生物化學檢驗技術 課件 第四章 實驗方法的選擇與檢測系統(tǒng)

職業(yè)教育醫(yī)學檢驗技術專業(yè)教學資源庫生物化學檢驗技術第四章實驗方法的選擇與檢測系統(tǒng)BASICCLINICALLABORATORYMEDICINE2目錄

實驗方法的選擇1臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價2檢測系統(tǒng)及量值溯源3第一節(jié)實驗方法的選擇

實驗方法的選擇要結合其目的、要求等，選擇適當?shù)膶嶒灧椒ǎ@是得到準確可靠信息的前提，是檢驗質(zhì)量的重要保障。實驗方法是否適合于臨床，必須進行嚴格的選擇和評價。第一節(jié)實驗方法的選擇實驗方法的分級1.決定性方法3.常規(guī)方法2.參考方法準確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因的方法。準確度與精密度已經(jīng)被充分證實，且經(jīng)公認的權威機構(包括國家主管部門、相關學術團體和國際性組織等)頒布的方法。具有足夠的精密度、準確度、特異性和適當?shù)姆治龇秶?，性能指標符合臨床或其它目的需要的實驗方法，由于其經(jīng)濟實用性，是目前臨床實驗室應用最為廣泛的常規(guī)分析方法。第一節(jié)實驗方法的選擇參考物質(zhì)的分級1.一級參考物質(zhì)（原級參考物、一級校準品、一級標準品）

是一種已經(jīng)確定的穩(wěn)定而均一的雜質(zhì)含量定量的物質(zhì)，其計量學特性位居最高，測量不確定度最小，由決定性方法確定或由高度準確的若干方法確定其數(shù)值。

2.二級參考物質(zhì)（次級參考物、二級校準品或二級標準品）

這類標準品可以是純?nèi)芤?水或有機溶劑的溶液)，也可以是與臨床樣本相似的基質(zhì)中，由參考方法定值或用一級標準品校正而確定其值。3.控制物

控制物也被稱為工作參考物，臨床上常用的控制物有凍干的，還有溶液的，其值以參考方法用適當?shù)男饰飦矶ㄖ?。第一?jié)實驗方法的選擇實驗方法選擇的原則1.實用性（1）微量快速：檢測所需的樣本量少，適合批量成套分析。（2）方法簡便：操作容易開展，試劑種類少，易于自動化分析。（3）費用低廉：無需昂貴試劑和儀器，可行性較強。（4）應用安全：試劑無毒，腐蝕性小，操作人員無需特殊防護措施。2.可靠性

所選方法應具有較高的精密度、準確度、特異性和穩(wěn)定性，有較

大的檢測能力及有較寬的測量范圍，保證檢測結果的準確性能符合方法允許誤差限度的要求。第一節(jié)實驗方法的選擇實驗方法選擇的步驟1.廣泛搜集資料：根據(jù)方法選擇的要求，廣泛、仔細查閱國內(nèi)外已發(fā)表的相關文獻，翻閱相關文件條例：條件允許時還可以通過實驗室之間的交流、現(xiàn)場考察、專業(yè)會議信息，也可參照國外或國內(nèi)室間質(zhì)評和能力驗證的反饋信息。2.選定候選方法：根據(jù)實驗室的設備條件、技術人員業(yè)務素質(zhì)、工作量等具體情況，選擇適合于本實驗室具體條件的方法作為候選方法。3.初步評價試驗：對候選方法應作初步評價試驗。第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價臨床實驗方法的評價

精密度(precision)是指在規(guī)定檢驗條件和同一測量程序下，對同一樣本進行重復多次測量，所得測量值之間隨機誤差的大小，觀察各數(shù)值之間的接近程度。通常用標準差(standarddeviation,S)(或)變異系數(shù)(cefficientofvariation,CV)的大小即不精密度來描述。

基本方法：批內(nèi)重復實驗、批間重復試驗、日內(nèi)重復試驗一、精密度評價第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價臨床實驗方法的評價判斷標準

將計算得到的標準差參比國家行業(yè)標準(WS/T403-2012(臨床生物化學檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量標》)或與美國CLIA'88規(guī)定的總允許誤差進行比較，批內(nèi)不精密度CV應小于CLIA'88允許誤差的1/4,批間不精密CV應小于CLIA'88允許誤差的1/3作為評價標準。第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價臨床實驗方法的評價

正確度（trueness）是大批檢測結果的均值與真值的一致程度；準確度（accuracy）是一次檢測結果與真值的一致程度。正確度通常用偏倚(bias)表示，已經(jīng)消除了不精密度的影響，偏倚又可用系統(tǒng)誤差表示。

基本方法：回收試驗、干擾試驗和方法比對試驗。

判斷標準：比例系統(tǒng)誤差小于國家行業(yè)標準（WST403-2012）或CLIA`88規(guī)定的總允許誤差標準，則該檢測方法或檢測系統(tǒng)正確度性能可接受；否則為不可接受。二、正確度評價第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價臨床實驗方法的評價

是指樣本在不經(jīng)過任何稀釋，濃縮和其他預處理的情況下，直接應用檢測系統(tǒng)，測定出樣本的范圍，也稱為線性范圍，在此范圍內(nèi)，測量值與預測值（真值）呈直線關系。

注意事項：線性范圍評價最理想的樣本是患者低值和高值的新鮮血清標本，實際上這種標本往往不容易收集到,因此,多采用人工方法制備。為使人工制備的樣本與實際工作中患者樣本的基質(zhì)一致，多以混合血清作基質(zhì)。樣本濃度應覆蓋待評價線性范圍，上下限還應包含醫(yī)學決定水平和常見疾病的檢測值。三、可報告范圍評價第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價臨床實驗方法的評價

