血液一般檢驗（臨床檢驗技術(shù)課件）

標(biāo)本采集與處理目錄CONTENTⅠ血液標(biāo)本采集質(zhì)量保證Ⅱ血液標(biāo)本類型血液標(biāo)本添加劑Ⅲ血栓與止血一般檢查Ⅵ血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理Ⅳ血小板檢驗Ⅴ血液標(biāo)本采集質(zhì)量保證

檢驗前的質(zhì)量控制已成為保證檢驗結(jié)果正確的核心部分，標(biāo)本采集是分析前質(zhì)量控制的主要內(nèi)容。據(jù)統(tǒng)計，80%非疾病因素所致檢驗結(jié)果異常是由不合格標(biāo)本引起的，可見合格標(biāo)本對于醫(yī)學(xué)檢驗的重要性。為了采集合格血液標(biāo)本，臨床醫(yī)護(hù)人員和檢驗人員，應(yīng)從檢驗申請、患者準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、標(biāo)本運(yùn)送、標(biāo)本接收或拒收等方面規(guī)范化操作，并將注意事項告知患者，請其予以配合。概述01檢驗申請1、檢驗申請單

檢驗申請單或電子申請表中應(yīng)包括患者最基本的信息，以識別患者和經(jīng)授權(quán)的申請者，同時應(yīng)提供相關(guān)的臨床信息?；拘畔⒅辽侔ㄐ彰?、性別、年齡，用于解讀檢驗結(jié)果。2、標(biāo)本采集和處理的具體要求

實驗室應(yīng)向負(fù)責(zé)采集標(biāo)本的人員提供標(biāo)本采集和處理的具體要求。如：患者告知、患者準(zhǔn)備；醫(yī)護(hù)人員熟悉血液標(biāo)本采集與處理要求等，詳見下表項目具體要求患者告知向患者提供在標(biāo)本采集前應(yīng)做準(zhǔn)備的信息和說明患者準(zhǔn)備說明書如提供給護(hù)士和標(biāo)本采集人員的說明書標(biāo)本采集說明血液標(biāo)本盛放容器和添加物標(biāo)本采集類別和數(shù)量掌握所采集標(biāo)本的種類和數(shù)量標(biāo)本采集日期和時間根據(jù)檢查項目的要求，明確標(biāo)本采集日期和時間，包括特定采集時間標(biāo)本處理要求從標(biāo)本采集至實驗室接收之間的任何處理要求（運(yùn)送、冷凍、保溫等）標(biāo)本采集人員記錄身份信息標(biāo)本采集器材和安全處理正確選擇器材，并做好安全處理2、標(biāo)本采集和處理的具體要求

01檢驗申請3、標(biāo)本信息完整性與接收

檢驗申請單或電子申請表中應(yīng)包括患者最基本的信息，以識別患者和經(jīng)授權(quán)的申請者，同時應(yīng)提供相關(guān)的臨床信息?；拘畔⒅辽侔ㄐ彰⑿詣e、年齡，用于解讀檢驗結(jié)果。（1）對特殊標(biāo)本的處理：對標(biāo)識不明確、標(biāo)本不穩(wěn)定（如腦脊液、活檢標(biāo)本等）、不便重新采集的標(biāo)本或病人處于緊急情況的標(biāo)本，實驗室可先處理標(biāo)本，但是不發(fā)送檢驗報告，直至申請檢驗的醫(yī)生或標(biāo)本采集人員承擔(dān)標(biāo)本鑒別和接收的責(zé)任，或提供適當(dāng)?shù)男畔ⅰ?1檢驗申請3、標(biāo)本信息完整性與接收

（2）在規(guī)定的時間內(nèi)送檢：根據(jù)申請檢驗項目的特性以及實驗室的相關(guān)規(guī)定，應(yīng)在一定時間內(nèi)送檢標(biāo)本。急癥或危重患者的標(biāo)本要有特別的標(biāo)識。（3）注意物理條件對標(biāo)本的影響：根據(jù)標(biāo)本采集手冊的規(guī)定，標(biāo)本應(yīng)保存在一定的溫度范圍內(nèi)，特殊標(biāo)本可含有規(guī)定的防腐劑，以確保標(biāo)本成分的穩(wěn)定性和完整性。（4）標(biāo)本檔案要完整：所有接收的標(biāo)本應(yīng)當(dāng)記錄在登記本、工作表或計算機(jī)中，并記錄標(biāo)本接收的日期和時間、接收人員等。使用條形碼便于信息化管理。02患者準(zhǔn)備1、飲食和生理狀態(tài)

向患者解釋飲食、生理狀態(tài)對檢驗結(jié)果的影響，詳見下表。因素影響飲食不同食物對檢驗結(jié)果的影響不同：①普通進(jìn)餐后，甘油三酯將增高50%，血糖增加15%，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）及血鉀增加15%②高蛋白膳食可使血液尿素、尿酸及血氨增高③高脂肪飲食可使甘油三酯大幅度增高④高核酸食物（如動物內(nèi)臟）可導(dǎo)致血液尿酸明顯增高饑餓長期饑餓可使血漿蛋白質(zhì)、膽固醇、甘油三酯、載脂蛋白、尿素等降低；相反，血肌酐及尿酸則增高。由于饑餓時機(jī)體的能量消耗減少，故血液T3、T4水平將明顯減低運(yùn)動和精神精神緊張、激動和運(yùn)動可使兒茶酚胺、皮質(zhì)醇、血糖、白細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)量等增高生物鐘清晨6～7時促腎上腺皮質(zhì)激素、皮質(zhì)醇最高，深夜0～2時最低月經(jīng)和妊娠與生殖有關(guān)的激素在月經(jīng)周期會產(chǎn)生不同的變化；纖維蛋白原在月經(jīng)前期開始增高，血漿蛋白質(zhì)則在排卵時減低；膽固醇在月經(jīng)前期最高，排卵時最低飲酒長期飲酒者可導(dǎo)致ALT、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（GGT）增高；慢性酒精中毒者，血液膽紅素、堿性磷酸酶（ALP）、甘油三酯等增高吸煙長期吸煙者白細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白、碳氧血紅蛋白（COHb）、癌胚抗原（CEA）等增高；IgG、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）活性減低其他某些診療活動可影響檢驗結(jié)果，如外科手術(shù)、輸液或輸血、穿刺或活檢、透析、口服葡萄糖耐量試驗（OGTT）、服用某些藥物、使用細(xì)胞因子等患者的飲食和生理狀態(tài)對檢驗結(jié)果的影響02患者準(zhǔn)備2、藥物干擾告知患者所用藥物可能干擾檢驗結(jié)果。干擾檢驗結(jié)果主要途徑：①影響待測成分的物理性質(zhì)。②參與檢驗過程的化學(xué)反應(yīng)。③影響機(jī)體組織器官生理功能和（或）細(xì)胞活動中的物質(zhì)代謝。④對機(jī)體器官的藥理活性和毒性作用。03標(biāo)本采集1、環(huán)境要求2、生物安全人性化設(shè)置、寬敞明亮、通風(fēng)良好、感覺舒服。防止交叉感染：無菌操作，采血器材（采血針、壓脈帶、墊巾和消毒用品等）一次性使用，廢棄物品按照醫(yī)療垃圾統(tǒng)一處理。環(huán)境消毒：紫外線定時空氣消毒，消毒液定期擦拭臺面。03標(biāo)本采集3、采血時間①清晨空腹采血。（盡可能在上午9時前空腹采集標(biāo)本）空腹血液標(biāo)本優(yōu)點(diǎn)：可減少飲食及晝夜節(jié)律對檢測結(jié)果的影響；晨起處于平靜狀態(tài)，可以減少運(yùn)動因素對檢測結(jié)果的影響；現(xiàn)行生物參考區(qū)間多基于健康人空腹條件下建立的。②盡可能在其他檢查和治療之前采集血液標(biāo)本。③根據(jù)藥物濃度高峰期和穩(wěn)定期特點(diǎn)采集血液標(biāo)本，以檢測藥物濃度。④在檢驗申請單上注明采血的具體時間。03標(biāo)本采集4、采血部位不同部位的血液標(biāo)本，某些成分會有差異，甚至對檢測結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重影響，故應(yīng)選擇恰當(dāng)?shù)牟裳课弧＃ㄑＲ?guī)檢查最好靜脈采血）5、采血體位可采用臥位或坐位，并保持平靜狀態(tài)。6、壓脈帶的使用靜脈采血時，壓脈帶壓迫時間過長可使血清鉀、轉(zhuǎn)氨酶、乳酸等增高。因此，在采血時壓脈帶的壓迫時間盡量不超過1分鐘。03標(biāo)本采集7、抗凝劑8、其他正確使用抗凝劑發(fā)揮抗凝作用，抗凝劑與血液要及時充分混勻（真空管標(biāo)本輕輕顛倒混勻5-8次）。同時要防止抗凝劑干擾電解質(zhì)、血清酶活性測定。（1）輸液

要盡可能避免在輸液過程中采血，禁止在輸液同側(cè)采血，因為輸液不僅使血液稀釋，而且輸注的成分可能干擾檢驗結(jié)果。最常見的干擾項目是葡萄糖和電解質(zhì)。（2）溶血

