臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范課件

臨床微生物學(xué)

尿培養(yǎng)操作規(guī)范臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范

尿路感染是指尿道內(nèi)有大量微生物繁殖而引起的尿路炎癥。尿路感染并非是一種單一的疾病，而是一種臨床綜合征。根據(jù)感染部位可分為上尿路感染（如腎盂腎炎）及下尿路感染（如膀胱炎），男性還可出現(xiàn)前列腺感染，不同部位同時(shí)感染也很常見(jiàn)。尿路感染是人類最常見(jiàn)的感染之一，可發(fā)生于各個(gè)年齡段的人群，好發(fā)于女性，男:女之比為1:10。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范典型的臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、尿頻、尿急、尿痛、排尿困難和恥骨上壓痛，臨床表現(xiàn)可因患者年齡和健康狀況不同而異。新生兒尿路感染的癥狀往往是非特異性的、模湖的，可表現(xiàn)有厭食，嘔吐，倦怠，無(wú)發(fā)熱的菌血癥等；嬰兒期直到2歲，常有高熱；2歲以后的尿路感染才會(huì)有典型的臨床表現(xiàn)；老年患者的尿路感染，常缺乏明顯的癥狀，更易造成菌血癥和急性腎功能衰竭，應(yīng)引起重視。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范

診斷尿路感染最常用的方法是進(jìn)行尿液標(biāo)本的細(xì)菌學(xué)檢查，主要致病菌可因尿路感染的原因不同而有所不同（表1）。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范表１尿路感染的原因及常見(jiàn)病原菌

感染原因 主要致病菌 感染特點(diǎn)上行感染大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌、淋病奈瑟菌主要為腸道菌群或會(huì)陰部細(xì)菌逆行感染，多見(jiàn)于女性，多為單一細(xì)菌感染，以大腸埃希菌感染最常見(jiàn)泌尿系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)和生理功能改變引起的感染大腸埃希菌、克雷伯菌、變形桿菌、腸桿菌、普羅威登菌、沙雷菌、不動(dòng)桿菌、假單胞菌、葡萄球菌、腸球菌多見(jiàn)于留置導(dǎo)尿管、腎盂造瘺術(shù)、尿路結(jié)石、尿路重建、前列腺肥大、膀胱排空能力受損的患者，容易發(fā)生多種微生物的混合感染，易被誤認(rèn)為標(biāo)本污染發(fā)生于菌血癥的患者，血液中的細(xì)菌通過(guò)血流進(jìn)入腎臟引起感染，比較少見(jiàn)血行感染葡萄球菌、結(jié)核分枝桿菌、沙門(mén)菌直接感染大腸埃希菌、葡萄球菌、鏈球菌、腸桿菌外傷或腎周?chē)鞴侔l(fā)生感染時(shí)，細(xì)菌直接侵入腎臟引起感染，非常少見(jiàn)臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范

一、尿液標(biāo)本采集和運(yùn)送１．采集指征：有典型的尿路感染癥狀；肉眼膿尿或血尿；尿常規(guī)檢查表現(xiàn)為白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽(yáng)性；不明原因發(fā)熱，無(wú)其他局部癥狀；留置導(dǎo)尿管的患者出現(xiàn)發(fā)熱；膀胱排空功能受損；泌尿系統(tǒng)疾病手術(shù)前臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范２．采集方法：

標(biāo)本采集應(yīng)力爭(zhēng)在未使用抗生素之前，注意避免消毒劑污染標(biāo)本，方法有：

（１）清潔中段尿：最好留取早晨清潔中段尿標(biāo)本，囑咐患者睡前少飲水，清晨起床后用肥皂水清洗會(huì)陰部，女性應(yīng)用手分開(kāi)大陰唇，男性應(yīng)翻上包皮，仔細(xì)清洗，再用清沖洗尿道口周?chē)婚_(kāi)始排尿，將前段尿排去，中段尿約10～20ml直接排入專用的無(wú)菌容器中，立即送檢，2h內(nèi)接種。該方法簡(jiǎn)單易行，是最常用的尿培養(yǎng)標(biāo)本收集方法，但很容易受到會(huì)陰部細(xì)菌污染，應(yīng)由醫(yī)務(wù)人員采集或在醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo)下由患者正確留取。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范

