醫(yī)院消毒滅菌的效果監(jiān)測(cè)

醫(yī)院消毒滅菌的

效果監(jiān)測(cè)

醫(yī)院消毒是預(yù)防醫(yī)院內(nèi)感染的重要措施之一，消毒效果的監(jiān)測(cè)是評(píng)價(jià)其消毒設(shè)備運(yùn)轉(zhuǎn)是否正常、消毒藥劑是否有效、消毒方法是否合理、消毒效果是否達(dá)標(biāo)的唯一手段，因而在醫(yī)院消毒、滅菌工作中必不可少。

醫(yī)院消毒效果監(jiān)測(cè)時(shí)需遵循以下原則：監(jiān)測(cè)人員需經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)，掌握一定的消毒知識(shí)，熟悉消毒設(shè)備和藥劑性能，具備熟練的檢驗(yàn)技能；選擇合理的采樣時(shí)間(消毒后、使用前)；遵循嚴(yán)格的無(wú)菌操作。

熱力滅菌效果的監(jiān)測(cè)方法

1壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測(cè)方法（1）

化學(xué)監(jiān)測(cè)法：1）化學(xué)指示卡(管)監(jiān)測(cè)方法:將既能指示蒸汽溫度，又能指示溫度持續(xù)時(shí)間的化學(xué)指示管(卡)放入大包和難以消毒部位的物品包中央，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，取出指示管(卡)，根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。

2）化學(xué)指示膠帶監(jiān)測(cè)法:將化學(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過(guò)滅菌處理3）對(duì)預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌，每日進(jìn)行一次B-D試驗(yàn)。

4）結(jié)果判定:檢測(cè)時(shí)，所放置的指示管(卡)、膠帶的性狀或顏色均變至規(guī)定的條件，判為滅菌合格；若其中之一未達(dá)到規(guī)定的條件,則滅菌過(guò)程不合格。

5）注意事項(xiàng):監(jiān)測(cè)所用化學(xué)指示物須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。

（2）

生物監(jiān)測(cè)法1）指示菌株:指示菌株為耐熱的嗜熱脂肪桿菌芽孢(ATCC7953或

SSIK31株)，菌片含菌量為5.0×105

cfu/片～5.0×106cfu/片，在121℃±0.5℃條件下，D值為1.3min～1.9min，殺滅時(shí)間(KT值)≤19min，存活時(shí)間(ST值)為≥3.9min。

2）培養(yǎng)基:試驗(yàn)用培養(yǎng)基為溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。3）檢測(cè)方法:將兩個(gè)嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片分別裝入滅菌小紙袋內(nèi)，置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包中心部位。再下排氣壓力蒸汽滅菌器滅菌柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包(由3件平紋長(zhǎng)袖手術(shù)衣，4塊小手術(shù)巾，2塊中手術(shù)巾，1塊大毛巾，30塊10cm×10cm8層紗布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小)；預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器滅菌柜室內(nèi)，排氣口上方放置一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試包（由16條全棉手術(shù)巾每條41cm×66cm，將每條手術(shù)巾的長(zhǎng)邊先折成3層，短邊折成2層然后疊放，作成23cm×23cm×15cm大小的測(cè)試包）；手提壓力蒸汽滅菌器用通氣貯物盒（22cm×13cm×6cm)代替標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包，盒內(nèi)盛滿中試管，指示菌片放于中心部位的兩只滅菌試管內(nèi)(試管口用滅菌牛皮紙包封)，將貯物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部。

經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，在無(wú)菌條件下，取出標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包或通氣貯物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)56℃±1℃培養(yǎng)7d(自含式生物指示物按說(shuō)明書(shū)執(zhí)行)，觀察培養(yǎng)基顏色變化。檢測(cè)時(shí)設(shè)陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。