紅細(xì)胞內(nèi)、外各種成分有梯度差，有的成分相差數(shù)十倍，溶血標(biāo)本所導(dǎo)致的誤差可造成嚴(yán)重的后果，如血清鉀離子濃度，乳酸脫氫酶、轉(zhuǎn)氨酶等。溶血引起血液成分濃度或活性變化（假設(shè)HCT=0.50）成分紅細(xì)胞內(nèi)濃度（活性）與血清的比值1%紅細(xì)胞溶血后血清濃度（活性）的變化（%）*乳酸脫氫酶160︰1＋272.5AST40︰1＋220.0鉀23︰1＋24.4ALT6.7︰1＋55.0葡萄糖0.82︰1－5.0無機(jī)磷0.78︰1＋9.1鈉0.11︰1－1.0鈣0.10︰1＋2.9溶血溶血7、抗凝劑溶血即血液中紅細(xì)胞溶解破壞，血清/血漿呈紅色，如圖所示。發(fā)生溶血的常見原因7、抗凝劑①抽血困難（壓脈帶扎得過緊、時間過長、用力拍打穿刺部位）。②容器不清潔、不干燥。③標(biāo)本中有大量泡沫。④注射器帶著針頭強(qiáng)壓快速注血。⑤強(qiáng)力振蕩。⑥分離血清時操作不當(dāng)（用力剝動血塊）。⑦標(biāo)本凍結(jié)。⑧全血放置時間過長。03標(biāo)本采集8、其他（3）溫度血液分析儀測定采用的抗凝全血宜室溫保存，不宜存放在2～6℃環(huán)境中，低溫可使血液成分和細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化。即使室溫保存，也不宜超過6小時。冷凍的血清或血漿標(biāo)本不宜反復(fù)凍融，必要時可分裝多管保存。另外，解凍的標(biāo)本要徹底融化并混勻后再使用（標(biāo)本中的成分分布均勻）。04標(biāo)本運(yùn)送標(biāo)本采集完成后，由經(jīng)過培訓(xùn)的護(hù)工、護(hù)士等及時送檢。送檢標(biāo)本的容器為符合生物安全要求的密封箱。05標(biāo)本接收和拒收1、標(biāo)本的接收合格標(biāo)本的要求如下：①容器：最好采用真空采血系統(tǒng)。減少干擾、提高采血質(zhì)量，無外漏以保證生物安全。②采血量：準(zhǔn)確，血細(xì)胞計數(shù)可采用末梢血，但最好采用靜脈血。③抗凝劑：正確使用抗凝劑，血細(xì)胞計數(shù)抗凝劑使用EDTA-K2。④標(biāo)識：清楚且具有唯一性，最好貼條形碼。⑤時間：標(biāo)本采集的日期和時間明確。05標(biāo)本接收和拒收2、標(biāo)本的拒收對不合格標(biāo)本應(yīng)拒絕接收，拒收原因如下：

①申請單和標(biāo)本標(biāo)識不一致。②溶血。

③抗凝劑使用錯誤、抗凝標(biāo)本出現(xiàn)凝固。

④血液采集盛放容器不當(dāng)。

⑤標(biāo)本污染、容器破損。

⑥采血量不足或錯誤。

⑦轉(zhuǎn)運(yùn)條件不當(dāng)。

⑧要求隔絕空氣但與空氣接觸。⑨嚴(yán)重違反標(biāo)本采集規(guī)定，標(biāo)本采集與送檢時間過長等。血液標(biāo)本類型01全血體內(nèi)循環(huán)血液是全血，含有血液所有成分。全血有以下三種。1、靜脈全血來自靜脈的全血標(biāo)本應(yīng)用最廣泛。常用的采血部位有肘前靜脈、腕靜脈，幼兒和新生兒有時采用頸靜脈和股靜脈。2、動脈全血主要用于血?dú)夥治?，采血部位有股動脈、肱動脈和橈動脈。3、末梢全血適用于某些僅需微量血液的檢驗項目，采血部位有耳垂、指端，小兒有時為拇趾或足跟。靜脈全血采集01全血動脈全血采集末梢全血采集02血漿全血標(biāo)本經(jīng)抗凝離心后去除血細(xì)胞成分后即為血漿，主要用于化學(xué)和凝血項目檢測等。血漿03血清血液離體凝固后分離出來的液體，主要用于生物化學(xué)檢驗和免疫學(xué)等項目檢測。血清血清與血漿的區(qū)別7、抗凝劑血清與血漿比較，主要是血清中缺乏纖維蛋白原及某些凝血因子。血清血凝塊血漿紅細(xì)胞白細(xì)胞和血小板未加抗凝劑的全血凝固后離心加抗凝劑的全血離心04血細(xì)胞根據(jù)需要從全血中提取特定的血細(xì)胞，如濃集的粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和分離的單個核細(xì)胞等，主要用于某些特殊項目的檢測。血漿紅細(xì)胞白細(xì)胞和血小板血清與血漿都是淡黃色液體，怎樣區(qū)分它們，怎樣獲得血漿與血清？思考題血液標(biāo)本添加劑使用添加劑的目的：為了快速獲得全血、血漿、血清、血細(xì)胞等不同類型血液標(biāo)本，需要使用合適的抗凝劑、促凝劑、分離膠。使用添加劑的原則：利于分離血液標(biāo)本，保持血液成分穩(wěn)定，不干擾檢測。概述01抗凝劑抗凝抗凝劑采用物理或化學(xué)的方法去除或抑制某種凝血因子的活性，以阻止血液凝固的方法稱為抗凝。方法：用物理方法或化學(xué)方法。結(jié)果：抗疑，使血液不凝固。能夠阻止血液凝固的化學(xué)物質(zhì)稱為抗凝劑或抗凝物質(zhì)。抗凝劑——枸櫞酸鈉7、抗凝劑枸櫞酸鈉/檸檬酸鈉無水檸檬酸鈉（Na3C6H5O7，MV：258.07）二水檸檬酸鈉（Na3C6H5O7.2H2O，MV：294.1）含兩個結(jié)晶水五水檸檬酸鈉（Na3C6H5O7.5H2O，MV：357.1）含五個結(jié)晶水通常用二水檸檬酸鈉配成109mmol/L（32g/L）濃度的水溶液?？鼓齽蹤此徕c7、抗凝劑1.抗凝原理：枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子結(jié)合形成可溶性螯合物，阻止血液凝固。Na3C6H5O7+Ca2+→CaC6H5O7-+3Na+2.臨床用途：(1)枸櫞酸鈉通常以1:9（V∶V）的比例用于血栓與止血檢驗。(2)1:4比例用于魏氏法血沉測定。(3)因其毒性小，也用于配制血液保養(yǎng)液。7、抗凝劑種類：EDTA鹽有二鈉、二鉀和三鉀鹽等。1.抗凝原理：

EDTA鹽均可與血液中的鈣離子結(jié)合形成螯合物，從而阻止血液凝固。

Na2C10H12O8N2+Ca2+→CaC10H12O8N2+2Na+2.臨床用途：

①EDTA鹽對血細(xì)胞形態(tài)和血小板計數(shù)影響較少，適用于血細(xì)胞分析，尤其血小板計數(shù)。

②ICSH建議，血細(xì)胞計數(shù)用EDTA-K2作抗凝劑，用量為EDTA-K2.2H2O1.5~2.2mg/ml血液。③因其影響血小板聚集及凝血因子檢測，不適合做凝血因子和血小板功能檢查。抗凝劑——乙二胺四乙酸（EDTA）鹽7、抗凝劑1.抗凝原理：