（２）恥骨上膀胱穿刺：使用無(wú)菌注射器直接從恥骨上經(jīng)皮膚消毒穿入膀胱吸取尿液，是評(píng)估膀胱內(nèi)細(xì)菌感染的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法，但有一定的痛苦，患者難以接受。主要用于厭氧菌培養(yǎng)或留取標(biāo)本困難的嬰兒尿標(biāo)本的采集。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范

（３）直接導(dǎo)尿：按常規(guī)方法對(duì)會(huì)陰部進(jìn)行消毒后，用導(dǎo)尿管直接經(jīng)尿道插入膀胱，獲取膀胱尿液，可減少尿液標(biāo)本污染，準(zhǔn)確地反映膀胱感染情況。但有可能將下尿道細(xì)菌引入膀胱，導(dǎo)致繼發(fā)感染，一般不提倡使用。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范

（４）留置導(dǎo)尿管收集尿液：利用留置導(dǎo)尿管采集標(biāo)本時(shí)，應(yīng)先消毒導(dǎo)尿管外部，按無(wú)菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液，操作時(shí)應(yīng)防止混入消毒劑，注意不能從尿液收集袋中采集尿液。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范３．采集容器：應(yīng)由不與尿液成份發(fā)生反應(yīng)的惰性材料制成；潔凈、無(wú)菌、加蓋、密封、防滲漏；不含防腐劑和抑菌劑；廣口、具有較寬的底部、容積應(yīng)大于50ml、盒蓋易于開(kāi)啟。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范４．標(biāo)本運(yùn)送：

標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)送檢、及時(shí)接種，室溫下保存時(shí)間不得超過(guò)2h（夏季保存時(shí)間應(yīng)適當(dāng)縮短或冷藏保存），4°C冷藏保存時(shí)間不得超過(guò)8h，但應(yīng)注意冷藏保存的標(biāo)本不能用于淋病奈瑟菌培養(yǎng)。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范二、標(biāo)本驗(yàn)收１．申請(qǐng)單驗(yàn)收：要求尿培養(yǎng)申請(qǐng)單除患者的基本信息以外還應(yīng)包括標(biāo)本收集時(shí)間、收集方式、是否已使用過(guò)抗生素等，驗(yàn)收時(shí)應(yīng)檢查申請(qǐng)單是否填寫(xiě)完整。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范２．標(biāo)本驗(yàn)收：（１）檢查標(biāo)本標(biāo)識(shí)是否與申請(qǐng)單相符；（２）檢查標(biāo)本容器有無(wú)溢漏、滲出，是否加蓋；（３）檢查送檢時(shí)間是否超過(guò)標(biāo)本保存時(shí)間。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范３．不合格標(biāo)本處理：（１）對(duì)申請(qǐng)單信息不全者應(yīng)設(shè)法與臨床醫(yī)生取得聯(lián)系；（２）對(duì)標(biāo)識(shí)不符、送檢容器不合格、送檢時(shí)間超過(guò)規(guī)定時(shí)間的標(biāo)本應(yīng)注明原因，退回，要求重新留取標(biāo)本，并做記錄。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范三、實(shí)驗(yàn)室檢查１．涂片檢查：尿路感染標(biāo)本可直接做細(xì)菌培養(yǎng)無(wú)需常規(guī)進(jìn)行涂片檢查。對(duì)于臨床懷疑淋病奈瑟菌、假絲酵母菌或結(jié)核分枝桿菌感染的標(biāo)本可用無(wú)菌吸管吸取尿液5～10ml置無(wú)菌試管中，3000～4000r/min離心30min，傾去上清液，取沉渣涂片，行革蘭染色或抗酸染色后鏡檢。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范

２．細(xì)菌培養(yǎng)：（１）普通培養(yǎng)：將收集標(biāo)本的容器輕輕旋轉(zhuǎn)混勻，用定量接種環(huán)分別取尿液1ul涂抹接種血平板和麥康凱平板（或中國(guó)藍(lán)平板），35～37°C培養(yǎng)18～24h，觀察結(jié)果。對(duì)導(dǎo)尿、恥骨上膀胱穿刺和已使用抗生素治療的患者標(biāo)本應(yīng)增加一個(gè)10ul接種量。（２）特殊培養(yǎng)：對(duì)懷疑有苛養(yǎng)菌感染者應(yīng)采用恥骨上膀胱穿刺法或?qū)蚍ú杉瘶?biāo)本，加種一塊巧克力平板，置5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)48h。檢查淋病奈瑟菌、結(jié)核分枝桿菌感染時(shí)無(wú)需做定量培養(yǎng)，可將標(biāo)本離心后取尿沉渣進(jìn)行培養(yǎng)，以提高陽(yáng)性率。（３）普通培養(yǎng)18～24h無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)，應(yīng)將所有培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24h。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范四、結(jié)果觀察和報(bào)告

