DB21∕T 2268-2014 球孢白僵菌質量控制及防治玉米螟技術規(guī)程　

程I前言 1范圍 12規(guī)范性引用文件 13定義與術語 14工廠化生產步驟與方法 25包裝、貯存、運輸 46產品質量檢測 57防治玉米螟田間使用技術 6本標準按照BT1.1-209給出的規(guī)則起本標準由遼寧省農村經濟委員會提出并歸口。本標準由遼寧省植物保護站負責起草。本標準主要起草人：范垂鵬、樸春樹、馬輝、張萬民、洪曉燕、屈麗莉、張丹、杜冰、梁英。12規(guī)范性引用文件件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。3定義與術語球孢白僵菌球孢白僵菌Baueriabassiaa(Bs)UilI是一種蟲生真菌，屬于真菌界，半知菌亞門(Daterayodtina)絲孢綱(Hphayeete)叢梗孢目(Mrilides)叢梗孢科(Mriliae)白僵菌屬為斜面試管生產的菌種(分生孢子)。24工廠化生產步驟與方法41僵蟲分離42一級斜面菌種的制備馬鈴薯20%、蛋白胨0.5%、蔗糖2%、磷酸二氫鉀0.05%、硫酸鎂0.03%、瓊脂2%。將滅過菌的斜面培養(yǎng)基置于28℃恒溫箱中培養(yǎng)2d,如無雜菌長出，方可供接菌種應用。在25℃±1℃的室內或培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(逐日檢查，如有雜菌者即剔除);培養(yǎng)7d,可作菌種用。43二級液體菌種制備(種子罐)米粉7%、花生枯2%、麥麩2%、蛋白胨0.5%、蔗糖2%。3把按配方配好培養(yǎng)液打開手孔倒入種子罐，并加0.2%消泡劑(花生油或其他食用油),然后上緊手孔。434實罐消毒44三級擴大液菌種制備(發(fā)酵罐)米粉7%、花生枯2%、麥麩2%、蛋白胨0.5%、蔗糖2%。443實罐消毒和管道消毒氣閥門，務必使整條管道暢通，不成死角，調節(jié)進氣閥至管內壓力1.5kg/cm2,保壓30min,然后自前至攪拌速度200rpm,罐溫5℃±1℃,罐內壓力0.5kg/cm2,通氣量1:0.7446液種罐發(fā)酵管理445四級固體開放培養(yǎng)452固體培養(yǎng)基的滅菌壓滅菌壓力為1.1kg/cm2,保壓60min,冷卻后待用；常壓滅菌，455培養(yǎng)室、培養(yǎng)盤支架滅菌457固體培養(yǎng)室的管理培養(yǎng)室溫度控制在18℃~24℃;培養(yǎng)室相對濕度在24h內控制在95%46白僵菌粉干燥處理將培養(yǎng)好的原菌粉自然晾干4d,然后進行控溫干燥，35℃干燥40h或48℃干燥24h,至原菌粉含水率為12%以下。47高孢粉的提取抽提率達10%以上，孢子回收率達85%以上，含孢量達1000×108個/活孢率95%以上。48常規(guī)菌粉的加工5包裝、貯存、運輸551包裝防治對象、使用方法和有效期等)。52貯存、運輸及注意事項應防潮、防曬、防高溫(低于35℃),嚴禁與殺菌劑混用。6產品質量檢測61.1含孢量61.3含水率61.4粉粒細度61.5孢子毒力將孢子粉噴在玉米螟5齡幼蟲上后，溫度控制在20℃~28℃,相對濕度控制在90%以上，5d~7d,玉62產品質量檢驗621樣品抽取加入吐溫-804mL,搗碎2min,再加入300mL再搗碎1min,制成孢子懸浮液，用紐鮑爾(Neubauer)血球計數板(16×25或25×16的計數板)計數，加蓋配套專用的蓋玻片，用吸管吸取滴入，使菌液充滿蓋玻片與載玻片之間的間隙(勿出現(xiàn)氣泡，側溝內不能溢出菌液6DB2VT2X8-20如果用血球計算板計數格為16個中格，每個中格為25個小格，則計算雙線范圍內4個角上的4個中格的100個小格內的總孢子數，計算公式為：將100mL營養(yǎng)液(蛋白胨0.5%、蔗糖2%或2%麥芽浸粉)加入250mL三角瓶，高壓滅菌冷卻后，放待測菌粉0.1g,置于全溫振蕩培養(yǎng)箱在25℃條件下培養(yǎng)24h。取樣制片鏡檢，鏡檢用血球計數板，取5個中格，數出每個中格發(fā)芽(孢子膨脹比原孢子大1倍或萌芽長度大于孢子半徑)與未發(fā)芽孢子數，每個樣品3個重復，取其平均值，允許誤差10%。按下列公式計算活孢率。先將玻皿在120℃干燥箱內烘干，15min后取出用萬分之一的電子天平稱重；再稱5g菌粉置于皿內，電熱恒溫鼓風干燥箱中120℃恒溫烘干，2h后取出；即刻將樣品和玻皿一起稱重。3個重復，取其平均值，允許誤差2%。按下列公式計算含水率：稱取待測不同含孢量菌粉各500g,1000×108個/g孢子粉全部過160篩目；50×108個/g、100×108個/g孢子粉全部過36篩目，即為合格。室內生物測定，從玉米秸稈內取3~4齡健康玉米螟幼蟲50頭，放入室內養(yǎng)蟲籠的新鮮玉米秸稈上，待玉米螟鉆入秸稈后，用含孢量100×108個/g的白僵菌液(稀釋100倍),用手提噴霧器均勻噴在秸稈上，不滴水為準。室溫保持25±1℃,相對濕度95%。逐日觀察記錄玉米螟死蟲數，每個樣品3次重復，同時設空白對照，計算出玉米螟的死亡率和校正死亡率。7防治玉米螟田間使用技術77.1封垛防治技術