草酸根可與血液中的Ca2+形成草酸鈣沉淀，從而阻止血液凝固。以草酸鈉為例Na2C2O4+Ca2+→CaC2O4↓+2Na+2.臨床用途：

草酸鈉曾用于血栓與止血檢查，雙草酸鹽（草酸鉀與草酸銨）曾用于血細(xì)胞比容測定，但目前已很少使用?？鼓齽菟猁}7、抗凝劑將血液注入有玻璃珠的器皿中不停轉(zhuǎn)動，使纖維蛋白纏繞于玻璃珠上，從而防止血液凝固。常用于血液培養(yǎng)基的羊血采集和檢驗結(jié)果易受抗凝劑影響的檢驗，如紅斑狼瘡細(xì)胞的檢驗。物理抗凝法02促凝劑種類原理1.無機(jī)促凝劑：高嶺土、石英粉、玻璃粉等，主要含二氧化硅。2.有機(jī)促凝劑：兔腦粉、凝血酶等。無機(jī)促凝劑提供粗糙表面，啟動內(nèi)源性凝血機(jī)制導(dǎo)致血液凝固，有機(jī)促凝劑啟動凝血的共同途徑導(dǎo)致血液凝固。加速血液凝固，快速分離血清標(biāo)本，特別適用于急診化學(xué)檢查。03分離膠1、分離原理2、臨床用途分離膠的比重介于血清與血細(xì)胞之間，在1100～1500g離心力作用下液化移動到管中央，離心后固化在血清與血塊之間形成隔離層，使血清和血細(xì)胞完全分離。分離膠能保證血清化學(xué)成分的穩(wěn)定，在冷藏狀態(tài)下48小時無明顯改變。適用于生化、血庫和血清學(xué)等相關(guān)檢驗。但分離膠的質(zhì)量可以影響分離效果和檢驗結(jié)果，且其成本較高。分離膠是一種聚合高分子物質(zhì)，不溶于水，具有抗氧化、耐高溫、抗低溫、高穩(wěn)定性等特性。血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理01血液標(biāo)本的運(yùn)送原則1、唯一標(biāo)識原則血液標(biāo)本的標(biāo)識要唯一，最好應(yīng)用條形碼系統(tǒng)。2、生物安全原則使用可以反復(fù)消毒的專用容器運(yùn)送，包裝完好，防止標(biāo)本損壞、滲漏。3、及時運(yùn)送原則為了防止血液標(biāo)本性狀發(fā)生明顯改變，以保證檢驗質(zhì)量，滿足臨床診療需求，血液標(biāo)本要盡快送檢。02血液標(biāo)本的接收與拒收（一）實驗室制定標(biāo)本接收的標(biāo)準(zhǔn)文件，接收標(biāo)本時應(yīng)核對患者信息，觀察標(biāo)本外觀、量，檢查抗凝劑使用是否正確、標(biāo)本采集時間。（二）實驗室制定標(biāo)本拒收的標(biāo)準(zhǔn)文件，規(guī)定拒收的理由。標(biāo)本拒收原因7、抗凝劑1.申請單和標(biāo)本標(biāo)識不一致。2.溶血。3.抗凝劑使用錯誤、抗凝標(biāo)本出現(xiàn)凝固。4.血液采集盛放容器不當(dāng)。5.標(biāo)本污染、容器破損。6.采血量不足或錯誤。7.轉(zhuǎn)運(yùn)條件不當(dāng)。特別注意7、抗凝劑1.我們珍愛生命，在工作中必須十分珍惜臨床血液標(biāo)本，標(biāo)本拒收不但造成檢驗費(fèi)用增高和時間浪費(fèi)，還可能延誤診療甚至危及患者生命。因此，涉及血液標(biāo)本采集的所有工作人員，都必須在標(biāo)本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)和處理各個環(huán)節(jié)進(jìn)行全面的培訓(xùn)。2.若因特殊情況接收了不合格標(biāo)本，應(yīng)在其檢驗報告單上注明標(biāo)本存在的問題，在解釋結(jié)果時必須特別說明。7、抗凝劑血液標(biāo)本接收后，需按照測定項目的要求不同進(jìn)行分類預(yù)處理：1.血常規(guī)檢測標(biāo)本室溫存放待檢。2.需要血漿的檢驗項目，可通過離心抗凝血獲得血漿。3.需要血清的檢驗項目，對未含促凝劑或分離膠采血管的血液標(biāo)本置于37℃孵育，待血液完全凝固后離心分離血清；含促凝劑或分離膠采血管的血液標(biāo)本可直接離心分離血清。4.需要特定細(xì)胞的實驗，應(yīng)根據(jù)要求采用不同的細(xì)胞分離液或分離技術(shù)分離細(xì)胞，同時盡量避免混入其他細(xì)胞。03血液標(biāo)本預(yù)處理04血液標(biāo)本保存保存原則在規(guī)定的時間內(nèi)確保標(biāo)本特性的穩(wěn)定，檢驗結(jié)果不受影響。保存方式室溫，冷藏、冷凍。注意事項標(biāo)本密封。避免反復(fù)凍融。04血液標(biāo)本保存1、分離后標(biāo)本2、立即送檢標(biāo)本①標(biāo)本不能及時檢驗或需保留標(biāo)本以備復(fù)查時，一般應(yīng)將標(biāo)本置于4℃冰箱內(nèi)保存。②標(biāo)本需保存至少1個月時，放置于-20℃冰箱內(nèi)保存。③標(biāo)本需保存至少3個月時，分離后置于-70℃冰箱保存。④標(biāo)本存放時需要密封，以免水分揮發(fā)而使標(biāo)本濃縮。⑤標(biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。如血氨（密封送檢）、血?dú)夥治觯芊馑蜋z）、紅細(xì)胞沉降率、酸性磷酸酶、乳酸等標(biāo)本。04血液標(biāo)本保存3、檢測后的標(biāo)本4、標(biāo)本信息的保存（1）血常規(guī)標(biāo)本：室溫存放24小時后處理。（2）一般生化檢驗標(biāo)本：4℃環(huán)境存放7天后處理。（3）特殊檢驗標(biāo)本：應(yīng)吸出血清或血漿置-20℃冰箱內(nèi)保存1個月以上。保存檢驗標(biāo)本時應(yīng)包括標(biāo)本信息的保存，且與分離的血漿或血清標(biāo)本相對應(yīng)。05血液標(biāo)本檢驗后生物安全處理檢驗后廢棄的血液標(biāo)本處理嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2004），由專人負(fù)責(zé)處理，根據(jù)國務(wù)院《醫(yī)療廢物管理條例》和國家衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《臨床實驗室廢物處理原則》（WS/T249-2005）規(guī)定，使用專用的容器或袋子包裝，由專人送到指定的地點(diǎn)集中處理。檢驗后廢棄的血液標(biāo)本一般由專門機(jī)構(gòu)采用焚燒的辦法處理。標(biāo)本采集是分析前質(zhì)量控制的主要內(nèi)容，檢驗前的質(zhì)量控制已成為保證檢驗結(jié)果正確的核心部分。影響檢驗結(jié)果的因素：（一）檢驗申請（二）待檢者準(zhǔn)備（患者）（三）標(biāo)本采集血液標(biāo)本采集、運(yùn)送與保存的質(zhì)量保證血涂片制備與染色目錄CONTENTⅠ血涂片的制備Ⅱ血涂片染色血液標(biāo)本添加劑Ⅲ血栓與止血一般檢查Ⅵ血液標(biāo)本運(yùn)送、保存與處理Ⅳ血小板檢驗Ⅴ血涂片的制備掌握血涂片的制備技術(shù)。掌握血涂片的質(zhì)量判斷標(biāo)準(zhǔn)。學(xué)習(xí)目標(biāo)血涂片制備、染色顯微鏡檢查是血液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的基本方法，主要用于白細(xì)胞分類計數(shù)，白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板形態(tài)等檢查，紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板的數(shù)量評估，還有血液寄生蟲的檢查等，在臨床應(yīng)用極為廣泛，特別是對于各種血液病的診斷和鑒別診斷，具有重要價值。近年來盡管血細(xì)胞分析儀能夠快速進(jìn)行白細(xì)胞分類計數(shù)，但只是一種篩查方法，白細(xì)胞分類計數(shù)的復(fù)查尤其是血細(xì)胞的形態(tài)仍然需要血涂片顯微鏡檢查，血涂片顯微鏡下檢查是白細(xì)胞分類計數(shù)的參考方法。概述01器材1、載玻片2、推片新購置的載玻片常帶有游離堿質(zhì)，必須用濃度約1mol/LHCl浸泡24小時后，用清水徹底沖洗，再用蒸餾水浸洗后干燥備用。用過的載玻片可放入含適量肥皂或其它洗滌劑的清水中煮沸20分鐘，趁熱將血膜刷洗干凈，再用清水反復(fù)沖洗，最后用蒸餾水浸洗后干燥備用。清潔同載玻片要求。推片需比載玻片狹窄（一般選擇有切角的玻片），邊緣要光滑、整齊。02操作1、薄血膜推片法采血→取血于載玻片上→推片→干燥取1小滴血于載玻片的一端（1.5cm處或整片1/3處）；推片時使推片與載玻片成30°～45°角度，讓推片接觸血滴；使血液沿推片下緣散開，再向血滴前方向勻速移動推片。02操作1、薄血膜推片法合格的血涂片：

厚薄適宜，頭、體、尾分明，兩端和兩側(cè)留有空隙，血膜至少長25mm，兩側(cè)有空隙。02操作2、儀器推片法目前有多種型號的血細(xì)胞分析儀或血細(xì)胞形態(tài)分析儀配有血涂片儀和染色儀，可以根據(jù)需要進(jìn)行自動送片、取血、推片、標(biāo)記和染色等操作。02操作3、厚血膜推片法采血→取1小滴血液于載玻片中央→以推片的一角將血滴由內(nèi)向外旋轉(zhuǎn)涂布，制成直徑約1.5cm的圓形厚血膜，干燥→滴加蒸餾水，溶解紅細(xì)胞，脫去血紅蛋白→傾去水，干燥。03質(zhì)量保證1、玻片2、標(biāo)本載玻片需清潔、干燥、中性、無油膩，勿用手觸及玻片表面?？鼓柙?小時內(nèi)制備血涂片，否則細(xì)胞形態(tài)會發(fā)生改變。03質(zhì)量保證3、制片4、制片后處理①制備厚薄適宜的血涂片：厚：血滴大、角度大、速度快——大、大、快薄：血滴小、角度小、速度慢——小、小、慢②制備血膜分布均勻的血片：血膜分布不均主要是推片邊緣不齊、用力不勻和載玻片不清潔所致。①制備好的血涂片應(yīng)在空氣中晃動，使其盡快干燥。天氣寒冷或潮濕時，應(yīng)置于37℃恒溫箱中促干，以免細(xì)胞變形縮小。②血片制備好后要標(biāo)記。③制備好的血涂片應(yīng)在1小時內(nèi)染色，或于1小時內(nèi)用無水甲醇固定后染色，否則細(xì)胞形態(tài)會發(fā)生改變。血涂片的質(zhì)量問題、可能原因及解決辦法血膜質(zhì)量問題可能原因解決辦法兩側(cè)無空隙推片太寬、血滴展開太寬選擇有切角的推片、展開血滴的時間不可太長太長或太短推片角度不佳或血滴大小不合適調(diào)整推片角度或血滴大小太厚或太薄推片角度不佳或血滴大小不合適調(diào)整推片角度或血滴大小無尾部血滴太大、推片未推到載玻片的另一端即停止減少血量、推片必須推到載玻片的另一端，不可中途停止有空泡載玻片上有油脂清洗玻片、改用潔凈玻片不規(guī)則間斷推片時用力不均、推片與載玻片貼太緊推片與載玻片接觸即可，不可貼太緊04方法學(xué)評價方法評價薄血膜推片法手工法①器材要求不高，操作簡單，但要獲得好的血涂片需要不斷練習(xí)，受操作者水平影響大②臨床應(yīng)用最廣儀器法①血涂片質(zhì)量較好，重復(fù)性較好②儀器要求較高，基層醫(yī)院未普及厚血膜制片法手工法①制備方法簡單，不適用于血細(xì)胞形態(tài)觀察②適用于瘧原蟲、微絲蚴的檢查，可提高其檢出率血涂片的染色掌握瑞氏染色的原理掌握瑞氏染色的方法學(xué)習(xí)目標(biāo)血涂片染色是為了使血細(xì)胞著色，染料將細(xì)胞的胞膜、胞質(zhì)、胞核等染成不同的顏色，便于在顯微鏡下觀察識別。概述01操作1、瑞氏染色法（1）染色原理：細(xì)胞的著色既有物理的吸附作用，又有化學(xué)的親和作用。細(xì)胞成分和結(jié)構(gòu)酸堿性結(jié)合的染料染色結(jié)果血紅蛋白及嗜酸性顆粒等堿性物質(zhì)與酸性的伊紅結(jié)合紅色淋巴細(xì)胞胞質(zhì)及嗜堿性顆粒等酸性物質(zhì)與堿性的亞甲藍(lán)結(jié)合藍(lán)色中性顆粒中性與伊紅、亞甲藍(lán)均可結(jié)合淡紫紅色細(xì)胞核強(qiáng)堿性核蛋白（如組蛋白）與酸性的伊紅結(jié)合紫紅色酸性的核酸（DNA或RNA）與堿性的亞甲藍(lán)結(jié)合01操作1、瑞氏染色法（2）試劑①瑞氏染液瑞氏染料：酸性染料伊紅+堿性染料美藍(lán)，生成不溶于水的伊紅美藍(lán)復(fù)合物，即瑞氏染料，將此染料溶于甲醇即得瑞氏染液，該染料中的美藍(lán)，隨時間延長而緩慢氧化為天青色。②磷酸鹽緩沖液（PB）（pH6.4～6.8）01操作1、瑞氏染色法（3）操作①血涂片制備②干燥、標(biāo)記③加瑞氏染液覆蓋血膜④固定約1分鐘⑤加等量緩沖液⑥混勻⑦靜置5～10分鐘⑧流水沖洗、干燥01操作1、瑞氏染色法（4）染色效果肉眼下，經(jīng)瑞氏染色后血膜外觀呈淡紫紅色。01操作1、瑞氏染色法（5）顯微鏡下