4）結(jié)果判定:每個(gè)指示菌片接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基都不變色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基，由紫色變?yōu)辄S色時(shí)，則滅菌過(guò)程不合格。5）注意事項(xiàng):監(jiān)測(cè)所用菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。生物指示物監(jiān)測(cè)應(yīng)1月1次。2干熱滅菌效果監(jiān)測(cè)方法（1）化學(xué)檢測(cè)法1）檢測(cè)方法:將既能指示溫度又能指示溫度持續(xù)時(shí)間的化學(xué)指示劑3個(gè)～5個(gè)分別放入待滅菌的物品中，并置于滅菌器最難達(dá)到滅菌的部位。經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，取出化學(xué)指示劑，據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。2）結(jié)果判定：檢測(cè)時(shí)，所放置的指示管的顏色及性狀均變至規(guī)定的條件，則判為達(dá)到滅菌條件；若其中之一未達(dá)到規(guī)定的條件，則判為未達(dá)到滅菌條件。3）注意事項(xiàng)：檢測(cè)所用的化學(xué)指示劑需經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。

（2）物理檢測(cè)法:(熱電偶檢測(cè)法)1）檢測(cè)方法:檢測(cè)時(shí)，將多點(diǎn)溫度檢測(cè)儀的多個(gè)探頭分別放于滅菌器各層內(nèi)、中、外各點(diǎn)。關(guān)好柜門(mén)，將導(dǎo)線引出，由記錄儀中觀察溫度上升與持續(xù)時(shí)間。2）結(jié)果判定：若所示溫度（曲線）達(dá)到預(yù)置溫度，則滅菌溫度合格。

（3）生物檢測(cè)法1）指示菌株：枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372），菌片含菌量為5.0×105

cfu/片～5.0×106cfu/片。其抗力應(yīng)符合以下條件：在溫度160℃±2℃時(shí)，其D值為1.3min～1.9min，存活時(shí)間≥3.9min，死亡時(shí)間≤19min。

2）檢測(cè)方法：將枯草桿菌芽孢菌片分別裝入滅菌中試管內(nèi)（1片/管）。滅菌器與每層門(mén)把手對(duì)角線內(nèi)，外角處放置2個(gè)含菌片的試管，試管帽置于試管旁，關(guān)好柜門(mén)，經(jīng)一個(gè)滅菌周期后，待溫度降至80℃時(shí)，加蓋試管帽后取出試管。在無(wú)菌條件下，加入普通營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（5ml/管），以36℃±1℃

培養(yǎng)48h，觀察初步結(jié)果，無(wú)菌生長(zhǎng)管繼續(xù)培養(yǎng)至第七日。

3）結(jié)果判定：若每個(gè)指示菌片接種的肉湯管均澄清，判為滅菌合格，若指示菌片之一接種的肉湯管混濁，判為不合格，對(duì)難以判定的肉湯管，取0.1ml接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，用滅菌L棒涂勻，放36℃±1℃培養(yǎng)48h，觀察菌落形態(tài)，并做涂片染色鏡檢，判斷是否有指示菌生長(zhǎng)，若有指示菌生長(zhǎng)，判為滅菌不合格；若無(wú)指示菌生長(zhǎng)，判為滅菌合格。4）注意事項(xiàng)：檢測(cè)所用的指示菌片需經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。3環(huán)氧乙烷（EO）滅菌效果監(jiān)測(cè)

(1)滅菌效果監(jiān)測(cè)每次滅菌均應(yīng)進(jìn)行程序監(jiān)測(cè)。每個(gè)滅菌物品的外包裝應(yīng)粘貼包外化學(xué)指示膠帶，作為滅菌過(guò)程的標(biāo)志;包內(nèi)放置化學(xué)指示卡，作為滅菌效果的參考。每月應(yīng)做生物監(jiān)測(cè)，移植物必須等生物監(jiān)測(cè)結(jié)果為陰性時(shí)方可使用。具體做法，環(huán)氧乙烷測(cè)試包分挑戰(zhàn)性測(cè)試包和常規(guī)測(cè)試包，前者主要用于對(duì)滅菌器的考核，后者作為平時(shí)的常規(guī)生物監(jiān)測(cè)之用。挑戰(zhàn)性測(cè)試包是將一生物指示劑放于一個(gè)20ml注射器內(nèi)，去掉針頭和針頭套，生物指示劑帶孔的塑料帽應(yīng)朝注射器針頭處，再將注射器芯放在原位(注意不要碰及生物指示物)；另選一成人型氣管插管或一個(gè)塑料注射器(內(nèi)含化學(xué)指示卡)，一個(gè)琥珀色乳膠管(25.4cm長(zhǎng)，0.76cm內(nèi)徑，1.6mm管壁厚)和4條全棉清潔手術(shù)巾(46cm×76cm)，每條巾單先折疊成3層，再對(duì)折，即每條巾單形成6層，然后將疊好的巾單從下至上重疊在一起，再將上述物品放于巾單中間層，最后選兩條清潔布或無(wú)紡布包裹，用化學(xué)指示膠帶封扎成一個(gè)測(cè)試包。