檢出限也叫檢測限、檢測低限。是指在給定的顯著性水平內(nèi)，能夠檢出被測物的最低濃度。注意事項：1）檢出限是定性檢出，不能進行準確定量。2）有些因子，無法準確的單獨進行檢測，比如PT和APTT的檢測。3）理想的空白樣品或低值樣本要與患者具有相同或相似的基質(zhì).4）實驗過程中，如果LOB和LOD的未知，應建立自己的數(shù)值。四、檢出限的驗證第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價臨床實驗方法的評價

是指某項檢查結果在正常人群中的分布范圍，是解釋檢驗結果、分析檢驗信息的一個基本尺度和依據(jù)。五、參考區(qū)間驗證第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價檢驗項目臨床應用性能評價

通過方法學評價可以得知候選方法的誤差，解決了樣本與檢驗方法的問題。但是一個實驗在臨床上的應用價值，還要與臨床診斷相結合，解決候選方法和臨床受試者的關系，主要包括試驗的診斷敏感度、診斷特異度、預測值、似然比和ROC曲線等指標。

診斷試驗指用于某種疾病診斷的臨床試驗檢查方法。金標準是指當前臨床醫(yī)學界公認的診斷疾病最可靠的方法。第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價檢驗項目臨床應用性能評價

又稱靈敏度、真陽性率（truepositiverate，TPR），指在用“金標準”確診的患者中，應用診斷試驗檢查得到同為某病患者的百分比。靈敏度反映診斷試驗正確識別患病者的能力，靈敏度的理想值是100％。

通常用于：①擬診為嚴重但療效好的疾病，以防漏診；②擬診為有一定治療效果的惡性腫瘤，以便早期確診及時治療；③存在多種可能疾病的診斷，可排除某一診斷；④普查或定期健康體檢，能篩選某一疾病，以防漏診。一、敏感度第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價檢驗項目臨床應用性能評價

又稱特異性、真陰性率（truenegativerate，TNR），指用“金標準”診斷的非某病者中，應用診斷試驗檢查得到同為非某病患者的百分比。特異度反映診斷試驗正確鑒別非患病者的能力，理想值為100％。

常用于：①擬診患有某病的概率較大時，以便確診；②擬診疾病嚴重但療效與預后均不好的疾病，以防誤診，盡早解除患者的壓力；③擬診疾病嚴重且根治方法具有較大損害時，需確診，以免造成患者不必要的損害。二、特異度第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價檢驗項目臨床應用性能評價

也稱預告值或診斷價值，包括陽性預測值和陰性預測值，分別表示診斷試驗結果確定或排除某種疾病存在與否的診斷概率。預測值受流行率的影響，不同流行率的人群中疾病的預測值不同。三、預測值第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價檢驗項目臨床應用性能評價

似然比是某一特定水平的診斷試驗結果在患病者中出現(xiàn)的概率與在未患病者中出現(xiàn)的概率之比，性質(zhì)穩(wěn)定，不因流行率的改變而改變。似然比包括陽性似然比和陰性似然比。

似然比可直接判斷一個診斷試驗的好壞。四、似然比第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價檢驗項目臨床應用性能評價

受試者工作特征曲線（ROC曲線）又稱為感受性曲線，是以真陽性率（敏感度）為縱坐標，假陽性率（1-特異度）為橫坐標，并將相對的點連接起來所形成的曲線。

作用：ROC曲線能很容易地查出任意界限值時對疾病的識別能力；選擇最適的診斷閾值（界限值）；比較兩種或兩種以上不同診斷試驗對診斷同種疾病的可靠性，ROC曲線圍成的面積越大，診斷性能越好。五、ROC曲線第二節(jié)臨床實驗方法的評價和檢驗項目臨床應用性能評價檢驗項目臨床應用性能評價

又稱正確指數(shù)，為靈敏度加上特異度減去1?？梢杂糜趦煞N診斷方法的比較，理想的診斷指數(shù)為100%。

公式為：診斷指數(shù)=（靈敏度＋特異度－1）×100%

診斷指數(shù)表示診斷實驗發(fā)現(xiàn)真正某患病和非患某病的總能力，其值在0-1之間波動，其值愈大表明診斷試驗的真實性越好。六、診斷指數(shù)第三節(jié)檢測系統(tǒng)及量值溯源檢測系統(tǒng)性的定義

檢測系統(tǒng)是指完成一個檢驗項目的測定所涉及的儀器、試劑、校準品、操作程序、設備維護程序等的組合。如果是手工操作，還應包括具體的操作人員。第三節(jié)檢測系統(tǒng)及量值溯源檢測系統(tǒng)性能的驗證與確認（一）檢測系統(tǒng)的性能驗證

如果實驗室采用的分析系統(tǒng)具有溯源性。實驗室需對該檢測系統(tǒng)進行驗證，用驗證實驗的結果來驗證該系統(tǒng)能夠達到預期的水平和取得應有的結果。驗證內(nèi)容至少應包括正確度、精密度和可報告范圍。（二）檢測系統(tǒng)的性能確認

實驗室如果要自建檢測系統(tǒng)或?qū)S商完整的檢測系統(tǒng)中的任何一個組分作出改變,都必須對該系統(tǒng)的性能進行全面確認,用確認實驗的結果來確認該系統(tǒng)的預期用途和應用要求。確認內(nèi)容主要包括正確度、精密度、檢出限、可報告范圍、生物參考區(qū)間等。第三節(jié)檢測系統(tǒng)及量值溯源量值溯源的定義

通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的傳遞鏈