【高考解碼】2021屆高三生物二輪復習專題-現(xiàn)代生物科技-基因工程、細胞工程

基因工程、細胞工程一、基因工程1．基本工具：(1)工具酶。①限制性核酸內切酶(又稱限制酶)：切割目的基因和載體(斷開磷酸二酯鍵)。②DNA連接酶：縫合DNA片段斷口處外側鏈(形成磷酸二酯鍵)。(2)載體應具備的條件。①能在宿主細胞內穩(wěn)定存在并復制：便于目的基因的表達。②有一至多個限制酶切割位點：便于外源DNA分子的插入。③具有標記基因：鑒定與選擇重組DNA分子。2．基本操作程序：(1)目的基因的獵取。①基因文庫獵取，②PCR技術擴增，③化學方法直接人工合成。(2)基因表達載體的構建。①啟動子：啟動轉錄。②目的基因：把握需要的特定性狀。③終止子：終止轉錄。④標記基因：篩選重組細胞。(3)將目的基因導入受體細胞。①導入植物細胞：最常用方法是農桿菌轉化法，另外還有花粉管通道法和基因槍法。②導入動物細胞：最常用方法是顯微注射法。③導入微生物細胞：常用Ca2＋處理使受體細胞處于感受態(tài)。(4)目的基因的檢測與鑒定。①分子水平檢測：以目的基因單鏈作探針，進行分子雜交；抗原—抗體雜交。②個體水平鑒定：抗蟲、抗病的接種試驗。3．應用：(1)植物基因工程。①抗蟲、抗病、抗逆轉基因植物；②利用轉基因改良植物的品質。(2)動物基因工程。①提高動物生長速度；②改善畜產品的品質；③用轉基因動物生產藥物；④用轉基因動物作器官移植的供體。(3)基因工程藥物。(4)基因治療。①體外基因治療；②體內基因治療。二、植物組織培育與動物細胞培育的比較三、植物體細胞雜交、動物細胞融合與細胞核移植1．若該圖為植物體細胞雜交示意圖：(1)原生質體的制備。用纖維素酶和果膠酶除去植物細胞的細胞壁，得到原生質體A和B。(2)促融方法。①過程中，常用的化學試劑是聚乙二醇。(3)新細胞壁的形成。②過程形成的D細胞具有肯定的外形，該過程與細胞中的高爾基體親密相關。(4)雜種植株的培育。③過程為植物組織培育，依據(jù)的原理是細胞的全能性，所得雜種植株可育(“可育”或“不行育”)。2．若該圖為動物細胞融合示意圖：(1)促融方法。與植物體細胞雜交相比，①過程中特有的方法是滅活病毒處理。(2)原理：①過程的完成依靠于細胞膜的流淌性。(3)應用。若A細胞為骨髓瘤細胞，B細胞為B淋巴細胞，那么D細胞稱為雜交瘤細胞，由D細胞連續(xù)分裂產生大量細胞的過程，稱為克隆。這種細胞既能無限繁殖，又能產生專一抗體。3．若該圖為體細胞核移植過程示意圖，假設C細胞的細胞核來自于A細胞：(1)受體細胞(B細胞)的選擇理由。第一：養(yǎng)分物質豐富，能滿足早期胚胎發(fā)育的需要。其次：體積較大，易于操作。第三：含有使已分化的細胞核恢復分裂力量的物質。(2)克隆動物的性狀。通過該過程克隆的動物主要性狀由A細胞打算。1．在誘導離體菊花莖段形成幼苗的過程中，不行能同時進行ATP的合成與分解。()【答案】×分析：在誘導離體的組織或器官形成幼苗的過程中，伴隨細胞的增殖與分化等需要能量的生理過程，肯定會進行ATP的合成與分解。2．重組質粒與探針能進行分子雜交是由于DNA分子脫氧核糖和磷酸交替連接。()【答案】×分析：DNA分子雜交是通過堿基互補配對原則形成的。3．將目的基因B直接導入大腸桿菌，然后感染并轉入玫瑰細胞。()【答案】×分析：目的基因必需經(jīng)構建形成基因表達載體，才能導入受體細胞，否則不能正常表達。4．培育草莓脫毒苗所接受的主要技術是組織培育。()【答案】√分析：植物的莖尖一般沒有病毒感染，因此可以通過組織培育技術培育莖尖細胞以獲得脫毒苗。5．應用DNA探針技術，可以檢測轉基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其完全表達。()【答案】×分析：應用DNA探針技術，可以檢測轉基因抗凍番茄植株中目的基因的存在及其是否轉錄，但不能檢測其是否表達。6．體細胞雜交技術可用于克隆動物和制備單克隆抗體。()【答案】×分析：克隆動物通過核移植技術獲得，不能通過體細胞雜交技術獲得。7．動物的生長激素基因轉入植物體后不能表達。()【答案】×分析：不同生物的基因具有相同的化學成分和空間結構，合成蛋白質時共用一套密碼子，因此動物基因可以在植物體內表達。8．單克隆抗體技術可以用于治療老年癡呆癥。