淋巴細(xì)胞功能檢測(cè)

免疫學(xué)檢測(cè)的臨床應(yīng)用（回顧）認(rèn)識(shí)、闡明相關(guān)疾病發(fā)病機(jī)制診斷、輔助診斷相關(guān)疾病免疫功能檢測(cè)與監(jiān)視實(shí)驗(yàn)四設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)：常見(jiàn)細(xì)胞免疫檢測(cè)II【實(shí)驗(yàn)任務(wù)】

市場(chǎng)上有一廣告產(chǎn)品，據(jù)說(shuō)有免疫增強(qiáng)作用，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)方案證實(shí)之（從影響淋巴細(xì)胞功能、T淋巴細(xì)胞增殖的角度考慮）?！灸康囊蟆?/p>

一、學(xué)會(huì)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，從淋巴細(xì)胞功能、T淋巴細(xì)胞增殖的角度證實(shí)某產(chǎn)品有免疫增強(qiáng)作用。二、掌握淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)的原理及臨床實(shí)用價(jià)值。一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（如balb/c小鼠）二、注射器、針頭、10ml離心管、滴管、試管、玻片等常規(guī)實(shí)驗(yàn)儀器。三、PHA、瑞氏姬姆薩染液，肝素，Hanks液等常規(guī)實(shí)驗(yàn)試劑?！緦?shí)驗(yàn)材料】【作業(yè)】請(qǐng)將你們小組的設(shè)計(jì)方案與技術(shù)路線在討論完善后記錄在實(shí)驗(yàn)報(bào)告本，并將可行的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容在實(shí)驗(yàn)課中實(shí)施。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組處理因素干預(yù)免疫功能檢測(cè)指標(biāo)確立對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組機(jī)體免疫功能檢測(cè)一、討論

（一）設(shè)計(jì)性方案要點(diǎn)實(shí)驗(yàn)方案（二）淋巴細(xì)胞功能檢測(cè)的主要內(nèi)容T細(xì)胞功能測(cè)定B細(xì)胞功能測(cè)定單核巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等功能測(cè)定細(xì)胞因子的檢測(cè)CD分子、表面受體、粘附分子的檢測(cè)1、T細(xì)胞功能測(cè)定（1）T細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖試驗(yàn)

①

H3-TdR摻入

②細(xì)胞能量代謝測(cè)定（MTT檢測(cè)法）

③形態(tài)學(xué)計(jì)數(shù)（2）遲發(fā)性超敏反應(yīng)的檢測(cè)（3）T細(xì)胞分泌功能的檢測(cè)（4）流式細(xì)胞儀對(duì)T細(xì)胞功能的檢測(cè)（5）T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)T細(xì)胞轉(zhuǎn)化、增殖試驗(yàn):H3-TdR摻入T細(xì)胞毒性試驗(yàn)TPHA母測(cè)轉(zhuǎn)化率ConA增殖加H3-TdRTTT測(cè)摻入量CTL+靶-51Cr靶細(xì)胞溶解，

51Cr釋放測(cè)放射活性酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（ELISPOT）淋巴細(xì)胞功能的體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)核菌素反應(yīng)B2、B細(xì)胞功能測(cè)定溶血空斑試驗(yàn)B漿+溫育1-3h綿羊紅細(xì)胞補(bǔ)體有絲分裂原漿B+溶血空斑實(shí)驗(yàn)酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)試驗(yàn)（ELISPOT）①

穩(wěn)定、特異，且抗原用量少；②可同時(shí)檢測(cè)不同抗原誘導(dǎo)的抗體分泌，并可定量檢測(cè)③可檢測(cè)組織切片中分泌抗體的單個(gè)細(xì)胞3、細(xì)胞因子的檢測(cè)（1）免疫學(xué)檢測(cè)法（2）生物學(xué)活性檢測(cè)法

（3）分子生物學(xué)測(cè)定法

細(xì)胞因子的檢測(cè)有助于了解該細(xì)胞因子在免疫調(diào)節(jié)中的作用，以及鑒定分離提純后的淋巴細(xì)胞的功能。以細(xì)胞因子為抗原的檢測(cè)法測(cè)定細(xì)胞因子相關(guān)的生物學(xué)活性用基因的技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子含量以及預(yù)測(cè)合成量4、CKR、CD、AM、表面受體的檢測(cè)

檢測(cè)方法目前大多采用間接熒光、FCM檢查其在細(xì)胞膜上的分布和測(cè)定某些樣品中的含量。上述分子除表達(dá)于細(xì)胞膜表面外，還以可溶性形式存在于體液中。二、示教：淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化測(cè)定淋巴細(xì)胞功能的一種方法。人類(lèi)T、B淋巴細(xì)胞表面有絲裂原受體，T、B淋巴細(xì)胞能分別與不同的絲裂原結(jié)合，發(fā)生淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化增殖反應(yīng)。根據(jù)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率，可以間接判斷機(jī)體免疫狀態(tài)。三、操作：淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（一）原理：T淋巴細(xì)胞受到特異性抗原或非特異絲裂原（PHA、PWM和ConA）刺激均能使細(xì)胞發(fā)生形態(tài)改變而轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可反映人體細(xì)胞免疫功能水平，常被作為細(xì)胞免疫功能指標(biāo)之一。計(jì)算200個(gè)淋巴細(xì)胞中轉(zhuǎn)化為母細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)（包括過(guò)渡型、母細(xì)胞和分裂相淋巴細(xì)胞。細(xì)胞免疫缺陷時(shí)，患惡性腫瘤或某些其他疾病時(shí)，轉(zhuǎn)化率明顯降低。淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化標(biāo)準(zhǔn)方法：提前三天給小鼠注射PHA0.5ml，6mg/kg，一天一次，連續(xù)三天。剪斷小鼠尾巴，向潔凈載玻片上滴一滴血，用另一塊潔凈的推片以450角推成血膜（頭、體、尾分明）。干燥后，瑞氏姬姆薩染色：滴3-5滴A液于載玻片1min，6-10滴B液,3min后充分水洗。鏡檢，計(jì)算淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化率：油鏡下觀察玻片的頭、體、尾三段。每段各一縱列（以減少推片中細(xì)胞分布不均的誤差）。Howtomakebloodsmears血涂片質(zhì)量評(píng)價(jià)頭體尾

分明厚

薄

均

勻長(zhǎng)

度

適

中計(jì)算一般認(rèn)為轉(zhuǎn)化率的正常值為60～70%推片結(jié)果與結(jié)果分析TPHA母ConA