免疫分析技術(shù)生化分析優(yōu)秀課件

免疫分析技術(shù)生化分析第一頁，共四十一頁，2022年，8月28日

脊髓灰質(zhì)炎Polio

狂犬病Rabies

風(fēng)疹Rubella肝炎HepatitisA

肝炎HepatitisB

流感Influenza白喉diphtheria

天花Smallpoxvirus輪狀病毒RotavirusPertussis百日咳第二頁，共四十一頁，2022年，8月28日Comparisonofmaximumandcurrentmorbidityforvaccine-preventablediseases

DiseaseMaximumcasesYear1992Percentagechange白喉Diphtheria麻疹Measles腮腺炎Mumps百日咳pertussis脊髓灰質(zhì)炎

Polio(paralytic)風(fēng)疹RubellaCRS破傷風(fēng)Tetanus乙型流感HeamophilusinfluenzaetypeB乙型肝炎HepatitisB206,939694,134152,209265,26921,26957,68620,0001,56020,00026,6111921194119681934195219691964,6519231984198542,2372,5724,083416011451,41216,12699.9999.7598.3198.4699.9899.7299.9597.1292.9439.40第三頁，共四十一頁，2022年，8月28日疫苗的原理疫苗是將病原微生物及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)過人工減毒、滅活或利用基因工程等方法制成的用于預(yù)防傳染病的自動免疫制劑。疫苗保留了病原菌刺激動物體免疫系統(tǒng)的特性。當(dāng)動物體接觸到這種不具傷害力的病原菌后，免疫系統(tǒng)便會產(chǎn)生一定的保護(hù)物質(zhì)，如免疫激素、活性生理物質(zhì)、特殊抗體等；當(dāng)動物再次接觸到這種病原菌時，動物體的免疫系統(tǒng)便會依循其原有的記憶，制造更多的保護(hù)物質(zhì)來阻止病原菌的傷害。

免疫分析法是利用抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)檢測各種物質(zhì)（藥物、激素、蛋白質(zhì)、微生物等）的分析方法。第四頁，共四十一頁，2022年，8月28日

第一節(jié)抗原第五頁，共四十一頁，2022年，8月28日抗原(Antigen，Ag)：能夠刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，并且能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物(抗體或免疫效應(yīng)細(xì)胞)特異性結(jié)合的物質(zhì)。第六頁，共四十一頁，2022年，8月28日抗原的兩種基本特性：（1）免疫原性(immunogenecity)：指抗原分子能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答(產(chǎn)生特異性抗體及免疫效應(yīng)細(xì)胞)的性質(zhì)。

（2）抗原性(antigenicity，又稱免疫反應(yīng)性)：指抗原分子與免疫應(yīng)答產(chǎn)物(抗體或免疫效應(yīng)細(xì)胞)發(fā)生特異性結(jié)合的性質(zhì)。第七頁，共四十一頁，2022年，8月28日

完全抗原（completeantigen)：具有免疫原性和抗原性的物質(zhì)，如：異種動物的血清、細(xì)菌、病毒等。半抗原（hapten，又稱不完全抗原incompleteantigen）：無免疫原性，只有抗原性的物質(zhì)，如：多為某些簡單的小分子物質(zhì)，如青霉素、磺胺。載體（carrier）：賦予半抗原以免疫原性的蛋白質(zhì)。半抗原+蛋白質(zhì)完全抗原第八頁，共四十一頁，2022年，8月28日半抗原

+載體抗體BT完全抗原BBBT在青霉素進(jìn)入體內(nèi)后，如果其降解產(chǎn)物和組織蛋白結(jié)合，就獲得了免疫原性，并刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗青霉素抗體。當(dāng)青霉素再次注射人體內(nèi)時，抗青霉素抗體立即與青霉素結(jié)合，產(chǎn)生病理性免疫反應(yīng)，出現(xiàn)皮疹或過敏性休克，甚至危及生命。