()【答案】√分析：單克隆抗體特異性強，可以定向清除抗原，達到治療疾病的目的?；蚬こ痰幕竟ぞ摺镜淅?】(2022·新課標全國卷)依據(jù)基因工程的有關學問，回答下列問題：(1)限制性內切酶切割DNA分子后產生的片段，其末端類型有________和________。(2)質粒運載體用EcoRⅠ切割后產生的片段如下：AATTC……GG……CTTAA為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性內切酶切割，該酶必需具有的特點是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即________DNA連接酶和________DNA連接酶。(4)反轉錄作用的模板是________，產物是________。若要在體外獲得大量反轉錄產物，常接受________技術。(5)基因工程中除質粒外，________和________也可作為運載體。(6)若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般狀況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，緣由是________________________________________________________________________?！窘馕觥?1)當限制酶在它識別序列的中心軸線兩側將DNA的兩條鏈分別切開時，產生的是黏性末端，而當限制酶在它識別序列的中心軸線處切開時，產生的是平末端。(2)為使運載體與目的基因相連，不同的限制酶應當切出相同的黏性末端。(3)DNA連接酶依據(jù)其來源的不同分為兩類，一類是從大腸桿菌中分別得到的，稱為E·coliDNA連接酶；另一類是從T4噬菌體中分別出來的，稱為T4DNA連接酶。(4)反轉錄是指以RNA為模板在反轉錄酶的作用下合成DNA的過程，可以在體外短時間內大量擴增DNA的技術叫PCR(多聚酶鏈式反應)。(5)基因工程中可以作為運載體的除質粒外，還有λ噬菌體的衍生物、動植物病毒等。(6)大腸桿菌細胞有細胞壁和細胞膜，能阻擋質粒(外源DNA)等物質的進入，只能通過Ca2＋處理細胞，使細胞處于能吸取四周環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)(感受態(tài)細胞)，才能作為受體細胞。【答案】(1)黏性末端平末端(2)切割產生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產生的相同(3)E·coliT4(4)mRNA(或RNA)cDNA(或DNA)PCR(5)λ噬菌體的衍生物動植物病毒(6)未處理的大腸桿菌吸取質粒(外源DNA)的力量極弱(1)基因工程常用的工具包括哪些？分別起什么作用？(2)限制酶的特異性及其作用：①特異性：________________________________________________________________________；作用部位：________________________________________________________________________；③末端分析：同種限制酶切出的末端______________(填“肯定”或“可能”)相同；不同種限制酶切出的末端____________(填“肯定”或“可能”)相同?！敬鸢浮?1)提示：限制酶——分子手術刀，DNA連接酶——分子縫合針，運載體——分子運輸車。(2)提示：①識別并切割特定的脫氧核苷酸序列②DNA單鏈中兩個相鄰脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵③肯定可能【總結提升】與核酸有關的酶的辨析【變式訓練】(2022·南通模擬)一般棉花中含β－甘露糖苷酶基因(GhMnaA2)，能在纖維細胞中特異性表達，產生的β－甘露糖苷酶催化半纖維素降解，棉纖維長度變短。為了培育新的棉花品種，科研人員構建了反義GhMnaA2基因表達載體，利用農桿菌轉化法導入棉花細胞，成功獲得轉基因棉花品種，具體過程如下。請分析回答：(1)①和②過程中所用的限制酶分別是____________、____________。