常規(guī)測(cè)試包的制備方法類似，先將一生物指示劑放于一個(gè)注射器內(nèi)(同前)，再用一條全棉小毛巾兩層包裹，一起放入一剝離式包裝袋內(nèi)。(2)儀器監(jiān)測(cè)法按照GB18279-2000醫(yī)療器械

環(huán)氧乙烷滅菌確認(rèn)和常規(guī)控制

附錄

C中C3.1的要求進(jìn)行。(3)化學(xué)監(jiān)測(cè)法每次消毒過(guò)程均用化學(xué)指示物監(jiān)測(cè)，只有當(dāng)消毒工藝符合要求，化學(xué)指示物變色符合規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)色要求的情況下，產(chǎn)品才可放行。(4)生物指示物監(jiān)測(cè)法一般每月用生物指示物監(jiān)測(cè)一次。生物指示物用枯草桿菌黑色變種芽孢（ATCC9372），抗力要求為：菌量在5×105cfu/片～5×106cfu/片，在環(huán)氧乙烷劑量為600mg/L±30mg/L，作用溫度為54℃±2℃，相對(duì)濕度為60%±10%條件下，其殺滅90%該微生物的D值為2.6min～5.8min，存活時(shí)間應(yīng)≥7.8min，死亡時(shí)間應(yīng)≤58min。

在消毒效果用該微生物監(jiān)測(cè)時(shí)，菌量為5×103cfu/片～5×104cfu/片。放置菌片的數(shù)量應(yīng)足夠多。根據(jù)通常做常規(guī)微生物學(xué)監(jiān)測(cè)的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，采用以下數(shù)量的生物指示物較為適宜：①滅菌器柜室可用體積小于5m3時(shí)，至少放置10個(gè)菌片；②滅菌器柜室可用體積為5m3至10m3時(shí)，每增加1m3，增加1個(gè)菌片；③滅菌器柜室可用體積大于10m3時(shí)，每增加2m3，增加1個(gè)菌片。

生物指示物應(yīng)放在那些在性能鑒定時(shí)發(fā)現(xiàn)是最難滅菌的部位，并均勻分布于整個(gè)滅菌物品中。生物指示物應(yīng)在預(yù)處理之前放入被滅菌物品內(nèi)或被滅菌物品的試件內(nèi)。應(yīng)盡量在滅菌周期完成后立即將生物指示物從被滅菌物品中取出并進(jìn)行培養(yǎng)。應(yīng)確定任何延遲復(fù)蘇，特別是暴露于殘留EO氣體中的影響。所以，取出的指示菌片接種于含有復(fù)方中和劑的0.5%的葡萄糖肉湯培養(yǎng)基管中，以未經(jīng)處理的陽(yáng)性菌片做相同接種，兩者均置于36℃±1℃培養(yǎng)。

(5)每次滅菌都應(yīng)進(jìn)行滅菌過(guò)程監(jiān)測(cè)。(6)結(jié)果判定：經(jīng)培養(yǎng)，陽(yáng)性對(duì)照在24h內(nèi)有菌生長(zhǎng)；監(jiān)測(cè)樣品若連續(xù)培養(yǎng)觀察5天，全部無(wú)菌生長(zhǎng)，可報(bào)告生物指示物培養(yǎng)陰性，滅菌合格。

(7)注意事項(xiàng)：檢測(cè)所用化學(xué)和微生物指示物必須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。

4紫外線消毒效果的監(jiān)測(cè)

4.1紫外線燈管輻照度值的測(cè)定（1）檢測(cè)方法:1）紫外線輻照計(jì)測(cè)定法：開(kāi)啟紫外線燈5min后，將測(cè)定波長(zhǎng)為253.7nm的紫外線輻照計(jì)探頭置于被檢紫外線燈下垂直距離1m的中央處，待儀表穩(wěn)定后，所示數(shù)據(jù)即為該紫外線燈管的輻照度值。2）紫外線強(qiáng)度照射指示卡監(jiān)測(cè)法：開(kāi)啟紫外線燈5min后，將指示卡置紫外燈下垂直距離1m處，有圖案一面朝上，照射1min（紫外線照射后，圖案正中光敏色塊由乳白色變成不同程度的淡紫色），觀察指示卡色塊的顏色，將其與標(biāo)準(zhǔn)色塊比較，讀出照射強(qiáng)度。

