專題5-生物技術(shù)與工程相關(guān)實驗-【實驗專攻】高考生物實驗專題必殺突破(解析版)

專題5生物技術(shù)與工程相關(guān)實驗?zāi)夸泴嶒?8：制作傳統(tǒng)發(fā)酵食品實驗29：酵母菌的純培養(yǎng)實驗30：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)實驗31：菊花的組織培養(yǎng)實驗32：DNA的粗提取與鑒定實驗33：DNA片段的擴增及電泳

實驗28：制作傳統(tǒng)發(fā)酵食品一、制作泡菜（一）實驗原理1.制作傳統(tǒng)泡菜是利用植物體表面天然的來進行發(fā)酵的。發(fā)酵期間，會不斷積累，當它的質(zhì)量百分比為0.4%~0.8%時，泡菜的口味、品質(zhì)最佳。2.菌種：___________________。

3.在___________條件下，乳酸菌將葡萄糖分解成_____________。反應(yīng)式：。

答案：乳酸菌、乳酸、乳酸菌、無氧、乳酸、C6H12O6―→2C3H6O3

（二）方法步驟1.用清水和食鹽配制質(zhì)量百分比為的鹽水，并將鹽水，冷卻待用。2.將新鮮蔬菜（如蘿卜、黃瓜和豇豆等）洗凈，切成塊狀或條狀，混合均勻，后裝入泡菜壇內(nèi)；裝至時，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，繼續(xù)裝至。3.將冷卻好的鹽水緩緩倒入壇中，使鹽水沒過全部菜料，蓋好壇蓋。4.向壇蓋邊沿的水槽中注滿，并在發(fā)酵過程中注意經(jīng)常向水槽中補充，根據(jù)室內(nèi)溫度控制發(fā)酵時間。答案：5%~20%、煮沸、晾干、半壇、八成滿、水、水二、制作果酒和果醋（一）實驗原理1.許多新鮮水果（如葡萄）的果皮表面附著有大量的不同種類的。在這些的作用下，水果可以發(fā)酵成果酒。在的條件下，果酒經(jīng)的作用還可以進一步發(fā)酵成果醋。2.表格對比制作原理。

（二）方法步驟1.將發(fā)酵瓶、榨汁機等器具用清洗干凈，并用體積分數(shù)為消毒，晾干備用。2.取新鮮葡萄，用沖洗1~2次，再去除，瀝干。3.用榨汁機榨取葡萄汁，將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶中（注意：要留有大約的空間）蓋好瓶蓋。4.將溫度控制在進行發(fā)酵。在發(fā)酵過程中，每隔12h左右將瓶蓋一次（注意：不是打開瓶蓋），此后再擰緊瓶蓋。發(fā)酵時間為d。可通過從發(fā)酵瓶口取樣來對發(fā)酵的情況進行監(jiān)測。5.當葡萄酒制作完成后，打開瓶蓋，蓋上一層，進行葡萄醋的發(fā)酵。發(fā)酵溫度為℃，時間為d。三．深化拓展提能1.泡菜腌制過程中，乳酸菌、乳酸和亞硝酸鹽相對含量(或數(shù)量)的變化。