(2)基因表達載體除了圖示組成部格外，至少還有________________________等(至少答兩個)。(3)③過程中用酶切法可鑒定正、反義表達載體。用SmaⅠ酶和NotⅠ酶切正義基因表達載體獲得0.05kb、3.25kb、5.95kb、9.45kb四種長度的DNA片段，則用NotⅠ酶切反義基因表達載體獲得DNA片段的長度應是________和______________。(4)④利用農桿菌介導轉化棉花細胞的過程中，整合到棉花細胞染色體DNA的區(qū)段是________________，轉化后的細胞再通過________________形成植物體。(5)導入細胞內的反義GhMnaA2轉錄的mRNA能與細胞內的GhMnaA2轉錄的mRNA互補配對，從而抑制基因的表達，其意義是________________________________________________________________________________________________________________________________________________?！敬鸢浮?1)HindⅢ、BamHⅠSmaⅠ(2)復制原點、終止子、標記基因等(3)6.0kb12.7kb(4)(含有E6啟動子和GhMnaA2基因的)T—DNA植物組織培育(5)阻擋β－甘露糖苷酶合成，使棉纖維更長基因工程的操作步驟【典例2】肺細胞中的let-7基因表達減弱，癌基因RAS表達增加，會引發(fā)肺癌。爭辯人員利用基因工程技術將let-7基因導入肺癌細胞實現(xiàn)表達增加后，發(fā)覺肺癌細胞的增殖受到抑制。該基因工程技術基本流程如圖1。(1)進行過程①時，需要用到________酶。(2)爭辯發(fā)覺，let-7基因能影響癌基因RAS的表達，其影響機理如圖2。據(jù)圖分析，可從細胞中提取________進行分子雜交，以直接檢測let-7基因是否轉錄。肺癌細胞增殖受到抑制，可能是由細胞中________(填“RASmRNA”或“RAS蛋白”)含量削減引起的。(3)進行過程②時，需用________酶處理貼附在培育皿壁上的細胞，以利于細胞培育。③過程常用的方法是___________________________________________________________。【解析】(1)構建基因表達載體時，應用限制酶切開載體并插入目的基因，再用DNA連接酶連接為基因表達載體。(2)檢測目的基因是否轉錄，可以從細胞中提取mRNA，與基因探針進行分子雜交。let-7基因表達增加，會使RAS蛋白翻譯受阻，RAS蛋白含量削減，使肺癌細胞增殖受到抑制。(3)進行細胞培育時，需要用胰蛋白酶處理貼附在培育皿壁上的細胞。轉化動物細胞常用顯微注射法?！敬鸢浮?1)限制酶、DNA連接(2)mRNARAS蛋白(3)胰蛋白顯微注射法(1)反轉錄法合成目的基因。①需要的酶：________________________________________________________________________；模板：________________________________________________________________________；③原料：________________________________________________________________________。(2)目的基因的檢測與鑒定。①檢測目的基因是否導入受體細胞用什么方法？②檢測目的基因是否轉錄所使用的基因探針是什么？【答案】(1)提示：①反轉錄酶②RNA③脫氧核苷酸(2)①提示：DNA分子雜交法。②提示：基因探針為放射性同位素或熒光標記的目的基因單鏈?！究偨Y提升】目的基因的檢測與鑒定方法【變式訓練】(2022·天津高考改編)如圖為接受基因工程技術生產AFB1解毒酶的流程圖。據(jù)圖回答問題：eq\x(\a\al(含AFB1解毒,酶基因的菌株))eq\o(→,\s\up7(Ⅰ))eq\x(總RNA)→eq\x(cDNA)eq\o(→,\s\up7(Ⅱ),\s\do5(PCR))eq\x(\a\al(AFB1解毒,酶基因))eq\o(→,\s\up7(構建))eq\x(\a\al(酵母,工程菌))eq\o(→,\s\up7(表達),\s\do5(純化))eq\x(\a\al(AFB1,解毒酶))(1)在甲、乙條件下培育含AFB1解毒酶基因的菌株，經(jīng)測定，甲菌液細胞密度小、細胞含解毒酶；乙菌液細胞密度大、細胞不含解毒酶。