（2）結(jié)果判定:普通30w直管型紫外線燈，新燈輻照強(qiáng)度

≥90μW/cm2為合格；使用中紫外線燈輻照強(qiáng)度≥70μW/cm2為合格；30W高強(qiáng)度紫外線新燈的輻照強(qiáng)度≥180μW/cm2為合格。（3）注意事項(xiàng):測(cè)定時(shí)電壓220V±５V，溫度20℃～25℃，相對(duì)濕度＜60％，紫外線輻照計(jì)必須在計(jì)量部門(mén)檢定的有效期內(nèi)使用；指示卡應(yīng)獲得衛(wèi)生許可批件，并在有效期內(nèi)使用。4.2生物監(jiān)測(cè)法

（1）空氣消毒效果監(jiān)測(cè)。（2）表面消毒效果監(jiān)測(cè)。（3）注意事項(xiàng):紫外線消毒效果監(jiān)測(cè)時(shí)，采樣液(平板)中不加中和劑。5醫(yī)療器械滅菌效果的監(jiān)測(cè)

5.1采樣時(shí)間:在滅菌處理后，存放有效期內(nèi)采樣。

5.2

無(wú)菌檢驗(yàn)無(wú)菌檢驗(yàn)是指檢查經(jīng)滅菌的敷料、縫線、一次性使用的醫(yī)療用品、無(wú)菌器械以及適合于無(wú)菌間查的其它品種是否無(wú)菌的一種方法。無(wú)菌檢驗(yàn)應(yīng)在潔凈度為100級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免微生物污染；對(duì)單向流空氣區(qū)域及工作臺(tái)面，必須進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。

（1）

無(wú)菌檢驗(yàn)前準(zhǔn)備1）洗脫液與培養(yǎng)基無(wú)菌性試驗(yàn):無(wú)菌試驗(yàn)前3d，于需-厭養(yǎng)培養(yǎng)基與霉菌培養(yǎng)基內(nèi)各接種1ml洗脫液，分別置30℃～35℃與20℃～25℃培養(yǎng)72h，應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)。2）陽(yáng)性對(duì)照管菌液制備:

①在試驗(yàn)前一天取金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通瓊脂斜面新鮮培養(yǎng)物，接種1環(huán)至需-厭氧培養(yǎng)基內(nèi)，在30℃～35℃培養(yǎng)16h～18h后，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml～100cfu/ml;②取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厭氧菌培養(yǎng)基新鮮培養(yǎng)物1接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于30℃～35℃培養(yǎng)18h～24h后，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml～100cfu/ml;③取白色念珠菌[CMCC（F）98001]真菌瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物1接種環(huán)種于相同培養(yǎng)基內(nèi)，于20℃～25℃培養(yǎng)24h后，用0.9%無(wú)菌氯化鈉溶液稀釋至10cfu/ml～100cfu/ml。

（2）無(wú)菌操作:取縫合針、針頭、刀片等小件醫(yī)療器械5件直接浸入6管需-厭氧培養(yǎng)管(其中一管作陽(yáng)性對(duì)照)與4管霉菌培養(yǎng)管。

培養(yǎng)基用量為15ml/管。1)取5付注射器，在5ml洗脫液中反復(fù)抽吸5次，洗下管內(nèi)細(xì)菌，混和后接種需-厭養(yǎng)菌培養(yǎng)管(共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照)與霉菌培養(yǎng)管(共4管)。

接種量：1ml注射器為0.5ml，2ml注射器為1ml，5ml～10ml注射器為2ml，20ml～50ml注射器為5ml，培養(yǎng)基用量：接種量為2ml以下為15ml/管，接種量5ml為40ml/管。

