DB35∕T 2015-2021 豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測(cè)試劑卡制備及高敏熒光免疫分析操作規(guī)程　　

35DB35/T2015—2021豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測(cè)試劑卡制備及高敏熒光免疫分析操作規(guī)程ThepreparationofCSFVantibodyhypersensitivefluorescencedetectionreagentcardandoperatingproceduresforhypersensitivefluorescenceimmunoassay2021-09-28發(fā)布2021-12-28實(shí)施福建省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I 4 Ⅱ本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草本文件主要起草人：鄭騰、張?bào)w銀、章鍵、吳俊清、吳冠英、謝向機(jī)、張志燈、唐寰宇、林杰、1豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測(cè)試劑卡制備及高敏熒光免疫分析操作本文件規(guī)定了豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測(cè)試劑卡的制備及高敏熒光免疫分析技術(shù)免疫分析操作規(guī)NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技5.1.3恒溫培養(yǎng)箱（20℃~25℃和37℃±1℃)。25.2.112-N-嗎啡啉乙磺酸（M把硝酸纖維素膜粘貼在PVC底板上，采用劃膜噴金機(jī)在硝酸纖維素膜上噴涂已經(jīng)稀釋成0.5mg/mL的山羊抗雞IgY/IgG抗體形成質(zhì)控線（C線噴涂已經(jīng)稀釋成1.0mg/mL的豬瘟病毒重組蛋白E2用封閉液（配制方法按照附錄A的A.1規(guī)定）封閉硝酸纖維素膜30min，用10mmol/L磷酸（pH7.5，配制方法按照附錄A的A.2規(guī)定）清洗硝酸纖維素膜30min，室溫（20℃~25℃)干燥2h將50mg的高敏熒光納米微球加入到5mL的2-N-嗎啡啉乙磺酸緩沖液（0.1mol/L，pH7.0）加入10mg碳二亞胺和10mgN-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽攪拌溶解，室溫（20℃~25℃)反應(yīng)30min閉，再加入5mL樣品稀釋液（配制方法按照附錄A的A.4規(guī)定）保存（2℃~8℃)。將50mg的高敏熒光納米微球加入到5mL的2-N-嗎啡啉乙磺酸緩沖液（0.1mol/L，pH7.0）加入10mg碳二亞胺和10mgN-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽攪拌溶解，室溫（20℃~25℃)反應(yīng)30min方法按照附錄A的A.3規(guī)定）重懸，加入2mg透析過的豬瘟病毒重組E2蛋白，在室溫（20℃~25℃)下酸鹽緩沖溶液封閉，再加入5mL樣品稀釋液（配制方法按照附錄A的A.4規(guī)定）保存（2℃~8℃)。將高敏熒光納米微球標(biāo)記的雞IgY和豬瘟病毒重組E2蛋白分別稀釋成0.1μgPVC底板上從左到右依次粘貼樣品墊、標(biāo)記物墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，樣品墊的右端搭在標(biāo)記待檢血清在2℃~8℃下可保存48h，在-20℃條件下可長期保存。7.2.2待檢血清和豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測(cè)試劑卡試驗(yàn)前應(yīng)平衡至室溫（20℃~25℃)。將平衡至室溫的豬瘟病毒抗體高敏熒光檢測(cè)試劑卡置于干凈平坦的臺(tái)面上，在加樣孔內(nèi)4），5磷酸二氫鉀（KH2PO4，分析純），0.2g；磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O，分析純），2.9g；氯化鈉（NaCl，分析純），8.0g；氯化鉀（KCl），加水至1000mL，溶解后，調(diào)節(jié)pH值至A.210mmol/L磷酸鹽緩沖液（10磷酸二氫鉀（KH2PO4，分析純0.2g；磷酸氫二鈉（Na2HPO4?12H2O，分析純2.9g；氯化鈉（NaCl，分析純），8.0g；氯化鉀（KCl，分析純），0.2g。加水至1000mL，溶解后A.3.20.05mol/L硼砂（A.3.3溶液混合取A.3.1溶液87.50mL和