過程Ⅰ應選擇________菌液的細胞提取總RNA，理由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)過程Ⅱ中，與引物結合的模板是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)檢測酵母工程菌是否合成了AFB1解毒酶，應接受________________________方法。(4)接受蛋白質工程進一步改造該酶的基本途徑是：從提高酶的活性動身，設計預期的蛋白質結構，推想應有的氨基酸序列，找到相對應的________。(5)實際上生物分子間的結合具有特異性。以下實例為體外處理“蛋白質－DNA復合體”獲得DNA片段信息的過程圖，請回答。a．若將得到的DNA片段用于構建重組質粒，需要將過程③的測序結果與限制酶的________進行對比，以確定選用何種酶。b．假如復合體中的蛋白質為RNA聚合酶，則其識別、結合的DNA序列區(qū)為基因的________________?！敬鸢浮?1)甲甲菌液細胞的AFB1解毒酶基因已轉錄生成mRNA，而在乙菌液細胞中該基因未轉錄(2)AFB1解毒酶基因的cDNA(3)抗原－抗體雜交(4)脫氧核苷酸序列(5)a.識別序列b．啟動子植物細胞工程【典例3】(2022·新課標全國卷)為了探究6－BA和IAA對某菊花品種莖尖外植體再生叢芽的影響，某爭辯小組在MS培育基中加入6－BA和IAA，配制成四種培育基(見下表)，滅菌后分別接種數(shù)量相同、生長狀態(tài)全都、消毒后的莖尖外植體，在適宜條件下培育一段時間后，統(tǒng)計再生叢芽外植體的比率(m)，以及再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)，結果如下表?；卮鹣铝袉栴}：(1)依據(jù)植物的需求量，培育基中無機鹽的元素可分為________和________兩類。上述培育基中，6－BA屬于________________類生長調整劑。(2)在該試驗中，自變量是________________，因變量是________，自變量的取值范圍是________________。(3)從試驗結果可知，誘導叢芽總數(shù)最少的培育基是________號培育基。(4)為了誘導該菊花試管苗生根，培育基中一般不加入____________(填“6－BA”或“IAA”)。【解析】(1)組成生物體的元素分為大量元素和微量元素兩類，6－BA屬于細胞分裂素類植物生長調整劑。(2)表格中6－BA濃度不變，自變量是IAA，取值范圍是0～0.5mg·L－1；因變量是再生叢芽外植體的比率和再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)。(3)依據(jù)表格中數(shù)據(jù)，得出1號培育基再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)(n)最小，即誘導叢芽總數(shù)最少。(4)6－BA可以促進生芽，IAA可以促進生根，為了誘導該菊花試管苗生根，培育基中一般不加入6－BA?！敬鸢浮?1)大量元素微量元素細胞分裂素(2)IAA濃度叢芽外植體的比率及叢芽平均數(shù)0～0.5mg·L－1(3)1(4)6－BA(1)植物體內有哪幾類激素？組織培育過程中加入植物激素的作用是什么？(2)依據(jù)表格數(shù)據(jù)推想：當6－BA相對較高時，________________________________相對較高，此時________________________(有利于、不利于)根的產生?！敬鸢浮?1)提示：有5類，分別為生長素類、細胞分裂素類、赤霉素類、乙烯類、脫落酸類。協(xié)同調控植物組織培育的脫分化、再分化、生根和叢芽的產生。(2)提示：再生叢芽外植體的比率和再生叢芽外植體上的叢芽平均數(shù)不利于【總結提升】植物組織培育原理和過程分析(1)原理：細胞的全能性。