用旋

轉(zhuǎn)式搖床，振蕩頻率為200～220轉(zhuǎn)/min。搖床室溫控制在24℃～25℃，一般7d左右，達(dá)到培養(yǎng)液清澈透

明，液中懸浮著大量小菌絲球，并伴有相關(guān)菇類特有的香味為宜。

7.2發(fā)酵罐準(zhǔn)備

7.2.1清理

發(fā)酵罐在使用之前和使用之后都要進(jìn)行徹底的清洗，洗罐水由罐底排污管道排出。清潔的標(biāo)準(zhǔn)為罐

內(nèi)壁無懸掛物，無殘留菌球，排放的水清澈無污物。清洗完畢后，檢查發(fā)酵罐的各個(gè)部件和控制系統(tǒng)，

合格后方能開始工作。

7.2.2滅菌和使用

對(duì)于新的發(fā)酵罐、染菌的發(fā)酵罐、長(zhǎng)時(shí)間不用的發(fā)酵罐要進(jìn)行空消。首先關(guān)閉所有閥門，打開電源

開關(guān)，將滅菌開關(guān)旋至開，打開蒸汽至罐內(nèi)部線路所有開關(guān)，打開過濾器滅菌線路所有開關(guān)，空消壓力

0.1Mpa，溫度119℃，時(shí)間30min?？障Y(jié)束后，將滅菌開關(guān)關(guān)閉，逆行關(guān)閉過濾器滅菌線路開關(guān)和蒸

汽線路開關(guān)，打開排氣線路開關(guān)，降壓后開罐使用。

7.3原種制作

7.3.1預(yù)熱

加水至視鏡下方第一顆螺釘平齊處，打開滅菌開關(guān)和夾層進(jìn)出蒸汽線路開關(guān)，進(jìn)行預(yù)熱，每隔10min

打開進(jìn)氣開關(guān)攪拌1min，預(yù)熱至80℃時(shí)開始配料。

7.3.2配料

稱取葡萄糖7.5kg﹑豆粕粉1.5kg﹑酵母膏1.5kg﹑磷酸二氫鉀500g、硫酸鎂250g﹑消泡劑600ml~800

ml。將除消泡劑外的原料用罐內(nèi)熱水溶解后加入加料罐，吹入高溫氣體攪拌均勻。等罐內(nèi)水溫達(dá)到90℃

后便可加料。用壓力將混合均勻的營(yíng)養(yǎng)料加入罐內(nèi)，最后加入消泡劑。

7.3.3滅菌

將夾層蒸汽開關(guān)關(guān)閉，打開罐內(nèi)蒸汽開關(guān)。將過濾器滅菌線路開關(guān)打開，開始升溫滅菌。滅菌溫度

為119℃，壓力0.1Mpa，時(shí)間60min。滅菌結(jié)束后將蒸汽開關(guān)和過濾器滅菌線路開關(guān)關(guān)閉。

7.3.4冷卻

打開排氣線路開關(guān)自動(dòng)降壓至罐內(nèi)壓力為0.03Mpa左右時(shí)，打開進(jìn)氣閥門，并打開自來水和冷卻進(jìn)

排管路的開關(guān)，開始降溫，直至降溫到培養(yǎng)溫度24℃。

7.3.5接種

２

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將搖瓶種于接種前放置磁力攪拌器上攪拌12h，待發(fā)酵罐溫度降到培養(yǎng)溫度時(shí)開始接種。關(guān)閉進(jìn)氣

閥門將罐內(nèi)壓力降至排氣管微有氣體排出，關(guān)閉排氣閥。將火焰圈套至接種口點(diǎn)燃，打開接種口后，將

進(jìn)氣開關(guān)微開，使接種口微有氣體排出。將搖瓶在火焰圈的保護(hù)下打開瓶口，倒入罐內(nèi)。擰緊接種口蓋

后用濕毛巾熄滅火焰圈。打開進(jìn)出氣閥門，調(diào)節(jié)罐內(nèi)壓力至0.03Mpa進(jìn)入培養(yǎng)階段。

7.3.6培養(yǎng)

培養(yǎng)溫度為24℃，壓力為0.03Mpa，培養(yǎng)5h。培養(yǎng)過程中每天觀察發(fā)酵罐壓力﹑溫度﹑氣味﹑氣流

量等相關(guān)數(shù)據(jù)并填寫培養(yǎng)記錄表。

7.4檢驗(yàn)

7.4.1取樣

發(fā)酵液培養(yǎng)滿3h和5h時(shí)各取樣檢驗(yàn)一次。取樣時(shí)在火焰的保護(hù)下用無菌瓶接取少量發(fā)酵液，然后

用75％酒精沖洗出料口消毒。所取樣液在超凈工作臺(tái)內(nèi)接種平板和栽培包后涂片鏡檢。

7.4.2感官檢查

7.4.2.1看

將樣品靜置桌上觀察。一看菌液顏色和透明度；二看菌絲形態(tài)和大小；三看上清液與沉淀的比例中

菌絲體占比，第一次檢驗(yàn)菌絲占比≥65%、第二次檢驗(yàn)菌絲占比≥80%為合格。

7.4.2.2旋

手提樣品瓶輕輕旋轉(zhuǎn)一下，觀其菌絲體的特點(diǎn)。醪液的粘稠度高，說明菌種性能好；稀薄表明菌球

少，不宜使用。菌絲的懸浮力好，放置5min不沉淀，表明菌種生長(zhǎng)力強(qiáng)；反之，如果菌絲極易沉淀，

說明菌絲已老化或死亡。

7.4.2.3嗅

在旋轉(zhuǎn)樣品后，打開瓶蓋嗅氣味。培養(yǎng)好的優(yōu)質(zhì)液體菌種，均具有芳香氣味；染雜菌的培養(yǎng)液則散

發(fā)出酸、甜、霉、臭等各種異味。

7.4.3理化試驗(yàn)