2.果酒和果醋制作過程的比較。

四．泡菜的制作實驗注意事項(1)材料的選擇及用量

①蔬菜應(yīng)新鮮，若放置時間過長，蔬菜中的硝酸鹽易被還原成亞硝酸鹽。

②鹽水要煮沸后冷卻。煮沸有兩大作用，一是除去水中的氧氣，二是殺滅鹽水中的細菌。

(2)防止雜菌污染：每次取樣用具要洗凈，取樣后要迅速封口。

(3)控制嚴格的無氧條件

①泡菜壇要選擇氣密性好的容器，以創(chuàng)造無氧環(huán)境，有利于乳酸菌發(fā)酵，防止蔬菜腐爛。

②泡菜壇壇蓋邊沿的水槽內(nèi)注滿水，以保證壇內(nèi)乳酸菌發(fā)酵所需的無氧環(huán)境，并注意在發(fā)酵過程中經(jīng)常補水。

(4)控制適宜的溫度：18～20℃為宜，溫度偏高有害菌活動能力強，溫度偏低不利于乳酸發(fā)酵。

五．鞏固提升1．關(guān)于果酒、果醋和泡菜這三種傳統(tǒng)發(fā)酵產(chǎn)物的制作，下列敘述正確的是（

）A．發(fā)酵所利用的微生物都屬于原核生物 B．發(fā)酵過程都在無氧條件下進行C．發(fā)酵過程都在同一溫度下進行 D．發(fā)酵后形成的溶液都呈酸性【答案】D【詳解】A、參與果酒制作的微生物是酵母菌，屬于真核生物，A錯誤；B、參與果醋制作的醋酸菌是好氧菌，因此果醋發(fā)酵需要有氧條件，B錯誤；C、不同的發(fā)酵產(chǎn)物需要的溫度不同，C錯誤；D、果酒、果醋和泡菜發(fā)酵后形成的溶液都呈酸性，D正確。故選D。2．用白蘿卜制作泡菜的過程中，采用適當方法可縮短腌制時間。下列方法中錯誤的是（）A．將白蘿卜切成小塊 B．向容器中通入無菌空氣C．添加已經(jīng)腌制過的泡菜汁 D．用沸水短時處理白蘿卜塊【答案】B【詳解】A、將白蘿卜切成小塊可以擴大白蘿卜與腌料的接觸面積，縮短腌制時間，A正確；B、泡菜制作所需菌種為乳酸菌，制作過程中應(yīng)保持無氧環(huán)境，向容器中通入無菌空氣不利于腌制，B錯誤；C、泡菜汁中含有一定量的發(fā)酵菌種，所以在腌制過程中，加入一些已經(jīng)腌制過泡菜汁可縮短腌制時間，C正確；D、用沸水短時處理，可抑制某些微生物的繁殖，提高泡菜品質(zhì)，也可縮短腌制時間，D正確。故選B。3．某同學選用新鮮成熟的葡萄制作果酒和果醋，下列相關(guān)敘述正確的是（）A．果酒發(fā)酵時，每日放氣需迅速，避免空氣回流入發(fā)酵容器B．果酒發(fā)酵時，用斐林試劑檢測葡萄汁中還原糖含量變化，磚紅色沉淀逐日增多C．果醋發(fā)酵時，發(fā)酵液產(chǎn)生的氣泡量明顯少于果酒發(fā)酵時D．果醋發(fā)酵時，用重鉻酸鉀測定醋酸含量變化時，溶液灰綠色逐日加深【答案】C【詳解】A、酒精發(fā)酵是利用酵母菌的無氧呼吸，隨著果酒發(fā)酵的進行，裝置內(nèi)會產(chǎn)生氣體（二氧化碳），容器內(nèi)壓強大于外界，所以空氣不會回流，A錯誤；B、果酒發(fā)酵時，發(fā)酵液中的葡萄糖不斷被消耗，因此用斐林試劑檢測葡萄汁中還原糖含量變化，磚紅色沉淀逐日減少，B錯誤；C、以酒精為底物進行醋酸發(fā)酵，酒精與氧氣發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生醋酸和水，幾乎沒有氣泡產(chǎn)生，發(fā)酵液產(chǎn)生的氣泡量明顯少于果酒發(fā)酵時，C正確；D、重鉻酸鉀用于檢測酒精，不能用于測定醋酸含量，D錯誤。故選C。4．（多選）生活中常見的果酒、果醋和泡菜的制作離不開傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．家庭釀酒、制果醋和酸奶均需要選純種菌進行發(fā)酵B．果醋制作的溫度一般控制在30～35℃，果酒發(fā)酵的溫度一般控制在18～25℃C．制作泡菜壇口密封的目的是保證壇內(nèi)乳酸菌發(fā)酵時所需的無氧環(huán)境D．果醋制作中期通入氮氣，有利于醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷敬鸢浮緽C【詳解】A、家庭制作果酒、果醋和酸奶過程中有多種微生物參與發(fā)酵過程，因此均不是純種發(fā)酵，A錯誤；B、果醋制作的溫度一般控制在30～35℃，果酒發(fā)酵的溫度一般控制在18～25℃，B正確；C、泡菜腌制時需要乳酸菌發(fā)酵，乳酸菌是厭氧細菌，在無氧的情況下，將葡萄糖分解成乳酸，因此壇子加水密封的目的是營造缺氧環(huán)境，利于乳酸菌發(fā)酵，C正確；D、當氧氣充足、糖源缺乏時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿幔珼錯誤。5．人類很早就能制作果酒，并用果酒進一步發(fā)酵生產(chǎn)果醋。(1)人們利用水果及附著在果皮上的_______________菌，在18～25℃、無氧條件下釀造果酒；在利用醋酸菌在___________________________條件下，將酒精轉(zhuǎn)化成醋酸釀得果醋。釀造果醋時，得到了醋酸產(chǎn)率較高的醋酸菌群，為進一步純化獲得優(yōu)良醋酸菌菌種，采用的接種方法是____________________________________。(2)先釀制果酒再生產(chǎn)果醋的優(yōu)勢有_____________________（填編號）。①先釀制果酒，發(fā)酵液能抑制雜菌的生長，有利于提高果醋的產(chǎn)率②釀制果酒時形成的醋酸菌膜，有利于提高果醋的產(chǎn)率③果酒有利于溶出水果中的風味物質(zhì)并保留在果醋中(3)果酒中的酒精含量對果醋的醋酸產(chǎn)率會產(chǎn)生一定的影響。某技術(shù)組配制發(fā)酵液研究了初始酒精濃度對醋酸含量的影響，結(jié)果見圖。該技術(shù)組使用的發(fā)酵液中，除酒精外還包括的基本營養(yǎng)物質(zhì)有______________________________（填寫兩種）。據(jù)圖可知，醋酸發(fā)酵的最適初始酒精濃度是____________；酒精濃度為10%時醋酸含量最低，此時，若要盡快提高醋酸含量，可采取的措施有_____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________（填寫兩個方面）?！敬鸢浮?1)

