DB32T 3762.17-2021 新型冠狀病毒檢測(cè)技術(shù)規(guī)范 第17部分：核酸檢測(cè)用假病毒陽性質(zhì)控品　　

DB32TechnicalspecificationsforSARS-CoV-2detePart17:Pseudoviruspositivecontrolma江蘇省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 2 2 3 3 3 5 5——第6部分：血清IgM和IgG抗體膠體金免疫層析檢1本文件適用于新型冠狀病毒核酸檢測(cè)用假病毒類弱陽性質(zhì)控品的技術(shù)要求以及評(píng)價(jià)方GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)假病毒質(zhì)控品pseudoviruscontrolma計(jì)量溯源性metrologicaltrace2假病毒質(zhì)控品在特定的保存條件和保存時(shí)間內(nèi)，4縮略語DMEM：Dulbecco改良培養(yǎng)基（Dulbecco’smodifiedeagle’smedium）PCR：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerasechainreactioqPCR：熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（quantitativepolymerasechainreactRT-PCR：逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reversetranscriptionpolymerasechainreactioRT-qPCR：逆轉(zhuǎn)錄熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reversetranscriptionquantitativepolymerasechain5.1假病毒質(zhì)控品的技術(shù)要求主要分為兩個(gè)方面，包含對(duì)假病毒原液的技術(shù)要求，如假病毒內(nèi)靶標(biāo)a)用于制備質(zhì)控品的原料假病毒含有與新冠核酸檢測(cè)的靶標(biāo)RNA序列一d)質(zhì)控品的靶標(biāo)RNA濃度為試劑盒檢出限的1.5-3倍左右，且定值結(jié)果具有計(jì)量溯源性；3g)質(zhì)控品適用于至少8款獲批上市的新型冠狀病毒核酸檢測(cè)6.2PCR、RT-PCR、RT-qPCR、數(shù)字PCR相關(guān)6.5無RNA酶的各型號(hào)槍頭、EP管、PC6.6本文件中所有的化學(xué)試劑，除特別說明外，全部為分析純級(jí)別試劑。4表1中國(guó)疾病預(yù)防控制中心、世界衛(wèi)生組織推薦的新型冠狀病毒核酸檢測(cè)引物和FRPNFRPEFRP將的產(chǎn)物測(cè)序。測(cè)序結(jié)果與相應(yīng)的新型冠狀病毒核酸檢測(cè)靶標(biāo)RNA的參考序列進(jìn)行比在RT-PCR陰性對(duì)照和陽性對(duì)照都a)若滿足假病毒RNA的RT-PCR產(chǎn)物的電泳結(jié)果為陽性且測(cè)序結(jié)果比對(duì)一分別以未做核酸提取的假病毒原液和假病毒中提取的RNA為模板，使用推薦的或自行設(shè)計(jì)的引物和探針或商品化試劑盒進(jìn)行qPCR擴(kuò)增。設(shè)置以水為模板的陰性對(duì)照，以重組質(zhì)粒為模板的陽性對(duì)a)若未提取的假病毒原液和/或假病毒提取的RNA的qPCR結(jié)果為b)若未提取的假病毒原液和假病毒提取的RNA的qPCR結(jié)果為陰性，即未起峰或9質(zhì)控品的制備5采用核酸提取方法提取假病毒質(zhì)控品的RNA，采用RT-qPCR法或數(shù)字PCR法對(duì)靶標(biāo)RNARNA濃度的定值方法均應(yīng)通過適宜的國(guó)家有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的驗(yàn)證方可采用。使用RT-qPCR法進(jìn)行定量時(shí)，所使用的具體方法應(yīng)為針對(duì)新型冠狀病進(jìn)行RT-qPCR反應(yīng)，根據(jù)各梯度標(biāo)準(zhǔn)品的CC（1）C—質(zhì)控品中靶標(biāo)RNA的原始濃度A—數(shù)字PCR反應(yīng)體系中靶標(biāo)RNA的稀釋倍數(shù)；定值結(jié)果采取10.1.2或10.1.檢測(cè)試劑盒檢出限的1.5-3倍左6裝單元進(jìn)行均勻性檢測(cè)。對(duì)質(zhì)控品進(jìn)行核酸提取后，按10.1.2或10.1.3的方法進(jìn)行靶標(biāo)RNA濃度均勻性良好，即為合格。若存在顯著性差異，即為均勻?qū)Σ煌瑫r(shí)間點(diǎn)或Rnas1343的統(tǒng)計(jì)學(xué)要求進(jìn)行檢