紅細(xì)胞呈粉紅色圓盤狀；白細(xì)胞的細(xì)胞核染紫紅色，核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚，胞質(zhì)中顆粒清楚，并顯示出各種細(xì)胞特有的色；血小板染成紫紅色。01操作2、吉姆薩染色法（1）原理：吉姆薩染色原理與瑞氏染色相同，染料中用吉姆薩染料（伊紅天青）替代瑞氏染料（伊紅美藍(lán)）。與瑞氏染色法比較，該法對細(xì)胞核著色效果較好，但對中性顆粒著色較差。（2）試劑：由吉姆薩染料、甲醇和甘油組成。（3）操作：同瑞氏染色法。01操作3、瑞-吉復(fù)合染色法瑞氏染色法對細(xì)胞質(zhì)著色好，而吉姆薩染色法對細(xì)胞核著色好操作方法同瑞氏染色法01操作4、快速一步染色法（1）試劑：

①Ⅰ液：由瑞氏染料、吉姆薩染料、天青Ⅱ及甲醇組成。

②Ⅱ液：磷酸鹽緩沖液（pH6.4～6.8）。

③應(yīng)用液：Ⅰ液∶Ⅱ液按3∶1比例混合放置14天后備用。（2）簡要操作：

將染液鋪滿血膜或?qū)⒀肴疽焊變?nèi)→30秒后取出用自來水沖洗→干后顯微鏡檢查。01操作5、快速兩步染色法（1）試劑：

①Ⅰ液：磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、水溶性伊紅Y、石炭酸于蒸餾水中煮沸，冷卻后備用。

②Ⅱ液：亞甲藍(lán)、高錳酸鉀于蒸餾水中煮沸，冷卻后備用。（2）簡要操作：

干燥血涂片浸入Ⅰ液中30秒→水洗→再浸入Ⅱ液30秒→水洗→干后顯微鏡檢查。02質(zhì)量保證1、瑞特染液質(zhì)量在密封條件下，貯存時間愈久，亞甲藍(lán)轉(zhuǎn)化的天青B愈多，染色效果愈好?？捎梦舛缺戎担≧A）作為瑞特染液的質(zhì)量評價指標(biāo)RA=A650/A525，RA降至1.3±0.1即可使用。瑞特染液可適當(dāng)加入甘油，密封嚴(yán)實，以防止甲醇揮發(fā)或氧化，影響染液質(zhì)量。2、pH如環(huán)境pH＜PI（PI為該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)），易與酸性伊紅結(jié)合，染色偏紅；當(dāng)環(huán)境的pH＞PI則帶負(fù)電荷增多，易與亞甲藍(lán)結(jié)合，染色偏藍(lán)。3、染色時機(jī)血涂片干透后才能染色，否則易脫落。4、染液用量以剛好覆蓋血膜為宜。用量過多，會造成深染；過少，會導(dǎo)致血涂片局部未著色，或易干使染料沉積。02質(zhì)量保證02質(zhì)量保證5、混勻6、染色時間染液與緩沖液需充分混勻，否則細(xì)胞著色不均。環(huán)境溫度越低、細(xì)胞越多，染色時間越長；反之亦然。02質(zhì)量保證7、沖洗8、脫色與復(fù)染用小流水將染液沖洗干凈，不能先倒掉染液再用流水沖洗，以免染料沉著于血涂片上，干擾血細(xì)胞形態(tài)觀察。染色過深，可用甲醇或清水脫色。染色過淺，可以復(fù)染。血涂片染色不佳的原因分析及對策血涂片染色不佳原因?qū)Σ呷旧t染液質(zhì)量不佳（被氧化），沖洗用水的pH太低，沖洗時間太長更換符合質(zhì)量要求的染液，改用中性蒸餾水沖洗，規(guī)范操作染色偏藍(lán)新玻片未用酸處理，新配制染液，染色時間太長，沖洗時間太短更換符合質(zhì)量要求的染液、玻片，規(guī)范操作染色偏淺染色時間太短，沖洗時間太長規(guī)范操作；如需該片，可以復(fù)染染料沉積染液未過濾，沖洗方法不當(dāng)更換符合質(zhì)量要求的染液，規(guī)范操作；如需該片，可用甲醇沖洗，再立即用清水沖洗，干后復(fù)染細(xì)胞核不著色染色時間太短，沖洗用水的pH太低延長染色時間，更換沖洗用水藍(lán)色背景患者使用肝素或血液標(biāo)本經(jīng)肝素抗凝血液標(biāo)本采用EDTA抗凝03方法學(xué)評價方法評價瑞氏染色法最常用，對細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的顆粒染色效果好，但對細(xì)胞核的染色較差吉姆薩染色法對細(xì)胞核和寄生蟲著色好，但對胞質(zhì)顆粒著色較差瑞-吉復(fù)合染色法對細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核著色均較好，對比鮮明快速一步染色法臨床應(yīng)用廣，快速，對細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核著色均較好快速兩步染色法臨床應(yīng)用廣，快速，對細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的顆粒染色效果好，但對細(xì)胞核的染色稍差紅細(xì)胞檢驗?zāi)夸汣ONTENTⅠ計數(shù)板的結(jié)構(gòu)Ⅱ微量吸管的使用紅細(xì)胞計數(shù)Ⅲ血細(xì)胞比容測定Ⅵ血紅蛋白測定Ⅳ紅細(xì)胞形態(tài)檢查Ⅴ紅細(xì)胞沉降率測定Ⅷ網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)Ⅶ改良牛鮑計數(shù)板結(jié)構(gòu)01計數(shù)板外觀正面觀：居中呈“H”型凹槽“H”型凹槽外側(cè)兩個支持柱側(cè)面觀：支持柱支撐蓋玻片“H”型凹槽中間平面與蓋玻片形成計數(shù)池，高度0.1mm02計數(shù)板劃線共九個大方格每個邊長1mm大方格四角中方格中間中方格小方格02計數(shù)板劃線四角每個大方格單線等分成16個中方格中間大方格雙線等分成25個中方格，每個中方格單線等分成16個小方格四角的中方格和中間的中方格是不一樣的注：L代表白細(xì)胞，E代表紅細(xì)胞，P代表血小板。E/PE/PE/PE/PE/P03計數(shù)板應(yīng)用共九個大方格，每個邊長1mm四角四個大方格用于白細(xì)胞計數(shù)中間中央大方格內(nèi)的五個中方格用于紅細(xì)胞和血小板計數(shù)11紅細(xì)胞/血小板03計數(shù)板應(yīng)用以白細(xì)胞計數(shù)為例，細(xì)胞計數(shù)原則為：①按照“弓”字形移動；②壓線細(xì)胞數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下。左圖實心圓表示計數(shù)的細(xì)胞，空心圓表示不計數(shù)的細(xì)胞；右圖表示細(xì)胞計數(shù)的結(jié)果。03計數(shù)板應(yīng)用細(xì)胞種類計數(shù)原理稀釋液稀釋倍數(shù)計數(shù)范圍計算公式白細(xì)胞將血液稀釋一定的倍數(shù)，計數(shù)一定范圍內(nèi)的血細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求得每升血液中的血細(xì)胞數(shù)量。2%冰醋酸20四角四個大方格N/20×109/L紅細(xì)胞Hayem液200中央大方格內(nèi)五個中方格N/100×1012/L血小板10g/L草酸銨溶液20同紅細(xì)胞N×109/L

注：N為計數(shù)的細(xì)胞數(shù)。細(xì)胞計數(shù)因稀釋液、稀釋倍數(shù)、計數(shù)范圍不同，最后計數(shù)方法不同。04改良牛鮑計數(shù)板專用蓋玻片長×寬×厚為24mm×20mm×0.6mm具有一定的重量，平整、光滑、無裂痕，厚薄均勻一致將潔凈的蓋片緊貼于干燥的平面玻璃上，若能吸附一定時間不脫落，落下時呈弧線形旋轉(zhuǎn)，表示蓋片平整、厚薄均勻合格的蓋片放置在計數(shù)池表面后，與支持柱緊密接觸的部位可見到彩虹用綢布拭凈蓋玻片，采用“推式”法從計數(shù)板下緣向前平推蓋玻片，將其蓋在計數(shù)池上紅細(xì)胞計數(shù)01概述紅細(xì)胞的發(fā)育過程在睪酮和促紅細(xì)胞生成素的簡介和直接調(diào)節(jié)，生成發(fā)育分化，網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟48小時，紅細(xì)胞存活約120天01概述紅細(xì)胞計數(shù)（RBC）即測定單位體積外周血液中紅細(xì)胞的數(shù)量，是診斷貧血等疾病最常用的檢查項目之一。臨床可通過各項紅細(xì)胞參數(shù)檢驗和紅細(xì)胞的形態(tài)觀察對貧血和某些疾病進(jìn)行診斷和鑒別診斷。02計數(shù)原理用紅細(xì)胞稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)后，充入改良牛鮑計數(shù)板中，在顯微鏡下計數(shù)一定容積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)量。02計數(shù)方法Hayem稀釋液：由NaCl、Na2SO4、HgCl2和蒸餾水組成。其中NaCl和Na2SO4調(diào)節(jié)滲透壓，后者還可提高比重防止細(xì)胞粘連，HgCl2為防腐劑。該稀釋液的主要缺點(diǎn)是遇高球蛋白血癥患者，由于蛋白質(zhì)沉淀而使紅細(xì)胞易凝集。03計數(shù)方法取稀釋液2.0ml加入全血10μl，混勻充池，靜置2-3min高倍鏡計數(shù)中央大方格內(nèi)4角和正中間1個共5個中方格內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)計算：N/5×25×10×200×106=N/100×1012/L⑦報告方式：X.XX×1012/L。04參考區(qū)間成年男性（4.3～5.8）×1012/L成年女性（3.8～5.1）×1012/L新生兒：（6.0～7.0）×1012/L05醫(yī)學(xué)決定水平高于6.8×1012/L，應(yīng)采取相應(yīng)的治療措施；低于3.5×1012/L，可診斷為貧血；低于1.5×1012/L，可考慮輸血。血紅蛋白測定01概述卟啉環(huán)包著一個亞鐵離子組成一個亞鐵血紅素，每條多肽鏈含一個亞鐵血紅素，每個血紅蛋白分子有四個珠蛋白肽鏈血紅蛋白（Hb或HGB）分子量為64458。01概述種類多肽鏈組成比例HbAα2β2大于95%HbA2α2δ2約2-3%HbFα2γ2小于1%α4：β地貧β4