１．結(jié)果觀察和評(píng)價(jià)：

（１）菌落計(jì)數(shù)：計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，采用1ul接種量者，將菌落數(shù)乘以103；采10ul接種量者，將平板菌落數(shù)乘以102，即為每ml尿液中所含有的細(xì)菌數(shù)（CFU/ml）。如菌落生長(zhǎng)過(guò)多無(wú)法精確計(jì)數(shù)時(shí)，則報(bào)告＞105CFU/ml。

臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范（２）結(jié)果評(píng)價(jià)：正常情況下從腎臟排泌至膀胱的尿液是無(wú)菌的，但膀胱中的尿液經(jīng)尿道排出體外時(shí)可受到下尿道中正常菌群的污染而出現(xiàn)細(xì)菌。因此對(duì)不同方法獲取的尿液標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果需正確評(píng)價(jià)，才能有效指導(dǎo)臨床合理治療。一般認(rèn)為，清潔中段尿標(biāo)本中單種細(xì)菌菌落數(shù)＞105CFU/ml可能為感染；＜5×104CFU/ml可能為污染，在兩者之間需要根據(jù)具體情況進(jìn)行評(píng)估（表2）。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范表２不同方法采集的尿標(biāo)本培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià)

標(biāo)本來(lái)源菌落數(shù)CFU/ml 結(jié)果評(píng)價(jià)清潔中段尿＜5×104無(wú)意義，僅報(bào)告菌落數(shù)及革蘭染色特征，并注明是純培養(yǎng)或是混合菌生長(zhǎng)純培養(yǎng)有意義，報(bào)告菌落計(jì)數(shù)和菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)結(jié)果；混合菌生長(zhǎng)無(wú)意義，僅做革蘭染色鏡檢，并報(bào)告鏡檢結(jié)果(5～10)×104純培養(yǎng)或混合菌生長(zhǎng)，其中某種細(xì)菌數(shù)≥105者有意義，需進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)；4種及以上細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)意義，報(bào)告標(biāo)本污染＞1053種以內(nèi)細(xì)菌生長(zhǎng)都有意義，對(duì)2種主要生長(zhǎng)菌需進(jìn)行菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)；4種及以上細(xì)菌生長(zhǎng)無(wú)意義，報(bào)告標(biāo)本污染＞103導(dǎo)尿都有意義，所有細(xì)菌均需做菌種鑒定及藥敏試驗(yàn)任意數(shù)目恥骨上膀胱穿刺臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范２．陰性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告：

培養(yǎng)48h無(wú)菌落生長(zhǎng)，即為陰性。接種1ul尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)＜103CFU/ml”；接種10ul尿量者，應(yīng)報(bào)告“培養(yǎng)48h，菌落計(jì)數(shù)＜102CFU/ml”。

臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范３．陽(yáng)性培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告：

應(yīng)報(bào)告細(xì)菌種屬名稱、菌落計(jì)數(shù)和藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果。如：大腸埃希菌生長(zhǎng)，菌落計(jì)數(shù)＞105CFU/ml，藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果：……臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范附錄

１．關(guān)于尿培養(yǎng)標(biāo)本的接種：

由于自然排尿收集的標(biāo)本很難避免會(huì)陰部及下尿道細(xì)菌污染，所以需要定量接種、合理評(píng)價(jià)才能判斷培養(yǎng)的細(xì)菌是否與尿路感染有關(guān)。定量接種的方法有直接劃線法和傾注平板法二種，后者由于操作繁瑣，已幾乎不被臨床實(shí)驗(yàn)室使用。直接劃線法的關(guān)健是保證接種量的準(zhǔn)確性，可使用1ul或10ul的定量接種環(huán)，方法是將接種環(huán)校準(zhǔn)后，以垂直方向持拿，使環(huán)圈剛好浸入尿液表面（不可使尿液碰到環(huán)上方的環(huán)柄），取尿液進(jìn)行接種。無(wú)量接種環(huán)的實(shí)驗(yàn)室，可使用無(wú)菌的5ul微量移液器吸取尿液加入平板，再用接種環(huán)劃線接種，將平板菌落數(shù)乘以200，即為每ml尿液中所含有的細(xì)菌數(shù)（CFU/ml）。

臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范２．關(guān)于尿培養(yǎng)檢驗(yàn)培養(yǎng)基的選擇：

沒(méi)有一種平板可以適合所有尿道病原體的生長(zhǎng)，所以應(yīng)該根據(jù)標(biāo)本來(lái)源及臨床對(duì)目標(biāo)菌的要求選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。普通培養(yǎng)推薦使用血平板和麥康凱（或中國(guó)藍(lán)）平板，不能以血平板代替麥康凱或中國(guó)藍(lán)平板。

臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范３．關(guān)于尿培養(yǎng)結(jié)果評(píng)價(jià)：

菌落計(jì)數(shù)＞105CFU/ml只是診斷尿路感染的一般標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)室而言，如果僅使用一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行解釋，那么若標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)松，將會(huì)造成抗生素濫用和不必要的資源浪費(fèi)；制定過(guò)嚴(yán)，將有可能導(dǎo)致尿路感染的漏診。所以每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)在與臨床醫(yī)生密切合作的基礎(chǔ)上，根據(jù)不同的情況制定不同的解釋標(biāo)準(zhǔn)。尿培養(yǎng)菌落計(jì)數(shù)可受多種因素的影響，在一些患者即使菌落計(jì)數(shù)較少，也有明顯的臨床意義，所以對(duì)菌落計(jì)數(shù)＜5×104CFU/ml，“規(guī)范”中認(rèn)為無(wú)意義的陽(yáng)性結(jié)果，不應(yīng)隨意丟棄，必要時(shí)應(yīng)根據(jù)患者的具體情況或與臨床醫(yī)生聯(lián)系后，決定是否需要做細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)。

臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范

以下因素可使尿液中細(xì)菌數(shù)量減少，判斷結(jié)果時(shí)應(yīng)予以注意：

（１）使用抗生素治療，細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制；（２）尿液稀釋，尿比重＜1.003，營(yíng)養(yǎng)成份減少，細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢；

（４）尿頻時(shí)，膀胱內(nèi)細(xì)菌停留時(shí)間短，菌落數(shù)減少；（５）尿道口消毒液混入標(biāo)本中，影響細(xì)菌繁殖，菌落數(shù)減少；

（６）不同種類的細(xì)菌生長(zhǎng)速度不同、營(yíng)養(yǎng)要求不同，有文獻(xiàn)推薦，革蘭陰性菌以菌落計(jì)數(shù)＞105CFU

/ml，而革蘭陽(yáng)性菌以菌落計(jì)數(shù)＞104CFU/ml為診

斷尿路感染的標(biāo)準(zhǔn)。

（３）尿pH＜5.0或＞8.5，細(xì)菌生長(zhǎng)受阻；臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范

４．尿培養(yǎng)檢驗(yàn)中常見(jiàn)的錯(cuò)誤：（１）將尿液標(biāo)本接種于增菌液中；（２）將中段尿標(biāo)本離心后取沉渣進(jìn)行一般細(xì)菌培養(yǎng)；（３）標(biāo)本保存時(shí)間超時(shí)，細(xì)菌大量繁殖；（４）直接用導(dǎo)尿管頭劃線培養(yǎng)；（５）使用中段尿標(biāo)本做厭氧菌培養(yǎng)。臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范謝謝大家！臨床微生物學(xué)尿培養(yǎng)操作規(guī)范思考練習(xí)題：

1.尿路感染常見(jiàn)病原菌？

答：革蘭陰性菌：大腸埃希菌、變形桿菌、克雷伯菌、腸桿菌、假單胞菌、沙雷菌、不動(dòng)桿菌、淋病奈瑟菌、沙門(mén)菌；革蘭陽(yáng)性菌：葡萄球菌、鏈球菌、腸球菌