DB51T 2852-2021 普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓 微生物學(xué)監(jiān)測(cè)　

DB51Conventionalexperimentalcat—Pathogenicsur四川省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布I 1 1 1 1 2 3 4 5 5 6 8 本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位：四川省農(nóng)村科技發(fā)展中心、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)、四川省藥品檢驗(yàn)1普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓微生物學(xué)監(jiān)測(cè)NY/T541動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法NY/T564豬巴氏桿菌病診斷技術(shù)普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓conventionalexpe4檢測(cè)要求2普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓微生物檢測(cè)項(xiàng)目應(yīng)符合表1▲▲▲▲●●○○○3動(dòng)物編號(hào)外觀檢查采樣采血拭子(鼻、咽、肛門)、新鮮糞便檢測(cè)結(jié)果判定a判定結(jié)論普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓微生物檢測(cè)方法應(yīng)符合表2的要求。表2普通級(jí)實(shí)驗(yàn)用貓微生物檢測(cè)方法適用范圍抗體檢測(cè)核酸檢測(cè)抗體檢測(cè)核酸檢測(cè)4注：貓泛白細(xì)胞減少癥病毒、貓皰疹病毒I型、貓杯狀病毒、貓狂犬病病毒為免疫要求項(xiàng)目，應(yīng)按照本標(biāo)準(zhǔn)中“抗體檢測(cè)”要求，檢測(cè)70%以上的抗體合格率，在發(fā)現(xiàn)疑似癥狀時(shí)應(yīng)使用本標(biāo)準(zhǔn)中“核酸檢測(cè)”要求，判定陰性7.2.2.1可按微生物、寄生蟲采樣要59檢測(cè)結(jié)論6上游引物序列（5′-3′）：CTGCTACT）：A.3對(duì)照設(shè)立Taq酶（5U/μL）0.5μL，模板DN94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸1A.5.2產(chǎn)物參考序列CGTCTACTCAGCCACCAACTAAAGTTTATAATAATGATTTAACTGCATCATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATACTATTTACTCCAGCAGCTATGAGATCTGAGACATTGGGTTTTTATCCATGGAAACCAACCATACCAACTCCATGGAGATATTATTTTCAATGGGATAGAACATTAATACCATCTCATACTGGAACTAGTGGCACACCAACAAATGTATATCATGGTACAGATCCAGATGATGTTCATATACTATTGAAAATTCTGTACCAGTACACTTACTAAGAACAGGTGATGAATTTGCTACAGGAACATTTTTTTTTGATTGTAAACTAGACTAACACATACATGGCAAACAAATAGAGCATTGGGCTTAC7A.6結(jié)果判定判定貓泛白細(xì)胞減少癥病毒陽性；未出現(xiàn)401bp目8）：）：Taq酶（5U/μL）0.5μL，模板DN94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s，54℃退火30s，72℃延伸1min，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸GCGGATTACACCACCACTCTCGATTGGATTGTATTCGGCGAGCTTGGTAATATTAGCAGCCAGAACAGAAATGTTACTCGTATCTGCGGGGGTAAACTAGTAACTCCCAAAATTCTCAGACCGCGCTGCGCGATAAATGCCAATATGGGTATTAGAGTGAGCTTCTCCCCCCCTGGTGGTAGAATCTTGGTTATTAAACCCACAGAATCTGTTAATTGTTTCAAACCCTCACGACGTTGAATGTCTTTACTAGTCATATTTTTTGAAAAACGACACGTTTTCAGCTCAATTAGAAAACATATACCACCCCCTTCTCCCTCAAATTGTATAGTACATACCAGGTCGGCGACGACCCAAGTTAACCTCACATGCTAGGTACACGCCCTTAGC9判定貓皰疹病毒I型陽性；未出現(xiàn)409bp目的片段時(shí)，判定貓皰疹按照病毒RNA提取試劑盒操作方法進(jìn)行，提取的RNA于）：）：使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)所提RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，55℃退火40s，72℃延