①理論依據(jù)。生物體的每一個細胞都含有本物種所特有的全套遺傳物質。②表達的簡潔程度。a．受精卵＞配子細胞＞體細胞。b．分化程度低的細胞＞分化程度高的細胞。c．植物細胞＞動物細胞。③體內細胞未表現(xiàn)全能性的緣由：基因的表達具有選擇性。(2)植物激素的使用。脫分化階段細胞分裂素比例較高，以促進細胞的分裂；再分化階段生長素比例較高，以促進芽與根的形成。(3)光照的使用。脫分化階段不需要賜予光照，再分化階段需要賜予光照，以利于葉綠素的形成。【變式訓練】如圖是通過土壤農桿菌與植物細胞原生質體共培育的方法獲得轉基因植物的過程。請回答下列問題。(1)圖a表示從已經(jīng)消毒的葉片中剪取部分植物組織細胞。圖b表示用________酶來制備原生質體。(2)圖c表示用培育基培育原生質體，為了防止原生質體________，培育基的濃度要適宜。培育一段時間后，將其與________共同培育，使攜帶目的基因的____________進入植物細胞。然后通過離心(圖d)的方法，除去多余的土壤農桿菌。(3)圖e表示將原生質體培育成________，然后將其轉移到含有肯定抗生素的________培育基中進行篩選培育(圖f)。(4)將獲得的含有目的基因的愈傷組織轉移到____________培育基中連續(xù)培育(圖g)，同時留意調整________________的種類和________________，最終獲得完整的植株(圖h)?！敬鸢浮?1)纖維素酶和果膠(2)吸水漲破土壤農桿菌重組Ti質粒(3)愈傷組織選擇(4)分化植物激素比例動物細胞工程【典例4】(2022·課標Ⅰ)某爭辯者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(能檢測出抗原抗體反應的血清最大稀釋倍數(shù))，結果如圖所示。若要制備雜交瘤細胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細胞(染色體數(shù)目40條)，并將該細胞與體外培育的小鼠骨髓瘤細胞(染色體數(shù)目60條)按肯定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導細胞融合，經(jīng)篩選培育及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細胞。回答下列問題：(1)制備融合所需的B淋巴細胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達到16000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過________次免疫后才能有符合要求的。達到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細胞的是________小鼠，理由是________________________________________________________________________。(2)細胞融合試驗完成后，融合體系中除含有未融合的細胞和雜交瘤細胞外，可能還有__________________，體系中消滅多種類型細胞的緣由是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)雜交瘤細胞中有________個細胞核，染色體數(shù)目最多是________條。(4)未融合的B淋巴細胞經(jīng)多次傳代培育后都不能存活，緣由是________。【解析】(1)由圖可知，小鼠至少經(jīng)過4次免疫后，免疫小鼠的血清抗體效價可達到16000以上，其中Y小鼠的血清抗體效價最高。(2)由于細胞融合是隨機的，且并不是全部細胞都能參與融合，融合體系中含有五種細胞：未融合的B淋巴細胞、未融合的骨髓瘤細胞、雜交瘤細胞、骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞、B淋巴細胞相互融合形成的細胞。(3)兩個細胞的細胞核融合成一個細胞核標志著融合的完成，雜交瘤細胞中有一個細胞核，染色體數(shù)量為兩者之和，即100條染色體。