：α地貧地中海貧血（珠蛋白生成障礙性貧血）01概述Hb有多種形式及衍生物HbO2HbredHbMHb（Hi）HbCOSHb02測定方法RBCHbHiHiCN

OD值Hb（g/L）=KAλ=540nm溶血氧化結(jié)合計算02測定方法此處K值為理論值，在實際應(yīng)用中更多采用標(biāo)準(zhǔn)品參照，測定未知樣品血紅蛋白濃度。02測定方法HiCN法測定血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線？A:0.332，Hb=？02測定方法十二烷基硫酸鈉法（sodiumdodecylsulfatehemoglobin，SDS-Hb）堿羥血紅蛋白法（alkalinehaematindetergent，AHD575）疊氮高鐵血紅蛋白法（HiN3）溴代十六烷基三甲胺法（cetyltrimethylammonynmbromide，CTAB）目前，自動血液分析儀已多使用不含氰化鉀的血紅蛋白測定方法03參考區(qū)間成年男性：130～175g/L成年女性：115～150g/L新生兒：170～200g/L04臨床意義極重度重度中度輕度正常<30g/L(31-60)g/L(61-90)g/L(91-120)g/L>120g/L

306090110

120Hb（g/L）女性

男性貧血的程度與臨床表現(xiàn)并不一定一致04臨床意義增生理性增多年齡性別及缺氧代償引起的增多多病理性增多①相對性增多；②絕對性增多減生理學(xué)減少①6個月～2歲的嬰幼兒；②中、晚期妊娠的孕婦；③造血功能減退老年人。以上幾種情況所致的貧血統(tǒng)稱為生理性貧血少病理性減少①骨髓造血功能低下：如再生障礙性貧血、白血病、惡性腫瘤骨髓轉(zhuǎn)移等；②造血原料缺乏：如缺鐵引起的缺鐵性貧血、缺乏維生素B12或葉酸所致的巨幼細(xì)胞性貧血；③紅細(xì)胞破壞增加：各種溶血性貧血；④紅細(xì)胞丟失過多：急、慢性失血RBC+Hb的變化紅細(xì)胞形態(tài)檢查01正常紅細(xì)胞形態(tài)正常的紅細(xì)胞呈雙凹圓盤形，細(xì)胞大小均一，平均直徑約7.2μm，瑞氏染色后為淡粉紅色，血紅蛋白充盈良好，呈正常色素性、向心性淺染，中央有生理性淡染區(qū)胞質(zhì)內(nèi)無異常結(jié)構(gòu)。除健康人外，部分再生障礙性貧血、急性失血性貧血和白血病等患者的紅細(xì)胞亦呈正常形態(tài)。02異常紅細(xì)胞形態(tài)（1）大小異常大紅細(xì)胞大小不等小紅細(xì)胞巨紅細(xì)胞直徑小于6μm直徑大于10μm直徑大于15μm指同一血涂片中紅細(xì)胞大小懸殊，直徑相差在1倍以上小紅細(xì)胞大紅細(xì)胞和巨紅細(xì)胞紅細(xì)胞大小不等02異常紅細(xì)胞形態(tài)（2）形態(tài)異常橢圓形紅細(xì)胞靶形紅細(xì)胞球形紅細(xì)胞口形紅細(xì)胞棘形紅細(xì)胞緡錢狀排列裂片紅細(xì)胞紅細(xì)胞形態(tài)不整鐮刀形紅細(xì)胞淚滴形紅細(xì)胞球形紅細(xì)胞口形紅細(xì)胞橢圓形紅細(xì)胞靶形紅細(xì)胞鐮刀形紅細(xì)胞裂片紅細(xì)胞棘形紅細(xì)胞淚滴形紅細(xì)胞紅細(xì)胞形態(tài)不整緡錢狀紅細(xì)胞02異常紅細(xì)胞形態(tài)（3）染色異常低色素性紅細(xì)胞高色素性紅細(xì)胞嗜多色性紅細(xì)胞裂片紅細(xì)胞高色素性紅細(xì)胞低色素性紅細(xì)胞嗜多色性紅細(xì)胞02異常紅細(xì)胞形態(tài)（4）結(jié)構(gòu)異常卡波氏環(huán)染色質(zhì)小體嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞有核紅細(xì)胞染色質(zhì)小體（Howell-Jollybody）：又稱豪-焦小體，位于成熟或幼稚紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的紫紅色小體，直徑1～2μm，1至數(shù)個不等，為核碎裂或溶解后的殘余物。最常見于巨幼細(xì)胞性貧血，也見于溶血性貧血及脾切除術(shù)后。染色質(zhì)小體卡-波環(huán)（Cabotring）：存在于成熟或幼稚紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)，呈紫紅色線圈狀或“8”字形結(jié)構(gòu)，可能是紡錘體的殘余物或脂蛋白變性所致。常與染色質(zhì)小體并存，見于溶貧、巨幼貧、白血病及鉛中毒等。卡波氏環(huán)嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞（basophilicstipplingcell）：指在瑞氏染色涂片中，紅細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)形態(tài)大小不一、數(shù)量不等的灰藍(lán)色點(diǎn)狀物。在鉛、鉍、鋅、汞等重金屬中毒時增多，為鉛中毒診斷的篩查指標(biāo)。重癥巨幼細(xì)胞性貧血和骨髓纖維化等亦可見增多。嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞有核紅細(xì)胞（nucleatederythrocyte，NRBC）：即幼稚紅細(xì)胞。存在于骨髓中，1周內(nèi)新生兒外周血涂片可見少量，成人外周血中出現(xiàn)有核紅細(xì)胞屬病理現(xiàn)象，常見于各種溶血性貧血、白血病、紅白血病等。有核紅細(xì)胞都來認(rèn)一認(rèn)，異常屬于哪一種？血細(xì)胞比容01血細(xì)胞比容的概念血細(xì)胞比容（hemotocrit，HCT；packedcellvolume，PCV），是指一定體積（1L）的全血中（抗凝血）紅細(xì)胞所占容積的相對比例（小數(shù)或百分?jǐn)?shù)）HCT的高低主要與細(xì)胞紅數(shù)量、大小有關(guān)，主要用于貧血和紅細(xì)胞增多的診斷，反應(yīng)血液稀釋和血液濃縮變化02血細(xì)胞比容測定方法HCT測定可采用直接離心法（包括溫氏法和微量法）或間接血液分析儀法溫氏法微量法素折射儀法黏度法比重測定法放射性核法其中微量法為推薦方法，放射性核素法為參考方法02血細(xì)胞比容測定方法溫氏法將定量的抗凝血灌注于特制的細(xì)玻璃管中，定時、定速離心后,有形成分和血漿分離，上層呈淡黃色的液體是血漿，中間很薄一層為灰白色，即白細(xì)胞和血小板（或栓細(xì)胞），下層為暗紅色的紅細(xì)胞，彼此壓緊而不改變細(xì)胞的正常形態(tài)。根據(jù)紅細(xì)胞柱及全血高度，可計算出紅細(xì)胞在全血中的容積比值，即為紅細(xì)胞比容（壓積）02血細(xì)胞比容測定方法抗凝血注入Wintrobe管以2264g離心力離心30分鐘讀數(shù)再離心10分鐘判讀結(jié)果03血細(xì)胞比容參考區(qū)間04血細(xì)胞比容臨床意義增高：①各種原因引起的血液濃縮；②原發(fā)性或繼發(fā)性紅細(xì)胞增多癥；③新生兒。降低：①各種原因引起的血液稀釋；②各種原因引起的貧血。臨床補(bǔ)液量的參考：各種原因?qū)е旅撍畷r，HCT都會增高真性紅細(xì)胞增多癥診斷指標(biāo)：當(dāng)HCT大于0.7，RBC為（7～10）×109/L，Hb大于180g/L，即可診斷。血液流變學(xué)指標(biāo)：自發(fā)性凝血時，HCT可＞0.6。04血細(xì)胞比容臨床意義RBC、HGB、HCT

MCV、MCH、MCHC紅細(xì)胞平均值01紅細(xì)胞平均值的概念平均紅細(xì)胞體積（MCV）就是平均每個紅細(xì)胞的體積，單位pg/L（1g=1012pg）平均紅細(xì)胞血紅蛋白（MCH）就是平均每個紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白量，單位fL（1L=1012fL）平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度（MCHC）就是平均每升紅細(xì)胞內(nèi)含有的血紅蛋白量,單位（g/L）02紅細(xì)胞平均值的計算如果RBC=4.0×1012/L，Hb=120g/L，Hct=0.40，那么MCV=?MCH=？MCHC=?03紅細(xì)胞平均值參考值人群MCV（fl）MCH（pg）MCHC（g/L）成人80～10026～34320～3601～3歲79～10425～32280～350新生兒86～12027～36250～37004紅細(xì)胞平均值的應(yīng)用貧血形態(tài)學(xué)分類MCVMCHMCHC臨床意義正常細(xì)胞性貧血正常正常正常急性失血、急性溶血、再生障礙性貧血、白血病等大細(xì)胞性貧血增高增高正常巨幼細(xì)胞性貧血單純小細(xì)胞性貧血降低降低正常慢性炎癥、尿毒癥等小細(xì)胞低色素性貧血降低降低降低缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、慢性失血等網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)01網(wǎng)織紅細(xì)胞定義網(wǎng)織紅細(xì)胞（Ret）是介于晚幼紅細(xì)胞和成熟紅細(xì)胞之間的過渡階段細(xì)胞，其胞質(zhì)中尚殘留部分嗜堿性物質(zhì)（RNA），可被某些染料活體染色后呈藍(lán)色或紫色的網(wǎng)狀或顆粒狀結(jié)構(gòu)，故名為網(wǎng)織紅細(xì)胞。Ret體積略大于成熟紅細(xì)胞（直徑8.0～9.5μm），仍具有合成血紅蛋白的能力，約1～2天后，過渡為成熟紅細(xì)胞。ICSH將網(wǎng)織紅細(xì)胞分成I～I(xiàn)V型。I型（絲球型）