伸1min，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸AACCTGCGCTAACGTGCTTAAATACTATGATTGGGATCCCCACATCAGATTGGTTATCAACCCCAATAAATTTCTTCCTATTGGTTTCTGTGATAATCCTCTAATGTGTTGCTACCCAGAATTGCTCCCAGAATTCGGAACTGTGTGGGATTGTGATCAATCCCCACTGCCTACCTGGAGTCAATCCTTGGTGATGATGAATGGGCTTCAACTTACGATGCCATTGACCCTGTTGTTCCACCAATGCACTGGGCAGGCAAGATCTTCCAACCTCACCCTGGAGTTCTGATGCATTTTCTAATAAATGAAGTTGCAAAGGGCTGGGATCCAAGTTTGCTTCCGTTTGGAAGCAGATGACGGATCCATAACCACACCTGAACAGGGTACTGCGGTTGGTGGCGTCATTGCCCAACCCAGCGCTCGTCGGCAGCTGCAGACATGGCATCTGGTAAGAGTGTTGACTCTGAGTGGGAGGAATTCTTTTCCTTCCATACTAGTGTCAACTGGCAACTGAAACACAAGGAAAGATTCTGTTCAAACAGTCACTGGGACCCCTTCTCAACCCTTACCTTGAACACTTATCTAAACTCGCTTGGTCAGGCTCTATAGATGTTAGGTTTTCTATCTCTGGTTCTGGTGTCTTTGGGGGAAAACTAGCCGCAATAGTTGTCCCACTGTCGATCCTGTCCAAAGCACTTCCATGCTACAATACCCTCATGTGTTGTTTGATGCTCGACAGGTTGAACCAGTGATCTTTTCCTGATCTGAGGAATTCACTATATCACCTCATATCTGATACTGATACTACATCTCTGGTAATAATGGTTTACAATGATCTTATTATATGCAAATGAAGCTAACTCTTCTGGGTGTATTGTCA）：）：）：）：使用反轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)所提RNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，95℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸295℃預(yù)變性5min；95℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，30個(gè)循環(huán)；72℃延伸2CAAGATGTGCGCTAACTGGAGTACCATCCCGAACTTTAGATTCTTAGCTGGAACCTACGACATGTTTTTCTCTCGGATTGTTGTACTCAGCTATAAGAGTGGGCACAGTTGTCACTGCTTATGAAGACTGCTCAGGGTTGGTATCGTTCACAGGGTTCATAAAGCAAATCTCACCGCGAGAGAGGCAATCCTATATTTCTTCCACAAGAACTTTGAGGAAGAAATAAGAA。）：）：）：）：95℃預(yù)變性5min；95℃變性45s，95℃預(yù)變性5min；95℃變性45s，GCTCCCCAGTTGACCAGAGTTCGACCTTCCGCCTCATTTAAACTAACCAATCCCCATGCCTCTCGCTTCTGTACGCGCGCTGCTATAAAACGAGCCATCAGCCCCCAACGGGCGCGCAAGTCTTTGCTGAGACTTGACCGCCCCGGGTACCCGTGTACGAATAAACTGCCGATTGCATCTGACTCGTGGTCTCGGTGTTCCGTGGGCGCGGGGCCTCATCGCCGAGGAAGACCCAGTTCGGGGGTCTTTCGGGGCTCGTCCGGGATAGAGACCCCCAACCCCCGGGACCACCGACCCACCATCAGGAGGTAAGCTGGCCGGCGACCATATCTGTTTGTATAAGTGTCTCTGTCAATTGATCTGATTTTGGCGGTGGGATCGAAGGAGCTGACGAGCTCGTACTTCGCCCCCGCAACCCTGACGTTCCACGGGTGTCTGATGTCTGGAGCCTCTAGTGGGACAGCCATTGGGGCTCATCTGTTTGGGGTCTCACCTGAATACAGGTGATCGGAGACGAGGGAGCCGGACCCTCAAAGTCTCTTTCTGAGGTTTCATTTTCGGTTTGGTACC空白對(duì)照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙空白對(duì)照：在擴(kuò)增反應(yīng)階段設(shè)置。以滅菌雙Taq酶（5U/μL）0.5μL，模板陽性對(duì)照出現(xiàn)146bp、290bp和390bp目的片段，陰性）：）：GTGATGCTATCATGACTAGGTGTCTTGCTATATATGATTGTTTTGTCAAACGTGTAGATTGGTCCATTGTGTACCCTTTTAAATGAAGAGAAGATCAATAAAGCTGGTCGCATTGTACAATCACATGTCATGAGAGCTGCTCTTAAAGTTTTCAACCCTGCTGCAATTCACGATGTTGGTAATCCAAAAGGTATTCGTTGTGCTGCGACACCCATACCGTGGTTTTGTTA