DB32T 3487-2018 黃瓜綠斑駁花葉病毒苗期檢測技術(shù)規(guī)程　_第1頁
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省地DB32TechnicalSpecificationfortheSeedlingDetect江蘇省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：程兆榜、任春梅、季英華、楊柳、繆倩、1黃瓜綠斑駁花葉病毒苗期檢測技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)適用于苗床期癥狀尚未表現(xiàn)的瓜類作物上黃瓜綠斑駁花葉病毒的3用具耗材：移液器、一次性手套、牛皮紙袋、標(biāo)簽紙4檢測技術(shù)4.1采樣方法4.1.1采樣時間待檢材料為嫁接或未嫁接的黃瓜、西瓜、甜瓜、南瓜等瓜類作物幼苗，采樣時間為出廠定植前34.1.2采樣部位2保存。留存樣品室溫下蔭干-20℃的條件下冰凍保存一年后，確認(rèn)不再需要時焚燒或深埋處4.2檢測方法4.2.1樣品處理4.2.2免疫捕獲4.2.2.1用碳酸鹽包被緩沖液（見附錄A）稀釋黃瓜綠斑駁花葉病毒的抗4.2.2.3棄樣品提取液，用洗滌4.2.3反轉(zhuǎn)錄4.2.3.1CGMMV特異性引物的設(shè)mmol/LdNTPs（每種10mmol/L觀察瓊脂糖凝膠電泳（參見附錄B）結(jié)果，陽性對照在660出現(xiàn)的前提下，待測樣品在660bp處有條帶出現(xiàn)，即可判定樣品攜帶CGMMV；否則為陰性反應(yīng)，即將實(shí)驗(yàn)室檢測鑒定結(jié)果記載于表1（瓜苗攜帶黃瓜綠斑駁花葉病毒檢測結(jié)果記錄表見附錄B4A.1免疫捕獲緩沖液A.1.2通用樣品處理緩沖液（GeneralExtractBuA.1.3碳酸鹽包被緩沖液（Coatingb離子水10倍稀釋，即為0.5×

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