(4)未融合的B淋巴細胞不能無限增殖，經(jīng)多次傳代培育后都不能存活?！敬鸢浮?1)4YY小鼠的血清抗體效價最高(2)B淋巴細胞相互融合形成的細胞、骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞細胞融合是隨機的，且融合率達不到100%(3)1100(4)(經(jīng)免疫的B淋巴細胞是高度分化的細胞)不能無限增殖(1)動物細胞培育分析。①制備單細胞懸液時應當用何種物質處理幼齡動物的器官或組織？②動物細胞培育過程有什么特點？(2)正常細胞與癌細胞的區(qū)分。①癌細胞中數(shù)目較多的細胞器：________________________________________________________________________。②癌細胞能無限增殖的緣由：________________________________________________________________________。【答案】(1)①提示：胰蛋白酶。②提示：貼壁生長、接觸抑制。(2)提示：①線粒體、核糖體②癌細胞表面糖蛋白削減，無接觸抑制現(xiàn)象【總結提升】動物細胞培育的特殊條件歸納(1)胰蛋白酶的使用：首先用胰蛋白酶處理動物的器官或組織，以制備單細胞懸液；培育過程中發(fā)生接觸抑制時，同樣需要用胰蛋白酶使細胞分散開。(2)避開雜菌污染的措施：培育液及培育用具滅菌處理，加入肯定量的抗生素，定期更換培育液。(3)特殊的養(yǎng)分條件。①液體培育基。②加入動物血清、血漿等。③通入氧氣以滿足代謝的需要。④通入二氧化碳以維持培育液的pH。【變式訓練】紅豆杉，又名紫杉，可從其樹皮中分別出高抗癌活性的紫杉醇。下面是某同學設計的有關紫杉醇抗腫瘤試驗的爭辯流程，請分析并回答：(1)酶X是________酶，其主要作用是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)物質Y是________，乙組起________作用。(3)細胞體外培育所需養(yǎng)分物質與體內基本相同，例如，需要有________、________、促生長因子、無機鹽、微量元素等，通常還需要加入血清、血漿。(4)為清除代謝產物，防止細胞代謝產物積累對細胞自身造成危害，應實行的措施是________________________________________________________________________。(5)試驗結果：若甲組________________________，說明紫杉醇有抗腫瘤作用?！敬鸢浮?1)胰蛋白(膠原蛋白)使腫瘤細胞分散開(2)生理鹽水對比(與紫杉醇形成對比)(3)糖(葡萄糖)氨基酸(4)(定期)更換培育液(5)腫瘤細胞的數(shù)目少于乙組1．(2022·山東理綜)人組織纖溶酶原激活物(htPA)是一種重要的藥用蛋白，可在轉htPA基因母羊的羊乳中獲得。流程如下：(1)htPA基因與載體用________切割后，通過DNA連接酶連接，以構建重組表達載體。檢測目的基因是否已插入受體細胞DNA，可接受________技術。(2)為獵取更多的卵(母)細胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其________。采集的精子需要經(jīng)過______，才具備受精力量。(3)將重組表達載體導入受精卵常用的方法是________________。為了獲得母羊，移植前需對已成功轉入目的基因的胚胎進行________。利用胚胎分割和胚胎移植技術可獲得多個轉基因個體，這體現(xiàn)了早期胚胎細胞的________。(4)若在轉htPA基因母羊的羊乳中檢測到________，說明目的基因成功表達?！窘馕觥?1)將目的基因和載體用同一種限制酶切割后能產生相同的黏性末端，便于構成表達載體。檢測目的基因是否成功插入的技術為DNA分子雜交技術。(2)利用促性腺激素可促進母羊超數(shù)排卵。采集的精子必需利用獲能液處理后才具備受精力量。(3)將重組表達載體導入動物受精卵的常用方法是顯微注射法。為了獲得母羊，需對胚胎進行性別鑒定，性染色體組成為XX類型才能發(fā)育為母羊。