第九頁，共四十一頁，2022年，8月28日第一部分抗原的類型一．根據(jù)抗原性質(zhì)：完全抗原、半抗原第十頁，共四十一頁，2022年，8月28日

二．根據(jù)與人體的親緣關(guān)系：

1.異種抗原（xenogenicAg）：來源于不同物種的抗原，如微生物、動物蛋白對于人是異種抗原；

2.同種異型抗原（allogenicAg）：來源于同一物種的不同個體的抗原，如來自于另一個個體的血型抗原，主要組織相容性抗原等；

3.自身抗原（autoantigen）：來自于自身的抗原，如眼晶狀體蛋白等。第十一頁，共四十一頁，2022年，8月28日

三．根據(jù)抗原的合成方式：天然抗原：異己抗原自身抗原人工抗原：人工結(jié)合抗原人工合成抗原基因工程抗原第十二頁，共四十一頁，2022年，8月28日第二部分醫(yī)學(xué)上重要的抗原一.病原微生物：

1.細(xì)菌性抗原：細(xì)胞壁：蛋白質(zhì)、脂多糖等。鞭毛：蛋白質(zhì)夾膜：多糖

2.病毒性抗原：衣殼：蛋白包膜：糖蛋白

3.其它：螺旋體、真菌等。第十三頁，共四十一頁，2022年，8月28日痢疾桿菌

霍亂弧菌傷寒桿菌鏈球菌大腸桿菌第十四頁，共四十一頁，2022年，8月28日狂犬病病毒腺病毒口蹄疫病毒病毒（viruses）流感病毒第十五頁，共四十一頁，2022年，8月28日真菌白色念珠菌

(1,000Xoil)瘧原蟲第十六頁，共四十一頁，2022年，8月28日二．細(xì)菌的外毒素與類毒素

外毒素：某些病原菌生長繁殖過程中分泌到菌體外的一種代謝產(chǎn)物，為次級代謝產(chǎn)物。其主要成分為可溶性蛋白質(zhì)。

類毒素：經(jīng)0.3%～0.4%甲醛處理過的失去毒性保留免疫原性的外毒素。仍然具有刺激人體產(chǎn)生抗毒素，以起到機體從此對某疾病具有自動免疫的作用。它們廣泛地應(yīng)用于預(yù)防某些傳染病、注射到動物體內(nèi)用于制備抗毒素。第十七頁，共四十一頁，2022年，8月28日

三．異種動物血清異種動物的血清蛋白對人具有免疫原性。如：馬的血清進(jìn)入人的體內(nèi)，馬血清中的許多蛋白質(zhì)就成為人的抗原物質(zhì)。

第十八頁，共四十一頁，2022年，8月28日四．血型抗原：

——已經(jīng)發(fā)現(xiàn)并為國際輸血協(xié)會承認(rèn)的血型系統(tǒng)有30種

1.ABO血型系統(tǒng)：血型抗原（RBC）抗體（血清）

———————————————————A型A抗原抗B抗體

B型B抗原抗A抗體

AB型AB抗原無抗A、抗B抗體

O型無A、B抗原抗A、抗B抗體

———————————————————第十九頁，共四十一頁，2022年，8月28日2.Rh血型系統(tǒng)：

Rh是恒河猴（RhesusMacacus）外文名稱的頭兩個字母。蘭德斯坦納等科學(xué)家在1940年做動物實驗時，發(fā)現(xiàn)恒河猴和多數(shù)人體內(nèi)的紅細(xì)胞上存在Rh血型的抗原物質(zhì)，故而命名的。凡是人體血液紅細(xì)胞上有Rh抗原（又稱D抗原）的，稱為Rh陽性。

第二十頁，共四十一頁，2022年，8月28日

實際意義新生兒溶血癥孕婦(Rh-)→胎兒(Rh+)

↓↓抗Rh抗體+新生兒RBC(Rh+)↓

溶血反應(yīng)

第二十一頁，共四十一頁，2022年，8月28日

第二節(jié)抗體第二十二頁，共四十一頁，2022年，8月28日抗體（antibody,Ab）:

機體免疫細(xì)胞被抗原激活后，由分化成熟的B細(xì)胞分泌的一類能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）:

具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體分子相似的球蛋白。

所有抗體都是Ig，但并非所有Ig都具抗體活性。第二十三頁，共四十一頁，2022年，8月28日血清療法：一種利用被動免疫的療法。將已被免疫的動物血清（抗血清）注射到相應(yīng)疾病的患者身上以達(dá)到治療的目的。這種血清稱為治療血清?；謴?fù)期病人的血清也可治療其他病人。

