核酸的理化性質(zhì)(生物化學(xué)課件)

DNA的變性和復(fù)性延遲符號分類分類核酸的變性、復(fù)性與分子雜交1、定義：在某些理化因素作用下，DNA雙鏈解開成兩條單鏈的過程。變性因素：過量酸，堿，加熱，變性試劑如尿素、酰胺以及某些有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮等。（一）核酸的變性考點(diǎn)DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂2、變性后理化性質(zhì)變化OD260增高（增色效應(yīng)）粘度下降沉降速度增加生物學(xué)功能部分或全部喪失增色效應(yīng)

核酸變性后，260nm的紫外吸收值明顯增加，稱增色效應(yīng)?？键c(diǎn)解鏈曲線：如果在連續(xù)加熱DNA的過程中以溫度對A260（A260代表溶液在260nm處的吸光率）值作圖，所得的曲線稱為解鏈曲線。

加熱DNA的稀鹽溶液，達(dá)到一定溫度(80～100℃)后，核酸即發(fā)生熱變性。熱變性是核酸的重要性質(zhì)。解鏈曲線3、DNA的熱變性考點(diǎn)Tm：變性是在一個(gè)相當(dāng)窄的溫度范圍內(nèi)完成，在這一范圍內(nèi)，紫外光吸收值達(dá)到最大值的50%時(shí)的溫度稱為DNA的解鏈溫度，又稱融解溫度(meltingtemperature,Tm)。一般DNA的Tm值在70～85

C之間。DNA的Tm值主要與分子中的G和C的含量有關(guān)。融解溫度Tm

Tm值為PCR反應(yīng)退火溫度的重要參考依據(jù)，退火溫度比Tm值低5～10℃?？键c(diǎn)（二）核酸的復(fù)性

在適當(dāng)條件下，變性DNA的兩條互補(bǔ)鏈可恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象，這一現(xiàn)象稱為復(fù)性。減色效應(yīng)：DNA復(fù)性時(shí)，其溶液OD260降低。熱變性的DNA經(jīng)緩慢冷卻后即可復(fù)性，這一過程稱為退火。考點(diǎn)考點(diǎn)

將不同來源的DNA經(jīng)熱變性后，降溫，使其復(fù)性，在復(fù)性時(shí)，異源DNA單鏈之間具有一定的互補(bǔ)序列，它們就可結(jié)合形成雜交的DNA分子，DNA與互補(bǔ)的RNA之間也能形成雜交分子這一過程稱為核酸分子雜交。（三）核酸的分子雜交

核酸分子雜交的應(yīng)用研究DNA分子中某一種基因的位置測定兩種核酸分子間的序列相似性檢測某些專一序列在待檢樣品中存在與否是基因芯片技術(shù)的基礎(chǔ)點(diǎn)滴積累1.核酸具有紫外吸收特性，其最大吸收峰在260nm。2.Tm值的大小與G、C含量成正比關(guān)系。3.核酸雜交技術(shù)用于定性、定量檢測目標(biāo)DNA或RNA片段，在基因結(jié)構(gòu)分析、基因定位、遺傳病診斷等方面應(yīng)用廣泛。核酸的紫外吸收延遲符號分類分類一、核酸的一般理化性質(zhì)分子量大，兩性電解質(zhì)，通常表現(xiàn)為酸性。DNA為白色纖維狀固體；RNA為白色粉末狀固體。溶解性：均微溶于水；不溶于一般有機(jī)溶劑，在70%乙醇中形成沉淀。粘度：DNA粘度很大，而RNA粘度小得多。DNA對堿穩(wěn)定，而RNA被稀堿水解。二、核酸的紫外吸收性質(zhì)

堿基具有共軛雙鍵，因此具有紫外吸收性質(zhì)，其吸收高峰接近260nm。

DNA紫外吸收