Ⅱ型（網(wǎng)型）

III型（破網(wǎng)型）

Ⅳ型（點(diǎn)粒型）02網(wǎng)織紅細(xì)胞形態(tài)分型形態(tài)特征正常存在部位I型（絲球型）RBC幾乎被網(wǎng)織物充滿僅存在于正常骨髓II型（網(wǎng)型）位于RBC中央線團(tuán)樣結(jié)構(gòu)松散大量存在于骨髓，極少見于外周血中III型（破網(wǎng)型）網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)稀少，呈不規(guī)則枝點(diǎn)狀排列少量存在于外周血中IV型（點(diǎn)粒型）嗜堿性物質(zhì)少，呈分散的細(xì)顆粒、短絲狀主要存在于外周血中02網(wǎng)織紅細(xì)胞形態(tài)7、抗凝劑原理網(wǎng)織紅細(xì)胞內(nèi)帶負(fù)電荷的RNA磷酸基團(tuán)，與新亞甲藍(lán)、燦爛甲酚蘭等堿性染料帶正電荷的有色反應(yīng)基團(tuán)結(jié)合，使RNA膠體間的負(fù)電荷減少而發(fā)生凝縮，形成藍(lán)色的點(diǎn)狀、線狀或網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，顯微鏡下計數(shù)可得網(wǎng)織紅細(xì)胞的相對值（%）和絕對值（×109/L）（Ret#=RBC×Ret%）。試劑10g/L煌焦油藍(lán)或新亞甲藍(lán)染液。簡要操作染液與待檢血液1︰1混合→室溫放置或37℃水浴10～15分鐘→制備血涂片→低倍鏡下觀察→油鏡計數(shù)→計算。03網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)方法血液染液7、抗凝劑ICSH及我國衛(wèi)計委臨床檢驗中心推薦使用Miller窺盤法Miller窺盤為圓形玻片，玻片上刻有兩個正方形格子，計數(shù)時用小方格A計數(shù)紅細(xì)胞，用大方格B（包含A）計數(shù)網(wǎng)織紅細(xì)胞，大方格B面積為小方格A的9倍。03網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)方法BA03網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)方法B格Ret2個，A格RBC5個03網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)方法小方格A格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)（RBC）大方格B格內(nèi)網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)（Ret）121102140130120121130140111合計11155111×9Ret%==0.5%

Ret#=RBC×Ret%04網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)參考區(qū)間05網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的臨床意義（1）網(wǎng)織紅細(xì)胞增多：表示骨髓造血功能旺盛，見于各種增生性貧血，溶血性貧血尤為顯著。溶血性貧血時由于大量網(wǎng)織紅細(xì)胞進(jìn)入血循環(huán)，網(wǎng)織紅細(xì)胞百分?jǐn)?shù)可增至6%～8%或更多。急性溶血時可高達(dá)20%，嚴(yán)重者甚至可達(dá)40%～50%以上；急性失血性貧血時網(wǎng)織紅細(xì)胞可明顯增高；缺鐵性貧血和巨幼紅細(xì)胞性貧血時，網(wǎng)織紅細(xì)胞正?；蜉p度增高。（2）網(wǎng)織紅細(xì)胞減少：表示骨髓造血功能低下，多見于再生障礙性貧血。網(wǎng)織紅細(xì)胞低于15×109/L為診斷急性再生障礙性貧血的標(biāo)準(zhǔn)之一。急性白血病時，由于骨髓中異常細(xì)胞大量浸潤，使紅細(xì)胞生成受到抑制，可造成網(wǎng)織紅細(xì)胞減少。06網(wǎng)織紅細(xì)胞生成指數(shù)（RPI）反映骨髓造血功能指標(biāo)，代表網(wǎng)織紅細(xì)胞的生成相當(dāng)于健康人多少倍。其計算公式為：網(wǎng)織紅細(xì)胞成熟時間：①健康人RPI為1；②RPI＞3：提示為溶血性貧血或急性失血性貧血；③RPI＜1：提示為骨髓增生低下或紅系成熟障礙所致貧血。紅細(xì)胞沉降率測定7、抗凝劑紅細(xì)胞沉降率（ESR）簡稱血沉，是指紅細(xì)胞在一定條件下自然下沉的速率通常是枸櫞酸鹽抗凝劑，1:4比例，時間是1小時ESR測定的常用方法有魏氏（Westergren）法和自動血沉儀法01紅細(xì)胞沉降率定義7、抗凝劑魏氏法原理：血沉架放置按要求裝血的血沉管1小時，讀取上層血漿高度的毫米數(shù)值，即為紅細(xì)胞沉降率器材：Westergren血沉管、血沉架。簡要操作：取抗凝劑0.4ml→加靜脈血1.6ml，混勻→抗凝血注入血沉管→血沉管直立于血沉架1小時→判讀結(jié)果。02紅細(xì)胞沉降率測定方法7、抗凝劑一次性真空血沉管（Vacuette管）法自動血沉儀法02紅細(xì)胞沉降率測定方法■