2)手術(shù)鉗、鑷子等大件醫(yī)療器械取2件用沾有無(wú)菌洗脫液的棉拭子反復(fù)涂抹采樣，將棉拭子投入5ml無(wú)菌洗脫液中，將采樣液混勻，接種于需-厭氧培養(yǎng)管(共6管，其中1管作陽(yáng)性對(duì)照)與霉菌培養(yǎng)基(共4管)。接種量為1ml/管，培養(yǎng)基用量為15ml/管。（3）培養(yǎng):在待檢樣品的需-厭氧培養(yǎng)管中，接種預(yù)先準(zhǔn)備的金黃色葡萄球菌陽(yáng)性對(duì)照管液1:1000稀釋1ml，將需-厭氧培養(yǎng)管以及陽(yáng)性與陰性對(duì)照管均于30℃～35℃培養(yǎng)

5d，霉菌培養(yǎng)管與陰性對(duì)照管于20℃～25℃培養(yǎng)7d，培養(yǎng)期間逐日檢查是否有菌生長(zhǎng)。

如加入供試品后培養(yǎng)基出現(xiàn)混濁或沉淀，經(jīng)培養(yǎng)后不能從外觀上判斷時(shí)，可取培養(yǎng)液轉(zhuǎn)種入另一支相同的培養(yǎng)基中或斜面培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48h～72h后，觀察是否再現(xiàn)混濁或在斜面上有無(wú)菌落生長(zhǎng)，并在轉(zhuǎn)種的同時(shí)，取培養(yǎng)液少量，涂片染色，用顯微鏡觀察是否有菌生長(zhǎng)。（4）結(jié)果判定:陽(yáng)性對(duì)照在24h內(nèi)應(yīng)有菌生長(zhǎng)，陰性對(duì)照在培養(yǎng)期間應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管內(nèi)均為澄清或雖顯混濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，判為滅菌合格；如需-厭氧菌及霉菌培養(yǎng)管中任何1管顯混濁并證實(shí)有菌生長(zhǎng)，應(yīng)重新取樣，分別同法復(fù)試2次，除陽(yáng)性對(duì)照外，其他各管均不得有菌生長(zhǎng)，否則判為滅菌不合格。

5.3注意事項(xiàng)（1）送檢時(shí)間不得超過(guò)6h，若樣品保存于0℃～4℃，則不得超過(guò)24h。（2）被采樣本表面積＜100cm2取全部表面；被采樣本表面積≥100cm2，取100cm2。（3）若消毒因子為化學(xué)消毒劑，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。6手和皮膚黏膜消毒效果監(jiān)測(cè)

6.1采樣時(shí)間:在消毒后立即采樣。

6.2采樣方法(1)手的采樣:被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面積約30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。

(2)皮膚粘膜采樣:用5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢皮膚處，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)動(dòng)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的試管內(nèi)，立即送檢。不規(guī)則的粘膜皮膚處可用棉拭子直接涂擦采樣。

6.3檢測(cè)方法(1)細(xì)菌總數(shù)檢測(cè):將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，用無(wú)菌吸管吸取1.0ml待檢樣品接種于滅菌平皿，每一樣本接種2個(gè)平皿，內(nèi)加入已溶化的45℃～48℃

的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，置36℃±1℃溫箱培養(yǎng)48h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)。采樣結(jié)果計(jì)算方法：

平板上菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)

細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)＝────────────────采樣面積(cm2)(2)致病菌檢測(cè)。6.4結(jié)果判定(1)消毒洗手

Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。Ⅲ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。Ⅳ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。

母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門(mén)菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。(2)皮膚黏膜:參照手的衛(wèi)生學(xué)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。6.5注意事項(xiàng)皮膚粘膜采樣處，若表面不足5cm×5cm，可用相應(yīng)面積的規(guī)格板采樣。

7物品和環(huán)境表面消毒效果的監(jiān)測(cè)

7.1采樣時(shí)間:在消毒處理后進(jìn)行采樣。

7.2采樣方法:用5cm×5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢物體表面，采樣面積≥100cm2，連續(xù)采樣4個(gè)，用浸有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液的棉拭子1支，在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次，并隨之轉(zhuǎn)棉拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入10ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。門(mén)把手等不規(guī)則物體表面用棉拭子直接涂擦采樣。

7.3檢測(cè)方法(1)細(xì)菌總數(shù)檢測(cè):小型物體表面的結(jié)果計(jì)算，用

cfu/件表示。(2)致病菌檢測(cè)。7.4結(jié)果判定Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。Ⅲ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。Ⅳ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、