酵母菌

30～35℃，有氧

稀釋涂布平板法或平板劃線法(2)①③(3)

氮源、無機鹽、水

6%

適當降低初始酒精濃度，增加氧氣供應(yīng)，適當提高溫度等【分析】1、在葡萄酒的自然發(fā)酵過程中，起主要作用的是附著在葡萄皮上的野生型酵母菌。醋酸菌是好氧菌，最是生長溫度為30～35℃。微生物最常用的接種方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法。2、釀制果酒，發(fā)酵液中產(chǎn)生的酒精能抑制雜菌的生長。3、培養(yǎng)基的成分，四大基礎(chǔ)營養(yǎng)物質(zhì)分別是碳源、氮源、水、無機鹽。（1）在葡萄酒的自然發(fā)酵過程中，起主要作用的是附著在葡萄皮上的野生型酵母菌。醋酸菌是好氧菌，最適生長溫度為30～35℃。微生物最常用的接種方法是稀釋涂布平板法和平板劃線法。（2）①先釀制果酒，發(fā)酵液能抑制雜菌的生長，有利于提高果醋的產(chǎn)率，①正確；②釀制果酒時形成的醋酸菌膜會造成局部缺氧，導致果醋產(chǎn)率不高，②錯誤；③果酒有利于溶出水果中的風味物質(zhì)并保留在果醋中，增加果醋風味，③正確。故選①③。（3）微生物生長基本營養(yǎng)物質(zhì)：氮源，碳源，水，無機鹽等，題中酒精作為碳源。酒精濃度為6%時，醋酸含量最高，是發(fā)酵的最適濃度。提高醋酸含量，可采取的措施有適當降低初始酒精濃度，增加氧氣供應(yīng)，適當提高溫度等。

實驗29：酵母菌的純培養(yǎng)一．實驗原理分散的微生物在適宜的培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的，這就是菌落。采用和能將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的。答案：固體、肉眼可見、子細胞群體、平板劃線法、稀釋涂布平板法、純培養(yǎng)物二．目的要求1.學會配制培養(yǎng)酵母菌的培養(yǎng)基并倒平板。2.學會進行無菌操作。3.嘗試通過平板劃線操作來獲得純化的酵母菌菌落。三．方法步驟1.制備培養(yǎng)基=1\*GB3①。稱取去皮的馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20g（也可用蔗糖代替）、15~20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000mL。=2\*GB3②。將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞，包上牛皮紙，并用皮筋勒緊，再放入中，在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15~30min。將5~8套培養(yǎng)皿包成一包，用幾層牛皮紙包緊，放入內(nèi)，在160~170℃滅菌2h。=3\*GB3③。待培養(yǎng)基冷卻至左右時，在附件倒平板。倒平板的具體操作步驟如下圖。=4\*GB3④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置。=4\*GB3④等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置。=3\*GB3③用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10~20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋。=2\*GB3②將瓶口迅速通過火焰=1\*GB3①拔出錐形瓶的棉塞2.接種和分離酵母菌通過接種環(huán)在培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。經(jīng)數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離得到。平板劃線的具體操作見下圖。=2\*GB3②=2\*GB3②在火焰旁冷卻接種環(huán)。同時拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞。=3\*GB3③將試管口通過火焰。=4\*GB3④在火焰附件用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。=1\*GB3①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。=7\*GB3=7\*GB3⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。=6\*GB3⑥在火焰附件培養(yǎng)皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。=5\*GB3⑤將試管口通過火焰，并塞上棉花。3.培養(yǎng)酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的中培養(yǎng)24~48h。答案：配制培養(yǎng)基、葡萄糖、滅菌、高壓蒸汽滅菌鍋、干熱滅菌箱、倒平板、50℃、酒精燈火焰、固體、聚集的菌種、單菌落、未接種、恒溫培養(yǎng)箱四．深化拓展提能1．歸納概括平板劃線操作的注意事項

(1)灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。

(2)第二次及其以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始，能使微生物的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。

