DB21T 2219.2-2014 玉米 高粱主要病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)范 第 2 部分 高粱煤紋病抗性鑒定　　

ICS65.020.01B47DB21DB21/T2219.2—2014RulesforevaluationofsorghumandmaizeforresistancetodiseasesPart2:Ruleforevaluationofsorghumforresistancetosootystripe遼寧省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布1DB21/T2219.2—2014本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草?！队衩?、高粱主要病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)范》分為六個部分：——第1部分：高粱靶斑病抗性鑒定；——第2部分：高粱煤紋病抗性鑒定；——第3部分：高粱鐮孢菌莖腐病抗性鑒定；——第4部分：高粱絲黑穗病抗性鑒定；——第5部分：玉米灰斑病抗性鑒定；——第6部分：玉米彎孢菌葉斑病抗性鑒定。本部分為DB21/T2219-2014的第2部分。本標(biāo)準(zhǔn)由遼寧省農(nóng)村經(jīng)濟委員會提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由遼寧省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所起草。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：徐婧、徐秀德、姜鈺、胡蘭、高德學(xué)、王麗娟、劉可杰、張萬民、董懷玉。2DB21/T2219.2—2014《玉米、高粱主要病害抗性鑒定技術(shù)規(guī)范》第2部分：高粱煤紋病抗性鑒定，本部分規(guī)定了高粱抗煤紋病[Ramulisporasorghi(Ellis&Everhart)L.S.Olive&Lefebvre]鑒定技術(shù)中術(shù)語和定義、病原物接種體制備、田間抗性鑒定、病情調(diào)查、抗性評價和鑒定記載方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于粒用高粱[Sorghumbicolor(L.)Moench]品系、品種、雜交種及高粱種質(zhì)資源對高粱煤紋病抗性的田間鑒定及評價。2術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。2.1抗病性鑒定identificationofdiseaseresistance通過適宜技術(shù)鑒別植物對其特定侵染性病害的抵抗水平。2.2抗性評價evaluationofresistance依據(jù)采用的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)判別寄主植物對特定病害反應(yīng)程度和抵抗水平的描述。2.3人工接種artificialinoculation在適宜條件下，通過人工操作將接種體接于植物體適當(dāng)部位并使植物發(fā)病的過程。2.4病情級別diseaseratingscale植物個體或群體發(fā)病程度的量化描述。2.5鑒別寄主differentialhost3DB21/T2219.2—2014用于鑒定和區(qū)分特定病原體的生理小種/致病型/株系的一套帶有不同抗性基因的寄主品種。2.6分離物isolate采用人工方法從植物發(fā)病部位分離獲得的病原體的純培養(yǎng)物。2.7接種體inoculum用于接種以引起病害的病原體或病原體的一部分。2.8接種懸浮液suspension用于接種的含有定量接種體的液體。2.9高粱煤紋病sootystripe由高粱座枝孢菌[Ramulisporasorghi(Ellis&Everhart)L.S.Olive&Lefebvre，異名RamulisporaandropogonisMiura]引起，主要為害高粱葉片和葉鞘，產(chǎn)生長橢圓形、梭形或長梭形大病斑，表生大量的黑色小菌核，病情嚴(yán)重時多個病斑匯合，導(dǎo)致葉片枯死。3病原物接種體制備3.1病原物分離以常規(guī)組織分離法從發(fā)病植株葉片的典型病斑上分離高粱煤紋病病原物。經(jīng)分離純化，形態(tài)學(xué)鑒定為高粱座枝孢菌[Ramulisporasorghi(Ellis&Everhart)L.S.Olive&Lefebvre]，經(jīng)致病性測定，于4℃下保存或30%甘油液體中-40℃低溫長期保存、備用。3.2接種體繁殖與保存接種前進行病原物接種體的繁殖，適宜病菌繁殖的培養(yǎng)基為玉米葉粉碳酸鈣瓊脂（MLPCA）培養(yǎng)基（玉米葉粉15g，CaCO32g，瓊脂15g，加水1L，121℃高壓滅菌30min，冷卻后備用）。