準(zhǔn)確■快速

■方便■實用

02紅細(xì)胞沉降率測定方法變化因素評價增快血漿因素纖維蛋白原、γ球蛋白和異常克隆性免疫球蛋白，α、β球蛋白，膽固醇和甘油三酯增高紅細(xì)胞因素大紅細(xì)胞容易形成緡錢狀，使血沉加快；各種原因的貧血感染因素某些病毒、細(xì)菌、藥物、代謝產(chǎn)物和異?？贵w等中和了細(xì)胞表面的負(fù)電荷藥物因素輸入葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、白明膠藥物等標(biāo)本及物理條件患者一過性高脂血癥，標(biāo)本溶血，血沉管傾斜，溫度過高減慢血漿因素清蛋白、糖蛋白及磷脂酰膽堿等增高，抑制紅細(xì)胞緡錢狀形成紅細(xì)胞因素紅細(xì)胞數(shù)量增多、大小不均或球形、鐮形細(xì)胞增多，不利于緡錢狀形成物理條件血沉管不干凈或血柱含氣泡、溫度過低藥物因素服用阿司匹林、可的松、奎寧等血沉影響因素7、抗凝劑成年男性0～15mm/h成年女性0～20mm/h老年人增高，應(yīng)單獨(dú)設(shè)定參考區(qū)間03紅細(xì)胞沉降率參考區(qū)間7、抗凝劑主要是血沉加快有一定的臨床意義，血沉減慢意義不大。血沉加快見于：①疾病組織損傷及壞死；②惡性腫瘤省；③炎癥疾??；④自身免疫?。虎莞咔虻鞍籽Y；⑥高膽固醇血癥；⑦貧血；⑧其他：如結(jié)締組織病、多發(fā)性硬化癥。04紅細(xì)胞沉降率臨床意義白細(xì)胞檢驗?zāi)夸汣ONTENTⅠ白細(xì)胞計數(shù)Ⅱ白細(xì)胞分類計數(shù)白細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查Ⅲ血栓與止血一般檢查Ⅵ嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)Ⅳ紅斑狼瘡細(xì)胞檢查Ⅴ白細(xì)胞計數(shù)白細(xì)胞計數(shù)是指測定單位體積外周血中各種白細(xì)胞的總數(shù)。白細(xì)胞計數(shù)結(jié)果僅反映循環(huán)池中的細(xì)胞數(shù)量。概述01方法1、原理2、白細(xì)胞稀釋液白細(xì)胞顯微鏡計數(shù)法是將全血用稀酸溶液稀釋一定倍數(shù)，使紅細(xì)胞破壞后，充入改良牛鮑（Neubauer）計數(shù)板內(nèi)，在普通光學(xué)顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液內(nèi)的白細(xì)胞總數(shù)。由冰乙酸、亞甲藍(lán)或結(jié)晶紫以及蒸餾水組成。其中冰乙酸破壞紅細(xì)胞，且使白細(xì)胞核固定清晰；亞甲藍(lán)使白細(xì)胞核略著色，便于識別。01方法3、器材4、簡要操作（1）改良牛鮑計數(shù)板（2）改良牛鮑計數(shù)板專用蓋玻片（血蓋片）（3）微量吸管取稀釋液0.38ml→加血20μl，混勻→充池→靜置→低倍鏡下計數(shù)4個大方格內(nèi)的細(xì)胞→計算。02質(zhì)量保證2、計數(shù)誤差1、采血時間的影響（1）技術(shù)誤差：由于操作不正規(guī)或使用器材不準(zhǔn)確造成的誤差稱為技術(shù)誤差。①器材誤差②采血與取血不當(dāng)③稀釋倍數(shù)不準(zhǔn)④充池不當(dāng)⑤白細(xì)胞計數(shù)不準(zhǔn)確（2）固有誤差：又叫計數(shù)域誤差，是由于計數(shù)室內(nèi)每次血細(xì)胞分布不可能完全相同所造成的誤差，其變異系數(shù)與計數(shù)細(xì)胞的多少成反比。3、有核紅細(xì)胞的影響4、經(jīng)驗控制校正公式校正后白細(xì)胞數(shù)/??=??×100/(100+??)x：校正前白細(xì)胞數(shù)y：在白細(xì)胞分類計數(shù)時，計數(shù)100個白細(xì)胞的同時計數(shù)到的有核紅細(xì)胞數(shù)以血涂片中所見白細(xì)胞的多少粗略核對白細(xì)胞計數(shù)結(jié)果有無大的誤差。02質(zhì)量保證血涂片白細(xì)胞/HPWBC（×109/L）2～44～74～67～96～1010～1210～1213～1803方法學(xué)評價方法評價顯微鏡計數(shù)法設(shè)備簡單、費(fèi)用低廉；費(fèi)時、重復(fù)性較差；適用于基層醫(yī)療單位和分散檢測血細(xì)胞分析儀法操作簡便，效率高，重復(fù)性好；儀器較貴，準(zhǔn)確性取決于儀器的性能及工作狀態(tài)；適合于大批量的標(biāo)本集中檢測04參考區(qū)間成人：（3.5～9.5）×109/L兒童：（5～12）×109/L6個月～2歲：（11～12）×109/L新生兒：（15～20）×109/L7、抗凝劑白細(xì)胞總數(shù)高于參考區(qū)間的上限稱白細(xì)胞增多，低于參考區(qū)間的下限稱白細(xì)胞減少白細(xì)胞總數(shù)增多或減少主要受中性粒細(xì)胞數(shù)量的影響，其臨床意義見白細(xì)胞分類計數(shù)05臨床意義白細(xì)胞分類計數(shù)白細(xì)胞分類計數(shù)（DC）方法顯微鏡分類計數(shù)法血細(xì)胞分析儀分類計數(shù)法概述顯微鏡分類計數(shù)主要是將染色好的血涂片在油鏡下根據(jù)白細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征逐個分別計數(shù)（一般計數(shù)100～200個白細(xì)胞），得出各種白細(xì)胞的相對比值或百分率，并注意觀察其形態(tài)的變化。01方法1、簡要操作采血→血涂片制備→染色→低倍鏡檢查→高倍鏡檢查→油鏡下分類計數(shù)。低倍鏡下主要觀察涂片、染色及細(xì)胞分布情況，觀察尾部及兩側(cè)邊緣部分細(xì)胞；選擇細(xì)胞分布比較均勻、染色良好的體尾交界區(qū)域高倍鏡下主要估計白細(xì)胞數(shù)量油鏡下分類計數(shù)白細(xì)胞，同時觀察紅細(xì)胞、血小板形態(tài)以及有無寄生蟲01方法2、報告方式（1）白細(xì)胞分類計數(shù)結(jié)果各種白細(xì)胞所占的比值、百分率、絕對值（2）幼稚或異常白細(xì)胞發(fā)現(xiàn)幼稚或異常白細(xì)胞，應(yīng)計算在白細(xì)胞分類比值或百分率中。（3）有核紅細(xì)胞如見到有核紅細(xì)胞，應(yīng)逐個計數(shù)，但不列入白細(xì)胞總數(shù)之內(nèi)，而是報告分類計數(shù)100個白細(xì)胞的同時見到的有核紅細(xì)胞個數(shù)（4）寄生蟲（5）紅細(xì)胞、血小板的形態(tài)01方法02質(zhì)量保證1．標(biāo)本2．血涂片制備和染色3．鏡檢部位和方式體尾交界處，且必須按一定方式有規(guī)律地移動視野4．鏡檢白細(xì)胞數(shù)量一般要求在油鏡下分類計數(shù)100個白細(xì)胞白細(xì)胞總數(shù)超過15×109/L時，分類計數(shù)200個白細(xì)胞白細(xì)胞數(shù)量明顯減少（＜3×109/L）時，可多檢查幾張血涂片，分類計數(shù)50～100個白細(xì)胞。03方法學(xué)評價方法評價顯微鏡分類法白細(xì)胞分類計數(shù)的參考方法，分類結(jié)果較準(zhǔn)確；設(shè)備簡單、費(fèi)用低廉；但費(fèi)時，且結(jié)果的準(zhǔn)確性取決于操作者個人的技術(shù)水平血細(xì)胞分析儀分類法快速、重復(fù)性好，但對于某些細(xì)胞不能識別，特別是白血病細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞和正常單核細(xì)胞；只能用于篩查，異常標(biāo)本必須采用顯微鏡分類法進(jìn)行復(fù)檢04參考區(qū)間白細(xì)胞百分率（%）絕對值（×109/L）中性分葉核粒細(xì)胞40～751.8～6.3嗜酸性粒細(xì)胞0.4～8.00.02～0.52嗜堿性粒細(xì)胞0～10～0.06淋巴細(xì)胞20～501.1～3.2單核細(xì)胞3～100.1～0.605臨床意義1、白細(xì)胞總數(shù)與中性粒細(xì)胞由于中性粒細(xì)胞在白細(xì)胞中所占百分比最高，因此它的數(shù)量增減是影響白細(xì)胞總數(shù)變化的主要原因。（1）中性粒細(xì)胞生理性增多：①一天之內(nèi)，一般下午較上午高。②劇烈運(yùn)動、情緒激動、嚴(yán)寒、暴熱。③新生兒。④妊娠5個月以上及分娩時⑤吸煙者平均白細(xì)胞總數(shù)比不吸煙者高。由于白細(xì)胞生理波動較大，因此白細(xì)胞計數(shù)波動在30%~50%以內(nèi)臨床上并無意義，可通過定時和連續(xù)計數(shù)觀察以判斷有無臨床意義05臨床意義1、白細(xì)胞總數(shù)與中性粒細(xì)胞（2）中性粒細(xì)胞病理性增多①急性感染②嚴(yán)重的組織損傷及大量血細(xì)胞破壞③急性大出血④急性中毒⑤惡性腫瘤⑥白血?。杭毙孕桶准?xì)胞顯著增高，一般＜100×109/L；慢性型白細(xì)胞＞100×109/L類白血病反應(yīng)：是指機(jī)體對某些刺激因素所產(chǎn)生的類似白血病表現(xiàn)的血象反應(yīng)。外周血中白細(xì)胞數(shù)大多明顯增高，并可有數(shù)量不等的幼稚細(xì)胞出現(xiàn)，但紅細(xì)胞和血小板一般無改變，骨髓增生很少達(dá)到白血病的程度，當(dāng)病因去除后，類白血病反應(yīng)也逐漸消失白細(xì)胞增多與機(jī)體相對缺氧、細(xì)菌內(nèi)毒素、腫瘤壞死產(chǎn)物等引起邊緣池內(nèi)細(xì)胞進(jìn)入循環(huán)池，或刺激骨髓釋放白細(xì)胞增加有關(guān)05臨床意義1、白細(xì)胞總數(shù)與中性粒細(xì)胞（3）中性粒細(xì)胞減少①某些感染：見于某些革蘭陰性桿菌（傷寒、副傷寒沙門菌）感染及病毒感染（流感）無并發(fā)癥時。②某些血液病：如再生障礙性貧血及非白血性白血病，白細(xì)胞可＜1×109/L，分類時淋巴細(xì)胞相對增多。③慢性理化損傷：可抑制骨髓細(xì)胞的有絲分裂而致白細(xì)胞減少④自身免疫性疾?。喝缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡，由于自身免疫性抗核抗體導(dǎo)致白細(xì)胞減少。⑤脾功能亢進(jìn)：腫大的脾臟中單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬破壞過多的白細(xì)胞。05臨床意義2、嗜酸性粒細(xì)胞（1）生理變化正常人嗜酸性粒細(xì)胞白天較低，夜間較高，上午波動大，下午較恒定。（2）病理變化嗜酸性粒細(xì)胞增多：①超敏反應(yīng)性疾病②寄生蟲?、勰承┢つw?、苣承┭翰、菽承盒阅[瘤⑥某些傳染病⑦某些內(nèi)分泌疾病嗜酸性粒細(xì)胞減少：①傷寒、副傷寒、大手術(shù)后②長期使用腎上腺皮質(zhì)激素，嗜酸性粒細(xì)胞常減少05臨床意義3、嗜堿性粒細(xì)胞（1）嗜堿性粒細(xì)胞增多①慢性粒細(xì)胞性白血?、谑葔A性粒細(xì)胞性白血?、圻^敏性疾病（2）嗜堿性粒細(xì)胞減少：減少多無臨床意義05臨床意義4、淋巴細(xì)胞（1）淋巴細(xì)胞增多：出生一周的新生兒外周血白細(xì)胞以中性粒細(xì)胞為主，以后淋巴細(xì)胞逐漸上升，整個嬰幼兒期淋巴細(xì)胞較高，可達(dá)70%；4～6歲后，淋巴細(xì)胞開始下降，中性粒細(xì)胞逐漸上升。整個嬰幼兒期淋巴細(xì)胞百分率較成人高，屬淋巴細(xì)胞生理性增多。淋巴細(xì)胞病理性增多見于：①絕對增多：某些病毒或細(xì)菌所致的傳染病，如風(fēng)疹、流行性腮腺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、傳染性淋巴細(xì)胞增多癥、百日咳等；某些慢性感染，如結(jié)核病恢復(fù)期也可見淋巴細(xì)胞增多，但白細(xì)胞總數(shù)多正常；急、慢性淋巴細(xì)胞性白血病淋巴細(xì)胞增多明顯，且可導(dǎo)致白細(xì)胞總數(shù)增高。②相對增多：再生障礙性貧血、粒細(xì)胞缺乏癥等因中性粒細(xì)胞明顯減少以致淋巴細(xì)胞百分率相對增高。（2）淋巴細(xì)胞減少：主要見于長期接觸放射線或應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素之后，在急性化膿性感染時由于中性粒細(xì)胞明顯增高可導(dǎo)致淋巴細(xì)胞相對減少。05臨床意義5、單核細(xì)胞（1）單核細(xì)胞增多：正常兒童單核細(xì)胞較成人稍高，平均為9%，2周內(nèi)的新生兒可達(dá)15%或更高，屬生理性增多。病理性增多見于：①某些感染：如亞急性感染性心內(nèi)膜炎、瘧疾、黑熱病、急性感染的恢復(fù)期、活動性肺結(jié)核等。②某些血液病：單核細(xì)胞性白血病、粒細(xì)胞缺乏癥的恢復(fù)期、惡性組織細(xì)胞病、淋巴瘤及骨髓增生異常綜合征（MDS）等。（2）單核細(xì)胞減少：意義不大。白細(xì)胞形態(tài)在病理情況下，白細(xì)胞計數(shù)和分類結(jié)果發(fā)生變化外，有時白細(xì)胞的形態(tài)也會發(fā)生改變，血涂片經(jīng)瑞氏或瑞-吉復(fù)合染色后在光學(xué)顯微鏡下檢查，是血細(xì)胞形態(tài)檢查的基本方法，臨床應(yīng)用廣泛。概述01外周血正常白細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞直徑（μm）形態(tài)細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核染色質(zhì)中性桿狀核粒細(xì)胞10～15圓形粉紅色，顆粒量多、細(xì)小、均勻、紫紅色彎曲呈桿狀、帶狀、臘腸樣粗糙，深紫紅色中性分葉核粒細(xì)胞10～15圓形粉紅色，顆粒量多、細(xì)小、均勻、紫紅色分2～5葉，以3葉核為主（40%～50%）粗糙，深紫紅色嗜酸性粒細(xì)胞13～15圓形著色不清，橘黃色顆粒、粗大、整齊排列、均勻充滿胞質(zhì)多分2葉，眼鏡形粗糙，深紫紅色嗜堿性粒細(xì)胞10～12圓形著色不清，紫黑色顆粒、量少、大小不均、排列雜亂、可蓋于核上因顆粒遮蓋而胞核不清晰粗糙，深紫紅色淋巴細(xì)胞6～15圓形或橢圓形透明、淡藍(lán)色、多無顆粒，大淋巴細(xì)胞可有少量粗大、不均勻紫紅色顆粒圓形、橢圓形、腎形深紫紅色，粗糙成塊，核外緣光滑單核細(xì)胞12～20圓形、橢圓形或不規(guī)則形半透明、灰藍(lán)色或灰紅色。顆粒細(xì)小、塵土樣紫紅色腎形、山字形、馬蹄形、扭曲折疊不規(guī)則形疏松網(wǎng)狀，淡紫紅色，有膨脹和立體起伏感02外周血異常白細(xì)胞形態(tài)（1）中性粒細(xì)胞的毒性變化大小不均中毒顆?？张荻爬阵w核變性（2）中性粒細(xì)胞的核象變化中性粒細(xì)胞的核形標(biāo)志著它的發(fā)育階段。外周血中性粒分葉核的占絕大多數(shù)，且以2～3葉為主。病理情況下，中性粒細(xì)胞的核象可發(fā)生變化，即出現(xiàn)核左移或核右移輕度核左移：僅見桿狀核粒細(xì)胞＞6%中度核左移：桿狀核粒細(xì)胞＞10%，并有少數(shù)晚幼粒、中幼粒細(xì)胞重度核左移（類白血病反應(yīng)）：桿狀核粒細(xì)胞＞25%，出現(xiàn)更幼稚的粒細(xì)胞，如早幼粒和原粒，常伴有明顯的中毒顆粒、空泡、核變性等改變（2）中性粒細(xì)胞的核象變化核左移核右移（3）淋巴細(xì)胞的形態(tài)異常1）異型淋巴細(xì)胞在病毒或過敏原等因素刺激下，外周血淋巴細(xì)胞增生并發(fā)生形態(tài)上的改變，稱異型淋巴細(xì)胞。形態(tài)的變異是因增生亢進(jìn)，細(xì)胞體積增大、嗜堿性增強(qiáng)、甚至發(fā)生母細(xì)胞化，此種細(xì)胞絕大多數(shù)屬于T淋巴細(xì)胞。（3）淋巴細(xì)胞的形態(tài)異常Ⅰ型（空泡型）：漿細(xì)胞型，最常見。其胞體比正常淋巴細(xì)胞稍大，多為圓形；胞核呈圓形、橢圓形、腎形或不規(guī)則形，染色質(zhì)呈粗網(wǎng)狀或不規(guī)則聚集呈粗糙的塊狀；胞質(zhì)較豐富，深藍(lán)色，一般無顆粒，含空泡或因具有多數(shù)小空泡而呈泡沫狀Ⅱ型（不規(guī)則型）：單核細(xì)胞型。胞體較Ⅰ型細(xì)胞明顯增大，外形不規(guī)則，似單核細(xì)胞；胞核圓形或不規(guī)則，染色質(zhì)不如Ⅰ型致密；胞質(zhì)豐富，淡藍(lán)或藍(lán)色，有透明感，邊緣處藍(lán)色較深，可有少數(shù)嗜天青顆粒，一般無空泡Ⅲ型（幼稚型）：未成熟細(xì)胞型。胞體較大；胞核大呈圓形或橢圓形，染色質(zhì)呈細(xì)致網(wǎng)狀，可有1～2個核仁；胞質(zhì)量較少呈深藍(lán)色，多無顆粒，偶有小空泡（3）淋巴細(xì)胞的形態(tài)異常2）衛(wèi)星核淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞的主核旁邊另有一個游離的小核（4）其他異常白細(xì)胞1）巨多核中性粒細(xì)胞成熟中性粒細(xì)胞胞體增大，核分葉過多，常為5～9葉，甚至10葉以上，各葉大小差別很大，核染色質(zhì)疏松（4）其他異常白細(xì)胞2）棒狀小體為白細(xì)胞胞質(zhì)中出現(xiàn)的紫紅色細(xì)桿狀物質(zhì)，一個或數(shù)個，長約1～6μm。棒狀小體出現(xiàn)可擬診為急性白血病，并有助于鑒別急性白血病的類型。急性粒細(xì)胞性白血病和急性單核細(xì)胞性白血病可見到棒狀小體，而急性淋巴細(xì)胞性白血病則無。3）幾種特殊的形態(tài)畸形