(3)劃線時最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。

(4)劃線用力大小要適當，防止用力過大將培養(yǎng)基劃破。

(5)操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進行火焰灼燒滅菌，劃線操作結(jié)束時，仍需要灼燒接種環(huán)，每次灼燒的目的如下表所示：項目第一次操作每次劃線之前劃線結(jié)束目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使每次劃線菌種數(shù)目減少殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免微生物污染環(huán)境和感染操作者2．比較平板劃線法和稀釋涂布平板法的區(qū)別

比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法關(guān)鍵操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線①一系列的梯度稀釋②涂布平板操作注意事項每次劃線前后均需灼燒接種環(huán)稀釋度要足夠高，為確保實驗成功可以增加稀釋度的范圍菌體獲取在具有顯著的菌落特征的區(qū)域挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體適用范圍適用于好氧菌適用于厭氧菌和兼性厭氧菌優(yōu)點可以根據(jù)菌落的特點獲得某種微生物的單細胞菌落既可以獲得單細胞菌落，又能對微生物計數(shù)缺點不能對微生物計數(shù)操作復(fù)雜，需要涂布多個平板五．鞏固提升1．下列關(guān)于“酵母菌的純培養(yǎng)”實驗的敘述，錯誤的是（

）A．馬鈴薯搗爛后的濾液中含有酵母菌生長所需的多種營養(yǎng)成分B．接種環(huán)滅菌時，頂端的環(huán)和環(huán)后的部分柄均需通過火焰灼燒C．平板劃線時，接種環(huán)應(yīng)在固體培養(yǎng)基表面輕輕地連續(xù)劃線D．完成平板劃線后，應(yīng)將平板立刻倒置培養(yǎng)以免污染培養(yǎng)基【答案】D【詳解】A、馬鈴薯搗爛后的濾液中含有酵母菌生長所需的多種營養(yǎng)成分，A正確；B、接種環(huán)滅菌時，頂端的環(huán)和環(huán)后的部分柄均需通過火焰灼燒，防止雜菌的污染，B正確；C、平板劃線時，接種環(huán)應(yīng)在固體培養(yǎng)基表面輕輕地連續(xù)劃線，用力劃得話會是培養(yǎng)基表面破損，影響實驗結(jié)果的觀察，C正確；D、完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，再將平板倒置培養(yǎng)，D錯誤。故選D。2．（多選）如圖為實驗室中酵母菌的純培養(yǎng)部分操作步驟，下列說法正確的是（

）A．①步驟使用的培養(yǎng)基已經(jīng)滅菌并調(diào)節(jié)過pHB．③到④過程中，每次接種前后都需要對接種環(huán)進行灼燒處理C．②步驟接種環(huán)經(jīng)灼燒滅菌后應(yīng)趁熱快速蘸取菌液D．①②③步驟操作時都需要在酒精燈火焰旁進行【答案】ABD【詳解】A、①步驟為倒平板，使用的培養(yǎng)基需要先調(diào)節(jié)pH再滅菌，避免調(diào)pH時造成污染，A正確；B、③到④過程中，每次劃線前后對接種環(huán)進行灼燒處理，是為了殺死接種環(huán)上殘留的菌種，使劃線時接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，B正確；C、②中接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)冷卻后再挑取菌液，以防高溫殺死菌種，C錯誤；D、①②③步驟操作時都需要在酒精燈火焰旁進行，防止被雜菌污染，D正確。故選ABD。3．酵母菌的純培養(yǎng)(1)菌落：分散的微生物在適宜的_____________表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的____________。(2)獲得單菌落的方法：_____________法和_____________法。(3)純培養(yǎng)過程：①制備培養(yǎng)基：_________________→滅菌→___________。②接種和分離酵母菌Ⅰ.方法：通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面________________的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。Ⅱ.操作步驟a.將___________放在_____________灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。b.在__________冷卻接種環(huán)。同時拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的試管的棉塞。c.將試管口通過火焰。d.在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。e.將試管口通過火焰，并塞上棉塞。f.在火焰附近將皿蓋打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃___________平行線，蓋上皿蓋。g.灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的________開始第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將_______________________________________相連。③培養(yǎng)酵母菌完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和_______________倒置，放入________左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)________h?！敬鸢浮?1)

固體培養(yǎng)基

子細胞群體(2)

平板劃線

稀釋涂布平板(3)

配制培養(yǎng)基

倒平板

連續(xù)劃線

接種環(huán)

火焰上

火焰旁

三至五條

末端

最后一次的劃線與第一次的劃線

一個未接種的平板

28℃

24-484．某興趣小組欲對葡萄皮上的野生酵母菌進行純培養(yǎng)?；卮鹣铝袉栴}：(1)酵母菌的純培養(yǎng)可使用__________________________________(填“牛肉膏蛋白胨”“MS”或“馬鈴薯瓊脂”)培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中還應(yīng)加入鏈霉素以抑制___________________________的生長，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基屬于________培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基應(yīng)采用___________滅菌法滅菌。(2)采用平板劃線法將葡萄皮上的野生酵母菌接種到平板上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由__________________形成的純培養(yǎng)物。上述方法能分離得到單菌落的原理是_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)下圖為不同初始氧氣濃度下，利用等量酵母菌進行發(fā)酵產(chǎn)酒精實驗的相關(guān)曲線。其中，初始氧氣濃度較高的是_________，判斷依據(jù)是____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________?！敬鸢浮?1)