7.4.3.1菌絲干重

量取液體菌種10ml，用水分測(cè)試儀烘干至含水量18%，然后稱量菌絲干重。菌絲干重第一次檢驗(yàn)

≥1.5g、第二次檢驗(yàn)≥2g為合格。

7.4.3.2液體粘稠度

將液體菌種置于量筒中，使用比重計(jì)進(jìn)行粘稠度測(cè)量。第一次檢驗(yàn)比重﹥1.0、二次檢驗(yàn)比重≥1.2

為合格。

7.4.3.3pH值測(cè)定

將液體菌種取出后，使用pH值酸度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。第一次檢驗(yàn)pH值4.5～4.8、第二次檢驗(yàn)pH值4～4.2

為合格。

３

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7.4.3.4菌絲活力

將液體菌種菌絲球轉(zhuǎn)接與平板PDA培養(yǎng)基上，28℃恒溫培養(yǎng)24h，菌絲球正常萌發(fā)菌絲為合格。

7.5備用

當(dāng)平板和栽培包所接樣品正常萌發(fā)，鏡檢無雜菌感染后，液體菌種方可投入使用。使用時(shí)在火焰的

保護(hù)下連接接種管道，接種過程中罐內(nèi)壓力維持在0.1Mpa。接種結(jié)束后放掉多于菌液，及時(shí)清洗發(fā)酵

罐和接種管道。

_________________________________

４

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。

本文件起草單位：平泉市希才應(yīng)用菌科技發(fā)展有限公司。

本文件主要起草人：梁曉生、劉海軍、柳鳳玉、李大港、張晨光、梁希才、梁宏麗、孫彥平、孟凡

飛、劉紹蒼、王彥玲、王帥。

I

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羊肚菌液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了羊肚菌液體菌種生產(chǎn)的生產(chǎn)環(huán)境、前期準(zhǔn)備、操作流程以及各步驟的操作方法指示。

本文件適用于羊肚菌液體菌種生產(chǎn)的過程管理。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引

用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修

改單）適用于本文件。

本文件沒有規(guī)范性引用文件。

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4生產(chǎn)環(huán)境

生產(chǎn)車間環(huán)境整潔，通風(fēng)良好，溫度20℃～23℃，符合安全生產(chǎn)需求。

5前期準(zhǔn)備

5.1制種設(shè)備

由無菌空氣過濾系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、冷卻系統(tǒng)、停電保護(hù)裝置、耐高壓罐體等組成。

5.2其他設(shè)備工具

發(fā)酵罐、高壓滅菌鍋﹑磁力攪拌機(jī)、電磁爐﹑顯微鏡、搖床、電子秤、玻璃杯、500ml三角瓶﹑1000

ml燒杯﹑玻璃棒、磁力攪拌子、棉塞、小勺﹑刀、菜板、牛皮紙、繩、pH試紙等。

5.3原料

新鮮土豆﹑葡萄糖粉﹑化學(xué)純磷酸二氫鉀﹑化學(xué)純硫酸鎂﹑化學(xué)純蛋白胨﹑瓊脂粉、100目豆粕粉、

食品級(jí)消泡劑等。

6操作流程

母種擴(kuò)繁培養(yǎng)液制作→發(fā)酵罐準(zhǔn)備→原種制作→檢驗(yàn)→備用。

7操作方法

１

DB1308/T314—2022

7.1母種擴(kuò)繁培養(yǎng)液制作

用燒杯量取1000ml水，放電爐上燒開，依次將豆粕5g、葡萄糖20g、磷酸二氫鉀3g、硫酸鎂1.5g

倒入燒杯中，用玻璃棒不斷攪拌均勻，使其完全溶解。培養(yǎng)液配制好后，裝入500ml三角瓶中，每瓶裝

150ml，加入1顆磁力攪拌子，加棉塞后再包扎牛皮紙封口。在1.5kg/cm2壓力（121℃）下滅菌30min，

取出冷卻到30℃以下時(shí)，接入一塊約2cm2的斜面母種或6～10塊2mm2的斜面母種。于23℃～25℃下靜

置培養(yǎng)48h，再置放到復(fù)式搖床上振蕩培養(yǎng)，振蕩頻率為80～100次/min，振幅6cm～10cm。如果用旋

轉(zhuǎn)式搖床，振蕩頻率為200～220轉(zhuǎn)/min。搖床室溫控制在24℃～25℃，一般7d左右，達(dá)到培養(yǎng)液清澈透

明，液中懸浮著大量小菌絲球，并伴有相關(guān)菇類特有的香味為宜。

7.2發(fā)酵罐準(zhǔn)備

7.2.1清理

發(fā)酵罐在使用之前和使用之后都要進(jìn)行徹底的清洗，洗罐水由罐底排污管道排出。清潔的標(biāo)準(zhǔn)為罐

內(nèi)壁無懸掛物，無殘留菌球，排放的水清澈無污物。清洗完畢后，檢查發(fā)酵罐的各個(gè)部件和控制系統(tǒng)，

合格后方能開始工作。

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