裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)第一頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五裸鼠無(wú)胸腺裸鼠（NudeMouse，簡(jiǎn)稱(chēng)裸鼠）。目前已成為醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究領(lǐng)域中不可缺少的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。特別是在腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、藥品與生物制品的安全性評(píng)價(jià)及有效藥品的篩選等實(shí)驗(yàn)方面，它有著特殊的價(jià)值。裸鼠（純合子nu/nu突變鼠）主要表現(xiàn)為無(wú)毛（但可看到一種細(xì)毛組織學(xué)證明有被毛濾泡）以及缺乏正常胸腺。雜合子小鼠（nn/+）各方面表現(xiàn)都正常。小鼠中有若干突變基因，它可產(chǎn)生一種為無(wú)毛的表現(xiàn)型（phenotype），例如無(wú)胸腺裸鼠（Nude）、裸鼠（Naked）、無(wú)毛鼠（Hairless）、無(wú)鼻毛鼠（Rhinol），不要把這些突變鼠基因相互混淆。裸鼠的唯一特性是胸腺缺陷表現(xiàn)型，因此，不能將“裸鼠”與“無(wú)毛鼠”兩詞交換使用。第二頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五裸鼠裸小鼠裸大鼠第三頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五裸小鼠(基因符號(hào)nu):無(wú)毛(hairless),無(wú)胸腺(athymus).幼鼠(3－4周齡),成年鼠(6－8周齡。抵抗力差，易在SPF環(huán)境下可生存，所用的籠具、墊料、飼料、飲水患病毒性肝炎和肺炎，因而飼養(yǎng)和繁殖要求條件比較嚴(yán)格，等都要求經(jīng)過(guò)嚴(yán)密滅菌消毒并采用隔離器飼養(yǎng)，以保證長(zhǎng)期存活并進(jìn)行繁殖。裸大鼠(基因符號(hào)rnu)：一般特征似裸小鼠，但軀干部仍有稀少被毛并非象裸小鼠那樣完全無(wú)毛，頭部及四肢毛更多。裸大鼠易患呼吸道疾病。形態(tài)特征第四頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五雖然說(shuō)以裸大鼠代替裸小鼠，具有移植腫瘤大，取血量多，可行某些外科小手術(shù)等優(yōu)點(diǎn)。因此比裸小鼠有一定優(yōu)越性，其缺點(diǎn)是維持經(jīng)費(fèi)比裸SPF小鼠更高，另外裸大鼠目前不怎么流行。所以我們實(shí)驗(yàn)室常用的是BALB/c-nu裸小鼠。隨著裸小鼠年齡增長(zhǎng)或有關(guān)因素的影響(如病毒感染),裸鼠體內(nèi)正常T細(xì)胞會(huì)增加，故接種腫瘤實(shí)驗(yàn)一般采用4--6周齡的裸鼠。裸鼠的選擇第五頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五1.人體原發(fā)癌我們實(shí)驗(yàn)室均采用細(xì)胞株作為材料，這個(gè)方式是

性?xún)r(jià)比最高的，操作簡(jiǎn)便，材料安全且容易獲取。結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、腎癌、宮頸癌、軟組織肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、獲得了一定百分比（35.7%）的良好生長(zhǎng)，并可傳代。裸鼠成瘤2.建株的人體腫瘤組織培養(yǎng)細(xì)胞裸鼠成瘤方式理論上建株的腫瘤細(xì)胞均可以第六頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五細(xì)胞的選擇大致有一下幾個(gè)方面：1.國(guó)際公認(rèn)度較高的細(xì)胞株。2.根據(jù)體內(nèi)生長(zhǎng)情況來(lái)確定，很多細(xì)胞株，在文獻(xiàn)中有很高的出鏡率，但是實(shí)際上，基本都是從體外開(kāi)始有名。