馬鈴薯瓊脂

細菌（原核微生物）

選擇

濕熱(2)

單個微生物繁殖

通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，經(jīng)數(shù)次劃線培養(yǎng)，可以分離得到單菌落(3)

a

初始氧氣濃度高，酵母菌進行有氧呼吸的時間長，酒精發(fā)酵的起始時間較晚（或初始氧氣濃度高，酵母菌有氧呼吸大量繁殖，在酒精發(fā)酵的初期，產(chǎn)生酒精的速率較快）【分析】分離和純培養(yǎng)微生物最常用的培養(yǎng)基是瓊脂固體培養(yǎng)基，最常用的手段是平板分離微生物，平板分離法常用的兩種方法是涂布平板法和稀釋平板法，各種平板分離法的目的是要在培養(yǎng)基上得到目的微生物的單個菌落。（1）馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基常用于真菌的篩選，因此酵母菌的純培養(yǎng)可使用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基，鏈霉素可抑制細菌的生長，因此培養(yǎng)基中加入鏈霉素可以抑制細菌（原核微生物）的生長，加入了鏈霉素的培養(yǎng)基可篩選出真菌，因此屬于選擇培養(yǎng)基。培養(yǎng)基應(yīng)采用濕熱滅菌法滅菌。（2）單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的純培養(yǎng)物。平板劃線法通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面，經(jīng)數(shù)次劃線培養(yǎng)，可以分離得到單菌落。（3）初始氧氣濃度高時，酵母菌進行有氧呼吸的時間長，酒精發(fā)酵的起始時間較晚（或初始氧氣濃度高，酵母菌有氧呼吸大量繁殖，在酒精發(fā)酵的初期，產(chǎn)生酒精的速率較快），因此初始氧氣濃度較高的是a。

實驗30：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)一．基礎(chǔ)知識絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成的微生物才能分解尿素。利用以尿素作為唯一的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細菌，該選擇培養(yǎng)基的配方見下欄。

答案：脲酶、氮源二．實驗流程答案：樣品稀釋、培養(yǎng)觀察三．實驗設(shè)計1.土壤取樣。細菌適宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長，絕大多數(shù)分布在距地表3~8cm的土壤層。因此，取樣時一般要鏟去表層土。在城市，常見的是公園里、街道旁、花盆中的土壤；在農(nóng)村，則容易收集到農(nóng)田或菜園里的土壤。2.樣品的稀釋。測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用1×104、1×105和1×106倍稀釋的稀釋液進行平板培養(yǎng)。3.微生物的培養(yǎng)與觀察。不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細菌一般在30~37℃的溫度下培養(yǎng)1~2d。本實驗中，我們可以每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果。一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。請仔細觀察你所分離到的菌落，最好以表格的形式將不同菌落的特征（如形狀、大小和顏色等）記錄下來。四．操作提示1.將涂布器從酒精中取出時，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒。不要將過熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精。2.要按照前面學習過的無菌操作的方法，進行規(guī)范操作。取土樣時用的鐵鏟和取樣紙袋在使用前都需要滅菌。操作完成后，一定要洗手。3.本實驗使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標記。例如，在標記培養(yǎng)皿時應(yīng)該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。4.本實驗耗時較長，需要事先規(guī)劃時間，以便提高實驗效率，在操作時有條不紊。五．鞏固提升1．下列是某同學分離高產(chǎn)脲酶菌的實驗設(shè)計，不合理的是（

）A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌【答案】D【詳解】A、農(nóng)田或公園土壤中含有較多的含脲酶的微生物，A正確；B、為了篩選可分解尿素的細菌，配置的培養(yǎng)基應(yīng)選擇尿素作為唯一氮源，含脲酶的微生物在該培養(yǎng)基上能生長，B正確；C、當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，C正確；D、在細菌分解尿素的化學反應(yīng)中，細菌合成的脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基的pH升高，酚紅指示劑將變紅，因此在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，能對分離的菌種做進一步鑒定，D錯誤。故選D。2．尿素是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要的氮肥，土壤中的細菌可將尿素分解后供植物利用。下列相關(guān)敘述正確的是（