第二十四頁，共四十一頁，2022年，8月28日第二十五頁，共四十一頁，2022年，8月28日第一部分免疫球蛋白的結(jié)構(gòu)

第二十六頁，共四十一頁，2022年，8月28日N端C端可變區(qū)恒定區(qū)VHVLCH1CH2CH3CL鉸鏈區(qū)V區(qū)：和抗原特異性結(jié)合的關(guān)鍵部位C區(qū)：決定抗體分子的異種抗原性第二十七頁，共四十一頁，2022年，8月28日第二部分單克隆抗體和基因工程抗體抗原決定簇：決定抗原性的特殊化學(xué)基團(tuán)。大多存在于抗原物質(zhì)的表面，有些存在于抗原物質(zhì)的內(nèi)部，須經(jīng)酶或其他方式處理后才暴露出來。一個天然抗原物質(zhì)可有多種和多個決定簇。如白喉類毒素有8個抗原決定簇，流感病毒有40多個抗原決定簇。

第二十八頁，共四十一頁，2022年，8月28日一.多克隆抗體病原微生物含有多種抗原決定簇的抗原物質(zhì)，此這些抗體制劑也是多種抗體的混合物，故稱多克隆抗體，即針對多種抗原決定簇的抗體。易出現(xiàn)非特異性交叉反應(yīng)。第二十九頁，共四十一頁，2022年，8月28日二、單克隆抗體單克隆抗體是針對一個抗原決定簇的抗體，又是單一的B淋巴細(xì)胞克隆產(chǎn)生的。所有制備抗體的細(xì)胞都是同一個細(xì)胞的拷貝，因此其產(chǎn)生的抗體完全相同。第三十頁，共四十一頁，2022年，8月28日雜交細(xì)胞設(shè)計方案：

一個B淋巴細(xì)胞---只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞---能無限增殖第三十一頁，共四十一頁，2022年，8月28日單克隆抗體是大規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)的產(chǎn)物，而不是直接來自于動物血清。制備單克隆抗體的過程涉及到細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合等多種步驟。第三十二頁，共四十一頁，2022年，8月28日雜交瘤技術(shù)產(chǎn)生的3個技術(shù)關(guān)鍵1.B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的特性：

B淋巴細(xì)胞（Blymphocytes）：

接受抗原刺激后，能分泌針對該抗原的特異性抗體，在體液免疫中具有重要功能。

B淋巴細(xì)胞本身是一種終末分化細(xì)胞，通常不再進(jìn)行細(xì)胞分裂，存活一段時間后便會死亡---短命細(xì)胞第三十三頁，共四十一頁，2022年，8月28日骨髓瘤細(xì)胞（myelomacells）：惡性增殖的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，只要營養(yǎng)條件適合可永遠(yuǎn)分裂和存活---長命細(xì)胞。

經(jīng)篩選與馴化，現(xiàn)已建立多種骨髓瘤細(xì)胞株---沒有抗體分泌物。第三十四頁，共四十一頁，2022年，8月28日2.細(xì)胞融合技術(shù)：第三十五頁，共四十一頁，2022年，8月28日3.雜交瘤細(xì)胞的篩選：不能合成

DNA死亡不能合成

DNA死亡第三十六頁，共四十一頁，2022年，8月28日單克隆抗體的應(yīng)用1．檢驗醫(yī)學(xué)診斷試劑

作為檢驗醫(yī)學(xué)實驗室的診斷試劑，單克隆抗體有著特異性強、純度高、均一性好等優(yōu)點，并且很大程度上促進(jìn)了商品化試劑盒的發(fā)展。目前，應(yīng)用單克隆抗體制作的商品化試劑盒廣泛應(yīng)用于：病原微生物抗原、抗體的檢測腫瘤抗原的檢測免疫細(xì)胞及其亞群的的檢測激素測定細(xì)胞因子的測定

第三十七頁，共四十一頁，2022年，8月28日1)乙肝表面抗原檢測試紙條乙型肝炎是一種廣泛的傳染病。據(jù)報道,全世界感染該病的人在兩億以上,我國乙肝表面抗原陽性者占人口的10%左右。該測試