細(xì)胞株的選擇當(dāng)然，我們對(duì)于細(xì)胞株的選擇是沒(méi)有選擇的！第七頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五常規(guī)較容易成瘤的細(xì)胞：Hep-G2（肝癌，Hep2（喉癌），NCI-H460(大細(xì)胞肺)，A431(表皮癌),SK-OV-3（卵巢癌），MCF-7（乳腺癌），A375/B16-F10（人黑色素瘤細(xì)胞）?？梢猿闪龅潜容^慢的細(xì)胞：CNE（鼻咽癌），A549（肺癌），SPC-A-1（肺腺癌）。HT-29（結(jié)腸癌），EL-7402（肝癌）。一些比較有爭(zhēng)議的細(xì)胞：Hela（宮頸癌），HCT（人回盲腸癌細(xì)胞/人結(jié)直腸癌腺癌細(xì)胞）。常見(jiàn)的細(xì)胞株第八頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五1、慢病毒保存理論上慢病毒可在-80℃保存6個(gè)月，在4℃可保存3天。因?yàn)槁《久看蝺鋈跁?huì)降低病毒滴度10%，因此慢病毒實(shí)驗(yàn)最好是提前分裝。2、MOI值細(xì)胞感染達(dá)到80%以上所需MOI值，這個(gè)大部分細(xì)胞是可以查到，不過(guò)因?yàn)橐驗(yàn)槁《靖腥炯?xì)胞是很靈活的，因此MOI值的選擇也是很有差異性的，具體情況具體分析。細(xì)胞慢病毒感染第九頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五附：慢病毒使用量的相關(guān)計(jì)算公式MOI=（慢病毒使用的體積*慢病毒滴度）/

需要感染的細(xì)胞數(shù)其中：慢病毒使用體積單位為ml

慢病毒滴度單位為T(mén)U/ml例如：Hep-G2細(xì)胞，MOI=20，慢病毒滴度=1.0*108TU/ml,24孔板的細(xì)胞總數(shù)：2.0*105個(gè)。因此：感染24孔板中1孔的HEP-G2細(xì)胞所需要的慢病毒體積為：(20*2.0*105)/1.0*108=0.04ml細(xì)胞慢病毒感染第十頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五附：一些細(xì)胞的慢病毒感染效果圖K562A549細(xì)胞慢病毒感染第十一頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五細(xì)胞培養(yǎng)：細(xì)胞的狀態(tài)以及數(shù)量是裸鼠皮下成瘤很關(guān)鍵的一步。細(xì)胞狀態(tài)良好，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，接種很容易形成腫瘤，反之則會(huì)導(dǎo)致失敗。即浪費(fèi)了細(xì)胞，又錯(cuò)過(guò)了裸鼠成瘤的最佳時(shí)期裸鼠成瘤-+第十二頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五裸鼠成瘤細(xì)胞接種：接種的細(xì)胞量：無(wú)血清培養(yǎng)基重懸成1*107個(gè)/ml的懸液，0.2ml/只/針。也就是一只裸鼠最少要用200W個(gè)細(xì)胞，有的細(xì)胞需求可能會(huì)達(dá)到1000W個(gè)/只。接種的部位大部分頸部和腋下皮下。血豐富，能提供大量的營(yíng)養(yǎng)。當(dāng)然，這個(gè)也是可以調(diào)整的。另外裸鼠理論上是1個(gè)裸鼠只能接種1針，形成1個(gè)腫瘤。因?yàn)?個(gè)或者以上的腫瘤是會(huì)相互影響的。第十三頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五附：我們實(shí)驗(yàn)一些裸鼠成瘤的成功案例Hep-G2細(xì)胞A375細(xì)胞裸鼠成瘤第十四頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五裸鼠皮下成瘤后，除了一些常規(guī)的檢測(cè)外我們一般可進(jìn)行以下一些實(shí)驗(yàn)操作：裸鼠活體熒光一些其他情況下的裸鼠成瘤第十五頁(yè)，共十七頁(yè)，編輯于2023年，星期五1、裸鼠的品系