）A．為篩選分解尿素的細菌，可向培養(yǎng)基中加入尿素和硝酸銨B．分解尿素的細菌獲取后要在零下20℃長期保存時，菌液中常需加入一定量的甘油C．用稀釋涂布平板法統(tǒng)計菌落數(shù)時，為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在300左右的平板計數(shù)D．對篩選后的分解菌做進一步鑒定，需向培養(yǎng)基中加入伊紅美藍指示劑，培養(yǎng)尿素分解菌后，指示劑變紅【答案】B【詳解】A、為篩選分解尿素的細菌，可向培養(yǎng)基中加入尿素，A錯誤；B、若想將目的菌在-20°C長期保存，應(yīng)采用甘油管藏法，該方法通常需要在菌液中加入一定量的甘油，B正確；C、用稀釋涂布平板法進行計數(shù)時為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在30~300的平板進行計數(shù)，C錯誤；D、尿素分解菌可以產(chǎn)生脲酶將尿素分解為氨，使pH升高，培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑后，氨可以使指示劑呈紅色，據(jù)此可以用酚紅指示劑鑒別尿素分解菌，D錯誤。故選B。3．下列關(guān)于土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)實驗操作的敘述，錯誤的是（

）A．利用稀釋涂布平板法準確估計菌落數(shù)目的關(guān)鍵是有恰當?shù)南♂尪菳．若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照C．該實驗每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，并以菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果D．分解尿素的細菌能合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基pH升高，使酚紅指示劑變紅【答案】B【詳解】A、利用稀釋涂布平板法準確估計菌落數(shù)目的關(guān)鍵是有恰當?shù)南♂尪龋拍鼙ＷC培養(yǎng)基表面生長的一個單菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌，A正確；B、若要判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用，需設(shè)置接種在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照，B錯誤；C、該實驗每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，并以菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，C正確；D、分解尿素的細菌能合成脲酶，脲酶將尿素分解成氨，氨會使培養(yǎng)基PH升高，使酚紅指示劑變紅，D正確。故選B。4．（多選）尿素是一種高濃度氮肥，被土壤中某些細菌分解為氨后，再轉(zhuǎn)化成銨鹽、硝酸鹽等可以被植物吸收利用。某同學要分離土壤中能分解尿素的細菌，并統(tǒng)計每克土壤樣品中的活菌數(shù)目，培養(yǎng)基配方如下表所示。下列有關(guān)敘述正確的是（

）成分KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂含量1.4g2.1g0.2g10.0g1.0g15.0gA．有些細菌能分解尿素的根本原因是其能合成脲酶B．若培養(yǎng)基要調(diào)節(jié)pH，應(yīng)該在滅菌之前進行C．KH2PO4和Na2HPO4可維持培養(yǎng)基pH的相對穩(wěn)定D．用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比實際的活菌數(shù)目少【答案】BCD【詳解】A、某些細菌能分解尿素的原因是能合成并分泌脲酶，根本原因是具有脲酶基因，A錯誤；B、培養(yǎng)基制作完成后需要先調(diào)整pH，后進行滅菌，B正確；C、KH2PO4和Na2HPO4屬于緩沖液，可維持培養(yǎng)基pH的相對穩(wěn)定，C正確；D、由于兩個或多個細菌可能形成一個菌落，所以用稀釋涂布平板法統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比實際的活菌數(shù)目少，D正確。故選BCD。5．某些土壤細菌可將尿素分解成CO2和NH3，供植物吸收和利用?；卮鹣铝袉栴}：（1）有些細菌能分解尿素，有些細菌則不能，原因是前者能產(chǎn)生________________________。能分解尿素的細菌不能以尿素的分解產(chǎn)物CO2作為碳源，原因是__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________，但可用葡萄糖作為碳源，進入細菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用是_________________________________________________________________________________________________________________________________（答出兩點即可）。（2）為了篩選可分解尿素的細菌，在配制培養(yǎng)基時，應(yīng)選擇____________________（填“尿素”“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”）作為氮源，不選擇其他兩組的原因是_______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。（3）用來篩選分解尿素細菌的培養(yǎng)基含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用有__________________________________________________________________________________________________________________________（答出兩點即可）?！敬鸢浮?/p>

脲酶

分解尿素的細菌是異養(yǎng)型生物，不能利用CO2來合成有機物

為細胞生物生命活動提供能量，為其他有機物的合成提供原料

尿素

其他兩組都含有NH4NO3，能分解尿素的細菌和不能分解尿素的細菌都能利用NH4NO3，不能起到篩選作用

為細菌生長提供無機營養(yǎng)，作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH穩(wěn)定【詳解】（1）細菌分解尿素是由于細菌體內(nèi)合成脲酶的結(jié)果，尿素是有機物，分解尿素的細菌是分解者，而不是生產(chǎn)者，只有生產(chǎn)者才能利用CO2作為碳源合成有機物，而分解尿素的細菌是異養(yǎng)型生物，不能利用CO2來合成有機物。進入細菌體內(nèi)的葡萄糖的主要作用：為細胞生物生命活動提供能量，為其他有機物的合成提供原料。（2）篩選分解尿素的細菌，通常只能用尿素作為唯一氮源，對于“NH4NO3”或“尿素+NH4NO3”均含有無機氮源，不能起到篩選作用。（3）KH2PO4和Na2HPO4為微生物提供P元素和無機鹽離子如鉀離子和鈉離子，還可作為緩沖劑保持細胞生長過程中pH穩(wěn)定。