Pelger-Hüet畸形、Chediak-Higashi畸形、Alder-Reilly畸形和May-Hegglin畸形等，臨床少見?？沙霈F(xiàn)于一些遺傳性疾病患者的外周血中，也可見于嚴(yán)重感染時。（4）其他異常白細(xì)胞嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)掌握嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)法的原理掌握嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)法的方法學(xué)習(xí)目標(biāo)01原理嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)是用適當(dāng)?shù)南♂屢簩⒀合♂屢欢ū稊?shù)，破壞紅細(xì)胞和其他大部分白細(xì)胞，并使嗜酸性粒細(xì)胞著色，混勻后充入計數(shù)池內(nèi)，計數(shù)一定體積內(nèi)的嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)，即可算出每升血液中嗜酸性粒細(xì)胞的數(shù)量。02試劑嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液的主要成分及作用有三：

1）保護(hù)嗜酸性粒細(xì)胞的成分，比如丙酮、乙醇

2）促進(jìn)紅細(xì)胞和中性粒細(xì)胞破壞的成分，如草酸銨、碳酸鉀

3）使嗜酸性粒細(xì)胞著色的成分，如伊紅、固綠嗜酸性粒細(xì)胞稀釋液的比較稀釋液優(yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)伊紅-丙酮試劑簡單，簡便易行久置效果差，最好每周配制1次皂素-甘油細(xì)胞較為穩(wěn)定，著色鮮明易于鑒別；含甘油，液體不易揮發(fā)，置冰箱可保存半年以上含甘油，計數(shù)前應(yīng)充分混勻乙醇-伊紅含碳酸鉀，溶解紅細(xì)胞和其他白細(xì)胞作用強(qiáng)，視野背景清晰；嗜酸性顆粒鮮明橙色，2小時內(nèi)不被破壞，含甘油，液體不易揮發(fā)，試劑可保存半年以上。含10%甘油，比較黏稠，細(xì)胞不易混勻，計數(shù)前應(yīng)充分混勻溴甲酚紫為低滲配方，紅細(xì)胞和其他白細(xì)胞被溶解破壞，嗜酸性粒細(xì)胞被染成藍(lán)色

固綠含丙酮、乙醇兩種保護(hù)劑，使嗜酸性粒細(xì)胞膜完整、無破損現(xiàn)象；含碳酸鉀、草酸銨，其他細(xì)胞破壞完全；固綠使嗜酸性顆粒呈折光較強(qiáng)的藍(lán)綠色注意與殘存的不著色或著色很淺的中性粒細(xì)胞相區(qū)別03操作步驟計數(shù)的簡要操作步驟與白細(xì)胞計數(shù)相似，先加稀釋液0.38ml，再取血20μL，混勻后充上、下兩個計數(shù)池，靜置，在低倍鏡計數(shù)并計算，要注意充的是上、下兩個計數(shù)池，共10個大方格。04質(zhì)量保證在整個操作過程中應(yīng)注意哪些影響因素呢？首先是要.固定標(biāo)本采集時間，以免受日間生理變化的影響。。其次，稀釋液中的乙醇、丙酮等為嗜酸性粒細(xì)胞的保護(hù)劑，應(yīng)注意濃度變化以防嗜酸性粒細(xì)胞被破壞，使結(jié)果偏低再者，嗜酸性粒細(xì)胞在稀釋液中易發(fā)生聚集，要及時輕輕混勻，以免嗜酸性粒細(xì)胞破壞第四，稀釋后30分鐘～1小時內(nèi)計數(shù)完畢，否則嗜酸性粒細(xì)胞逐漸破壞或不易辨認(rèn)，使結(jié)果偏低。最后，計數(shù)時嗜酸性粒細(xì)胞形態(tài)應(yīng)與殘留的中性粒細(xì)胞區(qū)別。05方法學(xué)評價嗜酸性粒細(xì)胞的顯微鏡計數(shù)法血細(xì)胞分析儀法設(shè)備簡單、費(fèi)用低廉；但費(fèi)時、重復(fù)性較差。操作簡便，效率高，重復(fù)性好；但儀器較貴；適合于大批量的標(biāo)本集中檢測；用于篩查。06參考區(qū)間嗜酸性粒細(xì)胞的參考區(qū)間是（0.05～0.5）×109/L07臨床意義若是出現(xiàn)增減，應(yīng)從生理、病理兩個方面進(jìn)行分析1）生理性減少見于腎上腺皮質(zhì)激素的使用2）病理性增多的情況見于①超敏反應(yīng)疾?、诩纳x病③某些皮膚?、苎翰。缏粤＜?xì)胞白血?、菽承盒阅[瘤，特別試淋巴系統(tǒng)的惡性腫瘤⑥某些傳染?。喝缧杉t熱07臨床意義若是出現(xiàn)增減，應(yīng)從生理、病理兩個方面進(jìn)行分析

3）病理性減少見于①傷寒、副傷寒，大手術(shù)后②長期使用腎上腺皮質(zhì)激素除此之外，嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)還可有其他用處，比如可用來觀察急性傳染病的預(yù)后，觀察大手術(shù)和燒傷患者的預(yù)后，用于腎上腺皮質(zhì)功能的測定等。紅斑狼瘡檢查掌握紅斑狼瘡細(xì)胞檢查原理了解紅斑狼瘡細(xì)胞檢查方法及臨床意義學(xué)習(xí)目標(biāo)系統(tǒng)性紅斑狼瘡是一種原因不明，累及多個系統(tǒng)和器官的自身免疫性疾病。90％的病例為女性，尤其是育齡期婦女。自從1948年Hargraves在給SLE