利用胚胎分割和移植技術可獲得多個個體，體現(xiàn)了早期胚胎細胞可發(fā)育成個體的全能性。(4)基因成功表達的標志是產生了相應的蛋白質，因此htPA基因成功表達的標志是在轉基因母羊的羊乳中檢測到htPA(或人組織纖溶酶原激活物)?！敬鸢浮?1)同種限制性核酸內切酶(或同種限制酶)DNA分子雜交(或核酸探針)(2)超數(shù)排卵獲能(處理)(3)顯微注射法性別鑒定全能性(2分)(4)htPA(或人組織纖溶酶原激活物)(2分)2．(2022·日照模擬)我們日常吃的大米中鐵含量極低；科研人員通過基因工程等技術，培育出了鐵含量比一般大米高60%的轉基因水稻，改良了稻米的養(yǎng)分品質。下圖為培育轉基因水稻過程示意圖，請回答：(1)在上述工程中，鐵結合蛋白基因稱為____________，獵取該基因后常用________________技術進行擴增。(2)構建重組Ti質粒時，通常要用同種限制酶分別切割________和________。將重組Ti質粒轉入農桿菌時，可以用________________處理農桿菌，使重組Ti質粒易于導入。(3)將含有重組Ti質粒的農桿菌與水稻愈傷組織共同培育時，通過培育基2的篩選培育，可以獲得________________；培育基3與培育基2的區(qū)分是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(4)檢測培育轉基因水稻的目的是否達到，需要檢測轉基因水稻________________________________________________________________________________________________________________________________________________?！敬鸢浮?1)目的基因PCR(2)含目的基因的DNA片段質粒CaCl2(3)含有重組質粒的愈傷組織生長素和細胞分裂素的濃度比例不同(4)種子中鐵含量3．(2022·南通模擬)科研人員為探究誘導酵母原生質體攝取蠶豆葉綠體的適宜條件，進行了如下試驗。①提取蠶豆葉綠體：過濾蠶豆新穎葉片研磨液，對濾液進行__A__后獲得葉綠體，加入2mL0.35mol/L氯化鈉溶液，制成懸液。②制備酵母原生質體：在適宜條件下用2%的蝸牛酶處理酵母菌，獲得酵母原生質體。③誘導酵母原生質體攝取蠶豆葉綠體：將酵母原生質體與蠶豆葉綠體混合后，在不同溫度和pH下用__B__(化學試劑)處理60min后洗滌。用顯微鏡觀看，結果如下表：試驗組別溫度pH酵母原生質/mL含葉綠體的酵母原生質體數(shù)/mL130℃7.67604237℃7.611007337℃6.012505437℃10.29903請回答：(1)補全試驗步驟：A________；B________。(2)步驟②中蝸牛酶的作用是除去酵母細胞的________。(3)試驗結果表明酵母原生質體攝取蠶豆葉綠體較適宜的條件是________。在適宜溫度下，酵母原生質體簡潔攝入葉綠體與細胞膜的________________增加有關?！敬鸢浮?1)(差速)離心聚乙二醇(2)細胞壁(3)溫度為37℃，pH為7.6流淌性4．(2022·廣東理綜)鐵皮石斛是我國貴重中藥，生物堿是其有效成分之一。應用組織培育技術培育鐵皮石斛擬原球莖(簡稱PLBs，類似愈傷組織)生產生物堿的試驗流程如下：eq\x(新生養(yǎng)分芽)eq\o(→,\s\up7(誘導))eq\x(PLBs)eq\o(→,\s\up7(增殖),\s\do5(培育))eq\x(PLBs)eq\o(→,\s\up7(不同時間),\s\do5(取樣、檢測))eq\x(試驗結果)在固體培育基上，PLBs的重量、生物堿含量隨增殖培育時間的變化如下圖所示，請回答下列問題：(1)選用新生養(yǎng)分芽為外植體的緣由是______________，誘導外植體形成PLBs的過程稱________。(2)與黑暗條件下相比，PLBs在光照條件下生長的優(yōu)勢體現(xiàn)在______________，______________，______________。(3)脫落酸(ABA)能提高生物堿含量，但會抑制PLBs的生長。若接受液體培育，推想添加適量的ABA可提高生物堿產量。同學們擬開展探究試驗驗證該推想，在設計試驗方案時探討了以下問