實驗31：菊花的組織培養(yǎng)一．實驗原理植物細胞一般具有。在一定的等條件的誘導下，已經(jīng)分化的細胞可以經(jīng)過，即失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能，轉(zhuǎn)變成未分化的細胞，進而形成，這稱為愈傷組織。愈傷組織能重新分化成芽、根等器官，該過程稱為。植物激素中是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵激素，它們的濃度、用量的比例等都會影響植物細胞的發(fā)育方向。將愈傷組織接種到含有特定激素的培養(yǎng)基上，就可以誘導其再分化成，長出芽和根，進而發(fā)育成完整的植株。

答案：全能性、激素和營養(yǎng)、脫分化、不定形的薄壁組織團塊、再分化、生長素和細胞分裂素、胚狀體二．目的要求1.了解植物組織培養(yǎng)的基本原理。2.了解生長素和細胞分裂素的濃度、用量的比例對菊花愈傷組織形成和分化的影響。3.嘗試進行植物組織培養(yǎng)。三．方法步驟③在酒精燈火焰旁，將外植體的1/3~1/2插入誘導愈傷組織的培養(yǎng)基中。用封口膜或瓶蓋封蓋瓶口，并在培養(yǎng)瓶上作好標記。③在酒精燈火焰旁，將外植體的1/3~1/2插入誘導愈傷組織的培養(yǎng)基中。用封口膜或瓶蓋封蓋瓶口，并在培養(yǎng)瓶上作好標記。②將消過毒的外植體置于無菌的培養(yǎng)皿中，用無菌濾紙吸去表面的水分。用解剖刀將外植體切成0.5~1cm長的小段。①用酒精擦拭雙手和超凈工作臺臺面。將流水充分沖洗后的外植體（幼嫩的莖段）用酒精消毒30s，然后立即用無菌水清洗2~3次；再用次氯酸鈉溶液處理30min后，立即用無菌水清洗2~3次。⑤培養(yǎng)15~20d⑤培養(yǎng)15~20d后，將生長良好的愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導生芽的培養(yǎng)基上。長出芽后，再將其轉(zhuǎn)移到誘導生根的培養(yǎng)基上，進一步誘導形成試管苗。=6\*GB3⑥移栽前先打開封口膜或瓶蓋，讓試管苗在培養(yǎng)箱內(nèi)生長幾日。用流水清洗掉根部的培養(yǎng)基后，將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中，待其長壯后再移栽入土。每天觀察并記錄幼苗的生長情況，適時澆水、施肥，直至開花。④將接種了外植體的錐形瓶或植物組織培養(yǎng)瓶置于18~22℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中，定期觀察和記錄愈傷組織的生長情況。四．深化拓展提能1．植物組織培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)的比較比較項目植物組織培養(yǎng)植物細胞培養(yǎng)利用原理細胞全能性細胞增殖培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)對象離體的植物器官、組織、細胞或原生質(zhì)體由愈傷組織分散得到的懸浮細胞培養(yǎng)過程外植體→脫分化→再分化→芽、根或胚狀體→植物幼苗愈傷組織→分散成懸浮細胞→繼代培養(yǎng)→細胞代謝產(chǎn)物培養(yǎng)目的植物幼苗細胞的代謝產(chǎn)物二者關(guān)系植物細胞培養(yǎng)是植物組織培養(yǎng)的基礎(chǔ)；它們都屬于植物細胞工程的范疇2.比較植物組織培養(yǎng)和植物體細胞雜交名稱植物組織培養(yǎng)植物體細胞雜交原理細胞的全能性細胞膜具有一定的流動性和細胞的全能性過程五．鞏固提升1．下列關(guān)于菊花組織培養(yǎng)的敘述，正確的是（