新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門(mén)菌。

7.5注意事項(xiàng)(1)采樣時(shí)間;(2)樣本量及處理。

8空氣消毒效果的監(jiān)測(cè)

8.1采樣時(shí)間:在消毒處理后、操作前進(jìn)行采樣。

8.2采樣方法:平板暴露法(1)布點(diǎn)方法:室內(nèi)面積≤30m2，設(shè)內(nèi)、中、外對(duì)角線3點(diǎn)，內(nèi)、外點(diǎn)布點(diǎn)部位距墻壁1M處；室內(nèi)面積＞30m2，設(shè)4角及中央5點(diǎn)，4角的布點(diǎn)部位距墻壁1m處。(2)采樣方法:將普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板(直徑為9cm)放在室內(nèi)各采樣點(diǎn)處，采樣高度為距地面1.5m采樣時(shí)將平板蓋打開(kāi)，扣放于平板旁，暴露5min，蓋好立即送檢。

8.3檢測(cè)方法:平板暴露法結(jié)果計(jì)算公式：

細(xì)菌總數(shù)（cfu/m3）=50000N/（A×T）式中A為平板面積（cm2）；T為平板暴露時(shí)間（min）；N為平均菌落數(shù)（cfu）。

8.4結(jié)果判定Ⅰ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/m3(或0.2cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/m3(或4cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；Ⅲ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤500cfu/m3(或10cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。8.5

注意事項(xiàng)采樣前，關(guān)好門(mén)、窗，在無(wú)人走動(dòng)的情況下，靜止10min進(jìn)行采樣。9消毒液的監(jiān)測(cè)

9.1常用消毒液有效成分測(cè)定（1）有效氯含量測(cè)定；（2）有效碘含量的測(cè)定；（3）戊二醛（C5H8O2）含量的測(cè)定；（4）過(guò)氧化氫(H2O2)濃度的測(cè)定；（5）過(guò)氧乙酸(C2H4O3)濃度的測(cè)定；（6）二氧化氯(ClO2)含量的測(cè)定；（7）二溴海因含量測(cè)定；（8）乙醇含量測(cè)定；（9）醋酸氯己定(C22H30Cl2N10·2C2H4O2)含量的測(cè)定；（10）臭氧含量測(cè)定；（11）苯扎溴銨含量測(cè)定。9.2使用中消毒液染菌量測(cè)定(1)檢測(cè)方法：1）涂抹法:用無(wú)菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入9.0ml含有相應(yīng)中和劑的采樣管內(nèi)混勻，用無(wú)菌吸管吸取上述溶液0.2ml，滴于干燥普通瓊脂平板，每份樣品同時(shí)做2個(gè)平行樣，一平板置20℃

培養(yǎng)7d，觀察霉菌生長(zhǎng)情況，另一個(gè)平板置35℃溫箱培養(yǎng)72h記數(shù)菌落數(shù)，同時(shí)按3.17.15的原則檢測(cè)致病菌。

消毒液染菌量(cfu/ml)＝每個(gè)平板上的菌落數(shù)×502）傾注法：用無(wú)菌吸管吸取消毒液1.0ml，加入到9.0ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水采樣管中混勻，分別取0.5ml放入2只滅菌平皿內(nèi)，加入已熔化的45℃～48℃

的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15ml～18ml，邊傾注邊搖勻，待瓊脂凝固，一平板置20℃培養(yǎng)7d，觀察霉菌生長(zhǎng)情況;另一個(gè)平板置36℃±1℃培養(yǎng)72h，計(jì)數(shù)菌落數(shù)，同時(shí)按3.17.15的原則檢測(cè)致病菌。消毒液染菌量(cfu/ml)＝每個(gè)平板上的菌落數(shù)×20(2)結(jié)果判斷:消毒液染菌量≤100cfu/ml，并未檢出致病菌為合格。(3)注意事項(xiàng):采樣后1h內(nèi)檢測(cè)。10餐具消毒效果監(jiān)測(cè)10.1采樣時(shí)間:在消毒后、使用前進(jìn)行采樣。