將MLPCA培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿（直徑12cm）中制成培養(yǎng)基平板，把高粱煤紋病菌接種在MLPCA培養(yǎng)基平板上，以菌體在培養(yǎng)基表面多點分布為宜，25℃培養(yǎng)7d~10d，用無菌水將培養(yǎng)基上產(chǎn)生的病菌分生孢子洗下，配制成孢子懸浮液（濃度2.0×106個孢子/mL供大量擴繁用。取上述制備的孢子懸浮液1mL，用無4DB21/T2219.2—2014菌三角玻璃棒均勻涂布在MLPCA培養(yǎng)基表面，置于25℃~28℃恒溫培養(yǎng)7d~10d，待培養(yǎng)基上產(chǎn)生大量分生孢子后，用1%Tween20溶液將病菌分生孢子洗下，用無菌水配制成孢子懸浮液（濃度為2.0×104個孢子/mL供田間接種用。如孢子懸浮液不能立即用，可置4℃冰箱內(nèi)保存2d~3d。4田間抗性鑒定4.1抗性鑒定圃設(shè)置鑒定圃應(yīng)具備良好的自然發(fā)病環(huán)境條件和灌溉條件。4.2鑒定設(shè)計或與大田生產(chǎn)相同，小區(qū)保苗25株左右。3次重復(fù)。每50份鑒定材料各設(shè)1組抗、感病對照，抗病對照品種為L401B，感病對照品種為Tx622B。4.3種植要求鑒定材料播種時間與大田生產(chǎn)播種時間相同或適當(dāng)調(diào)整，以使植株接種期和發(fā)病期能夠與適宜的氣候條件（濕度、溫度）相遇，保證鑒定結(jié)果準(zhǔn)確性。土壤肥力水平和栽培管理與大田生產(chǎn)相同。4.4接種4.4.1接種期接種期為植株喇叭口期，即一般中、晚熟品種10片~11片葉期，早熟類型品種9葉期接種。4.4.2接種方法采用注射接種法，將注射器針頭平行地面自植株喇叭口處插入，將病菌孢子懸浮液（濃度：2.0×4個孢子/mL）注入植株喇叭口處心葉中，用量5mL/株。選擇陰天或傍晚進行接種為宜。4.5接種后管理在接種期間若遇干旱天氣，應(yīng)在接種后24h內(nèi)進行田間噴灌或葉面噴霧保濕，滿足病害發(fā)生所需條件。5病情調(diào)查5.1調(diào)查時間接種后40d~50d左右，即高粱籽粒乳熟期進行病害調(diào)查。5DB21/T2219.2—20145.2調(diào)查方法目測調(diào)查鑒定材料的發(fā)病情況，重點調(diào)查接種部位的上方和下方各2片葉，依據(jù)病害癥狀描述，以受害葉片病斑面積占葉片面積百分比劃分病情級別。5.3病情分級病情分級及其對應(yīng)的癥狀描述見表1。表1高粱抗煤紋病鑒定病情級別劃分標(biāo)準(zhǔn)病情級別病害癥狀描述0葉片上無可見病斑1葉片病斑面積占葉面積1%～2%以下3葉片病斑占葉面積的2.1%～10%5葉片病斑占葉面積10.1%～25%7葉片病斑占葉面積25.1%～50%，部分葉片早枯9葉片病斑占葉面積50%以上，病斑連片，多數(shù)葉片枯死6抗性評價6.1鑒定有效性判別當(dāng)感病對照材料達(dá)到其相應(yīng)感病程度（7級或9級該批次抗煤紋病鑒定視為有效。6.2抗性評價標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)鑒定材料的群體發(fā)病程度（病情級別）確定其對煤紋病的抗性水平。以50%以上的發(fā)病個體（葉片）的病情級別作為鑒定材料的群體病情級別值，確定鑒定材料的抗性水平，劃分標(biāo)準(zhǔn)見表2。表2高粱對煤紋病抗性評價標(biāo)準(zhǔn)病情級別抗性評價0免疫Immunity（IM）1高抗Highlyresistant（HR）3抗Resistant（R）5中抗Moderatelyresistant（MR）7感Susceptible（S）9高感Highlysusceptible（HS）6DB21/T2219.2—20147鑒定記載表格高粱抗煤紋病鑒定結(jié)果記載表格見表3。表3年高粱抗煤紋病鑒定結(jié)果記載表品種名稱來源病情級別抗性評價鑒定地點注2:接種病原菌分離物編號注3:接種日期調(diào)查日期鑒定技術(shù)負(fù)責(zé)人（簽字）：7DB21/T2219.2—2014（規(guī)范性附錄）高粱煤紋病菌A.1學(xué)名和形態(tài)描述A.1.1學(xué)名高粱座枝孢菌[Ramulisporasorghi(Ellis&Everhart)L.S.Olive&Lefebvre，異名RamulisporaandropogonisMiura]，屬無性態(tài)真菌座枝孢屬。A.1.2形態(tài)描述病菌分生孢子座由寄主表皮下的子座發(fā)育而成，逐漸從氣孔突出，在葉片兩面著生。分生孢子梗極多，無色，圓柱形，0～1個隔膜，大小10μm～44μm×2μm～3μm。分生孢子單生于分生孢子梗頂端，許多孢子聚集在分生孢子座上，呈膠質(zhì)團。分生孢子線形或鞭形，無色，多數(shù)具1～3個分枝，微彎，頂端略尖，具3～9個隔膜，內(nèi)含物顆粒狀，大小32μm～80μm×2μm～3μm。葉片后期的病斑兩面產(chǎn)生菌核，近球形或半球形，表面粗糙或光滑，黑色，直徑58μm～167μm；每個菌核以菌絲柱經(jīng)氣孔與氣孔下的子座相連結(jié)。菌核萌發(fā)產(chǎn)生分生孢子座和分生孢子。8DB21/T2219.2—2014(規(guī)范性附錄)高粱煤紋病癥狀B.1病名和癥狀描述B.1.1病名高粱煤紋病sorghumsootystripeB.1.2癥狀描述從高粱的苗期到