10.2采樣方法:將2.0cm×2.5cm滅菌濾紙片于無(wú)菌洗脫液中浸濕均勻，貼在食具表面，經(jīng)5min取下，每10張濾紙合為一份樣本(相當(dāng)于50cm2采樣面積)，投入含50ml生理鹽水的100ml三角燒瓶中，于4h內(nèi)送檢。

10.3檢測(cè)方法(1)細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè):按3.17.6.3.(1)執(zhí)行。(2)大腸菌群的檢測(cè):取1ml采樣液，加入相應(yīng)的單倍或雙倍乳糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，置37℃溫箱培養(yǎng)24h，若乳糖膽鹽發(fā)酵管不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，則可報(bào)告大腸菌群陰性。

如果有疑慮則進(jìn)行分離培養(yǎng)。10.4注意事項(xiàng):餐具若用化學(xué)消毒劑消毒，采樣液中應(yīng)加入相應(yīng)中和劑。

11衛(wèi)生潔具消毒效果監(jiān)測(cè)

(1)采樣時(shí)間:在消毒后、使用前進(jìn)行采樣。(2)采樣方法:便器、尿壺等容器可用沾有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水的棉拭子，反復(fù)涂擦容器的內(nèi)表面及內(nèi)口處，剪去手接觸部位后，將棉拭子投入5ml無(wú)菌生理鹽水試管中，立即送檢。拖把、抹布等物品可用無(wú)菌的方法剪取1cm×3cm，直接投入5ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水中，立即送檢。(3)檢測(cè)方法:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，取采樣液按3.17.15的原則檢測(cè)致病菌。(4)結(jié)果判定:未檢出致病菌為消毒合格。12內(nèi)鏡消毒滅菌效果的監(jiān)測(cè)12.1采樣時(shí)間:在消毒滅菌后、使用前進(jìn)行采樣。

12.2采樣方法:用沾有含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水的棉拭子，在被檢內(nèi)鏡上從鏡頭至鏡身反復(fù)涂擦，剪去手接觸部位，將棉拭子投入到5ml含相應(yīng)中和劑的生理鹽水采樣管中，立即送檢。

12.3檢測(cè)方法(1)細(xì)菌總數(shù)的檢測(cè);(2)致病菌檢測(cè):將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，按3.17.15原則檢測(cè)致病菌。12.4結(jié)果判定:滅菌后內(nèi)鏡，未檢出任何微生物為合格。消毒后的內(nèi)鏡，細(xì)菌總數(shù)≤20cfu/件，并未檢出致病菌為合格。12.5注意事項(xiàng)。

13醫(yī)用污物消毒效果監(jiān)測(cè)

13.1采樣時(shí)間:在消毒后、清運(yùn)前進(jìn)行采樣。13.2焚化消毒效果監(jiān)測(cè):可焚化物品的消毒效果監(jiān)測(cè)，以污物燃燒充分、徹底為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行直接檢查。13.3堿化消毒效果監(jiān)測(cè):以熟石灰為消毒劑的堿化消毒，日常監(jiān)測(cè)以pH為指標(biāo)。

消毒后30min檢查

pH值，若pH=12，繼續(xù)作用24h為消毒合格。13.4氯化消毒效果監(jiān)測(cè):氯化消毒效果的日常監(jiān)測(cè)，以余氯量為指標(biāo)，在消毒接觸時(shí)間2h后測(cè)定余氯量，余氯量＞200mg/L，為消毒合格。13.5其它消毒因子消毒效果監(jiān)測(cè)。(1)采樣方法:取1ml消毒后待檢污物(固體稱取2g)，置于5ml含相應(yīng)中和劑的無(wú)菌生理鹽水的采樣管中，立即送檢。(2)檢測(cè)方法:將采樣管在混勻器上振蕩20s或用力振打80次，取采樣液按17.15原則檢測(cè)致病菌。13.6結(jié)果判定:未檢出致病菌為消毒合格。14織物消毒效果監(jiān)測(cè)14.1采樣時(shí)間:在消毒烘干后進(jìn)行采樣。14.2采樣方法。14.3檢測(cè)方法。14.4結(jié)果判定:未檢出致病菌為消毒合格。15致病菌的檢測(cè)

15.1檢測(cè)原則:致病菌的檢測(cè)依據(jù)污染情況進(jìn)行相應(yīng)指標(biāo)的檢測(cè)。15.2金黃色葡萄球菌檢測(cè)。