）A．用自然生長的莖進行組培須用適宜濃度的乙醇和次氯酸鈉的混合液消毒B．培養(yǎng)瓶用專用封口膜封口可防止外界雜菌侵入并阻止瓶內(nèi)外的氣體交換C．組培苗鍛煉時采用蛭石作為栽培基質(zhì)的原因是蛭石帶菌量低且營養(yǎng)豐富D．不帶葉片的菊花幼莖切段可以通過器官發(fā)生的途徑形成完整的菊花植株【答案】D【詳解】A、自然生長莖段的消毒屬于外植體消毒，先用70%酒精，再用無菌水清洗，再用5%次氯酸鈉消毒處理，最后再用無菌水清洗，A錯誤；B、培養(yǎng)瓶用專用封口膜封口的目的是防止雜菌污染，并不影響氣體交換，B錯誤；C、組培苗鍛煉時采用蛭石作為栽培基質(zhì)的原因是蛭石比較松軟，持水性也較好，有利于幼苗的生根和葉片的生長，C錯誤；D、不帶葉片的菊花莖的切段可通過植物組織培養(yǎng)分化出芽和根這種器官發(fā)生的途徑形成完整的菊花植株，D正確。故選D。2．農(nóng)作物秸稈的回收利用方式很多，其中之一是將秸稈碎化后作為食用菌的栽培基質(zhì)。碎化秸稈中纖維所起的作用，相當于植物組織培養(yǎng)中固體培養(yǎng)基的（

）A．瓊脂+蔗糖 B．蔗糖+激素 C．激素+無機鹽 D．無機鹽+瓊脂【答案】A【詳解】據(jù)題干的信息，“秸稈碎化后作為食用菌的栽培基質(zhì)”，秸稈中的纖維素在食用菌菌絲生長過程中大量降解，提供碳源和能源，這相當于植物組織培養(yǎng)基中添加的蔗糖；秸稈中的纖維素是固體，可以作為培養(yǎng)基的支持物，使培養(yǎng)基呈固體狀態(tài)，這相當于植物組織培養(yǎng)基中添加的瓊脂。故選A。3．植物組織培養(yǎng)技術(shù)常用于商業(yè)化生產(chǎn)：其過程一般為:無菌培養(yǎng)物的建立→培養(yǎng)物增殖→生根培養(yǎng)→試管苗移栽及鑒定。下列相關(guān)敘述錯誤的是（

）A．為獲得無菌培養(yǎng)物，外植體要消毒處理后才可接種培養(yǎng)B．組織培養(yǎng)過程中也可無明顯愈傷組織形成，直接形成胚狀體等結(jié)構(gòu)C．提高培養(yǎng)基中生長素和細胞分裂素的比值，有利于誘導生根D．用同一植株體細胞離體培養(yǎng)獲得的再生苗不會出現(xiàn)變異【答案】D【詳解】A、植物組織培養(yǎng)過程中應(yīng)注意無菌操作，為獲得無菌培養(yǎng)物，外植體要經(jīng)過表面消毒處理后，才能進行培養(yǎng)，所用的培養(yǎng)基必須徹底滅菌，A正確；B、組織培養(yǎng)過程中也可無明顯愈傷組織形成，直接形成胚狀體等結(jié)構(gòu)，胚狀體若包裹上人工種皮，可制作成人工種子，B正確；C、生長素和細胞分裂素的比值高時，有利于根的分化、抑制芽的形成，因此提高培養(yǎng)基中生長素和細胞分裂素的比值，有利于誘導生根，C正確；D、用同一植株體細胞離體培養(yǎng)獲得的再生苗會出現(xiàn)變異，如在愈傷組織的培養(yǎng)過程中可能發(fā)生基因突變等變異，D錯誤。故選D。4．某二倍體植物是雜合子，圖為其花藥中未成熟花粉在適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)產(chǎn)生完整植株的過程。據(jù)圖回答：(1)圖中①表示的是該花粉培養(yǎng)過程中的_____________過程，②表示的是__________過程，X代表的是_______________，③表示的是_____________過程，④表示的是誘導_____________過程。(2)圖中從愈傷組織形成完整植株的途徑有兩條，具體通過那一條途徑主要取決于培養(yǎng)基成分中______________的種類及其濃度配比，最后獲得的來源于為成熟花粉的完整植株都稱為___________________植株（甲）。未成熟花粉經(jīng)培養(yǎng)能形成完整植株，說明為成熟花粉具有___________________。(3)對植株進行_____________，才能使其結(jié)實產(chǎn)生后代（乙），否則植株甲只有通過___的方式才能產(chǎn)生后代（丙）。乙、丙兩種植株中，能產(chǎn)生可育花粉的是____植株，該植株群體中每一植株產(chǎn)生可育花粉的基因組成種類數(shù)為_____________種，該群體植株產(chǎn)生可育花粉的基因組成種類數(shù)為____________種?；ㄋ幣囵B(yǎng)在育種上的特殊意義是____________，從而開辟育種新途徑?！敬鸢浮?/p>

脫分化

再分化

胚狀體

分化（發(fā)育）

生根

激素

單倍體

細胞的全能性

染色體加倍

無性繁殖

乙

一

多

縮短育種年限【詳解】（1）此過程即植物組織培養(yǎng)過程。①為脫分化過程，②為再分化過程，X代表胚狀體，③表示分化過程，④表示誘導生根過程。（2）激素主要是生長素和細胞分裂素，當生長素含相對較高，易生根，當細胞分裂素含量較高，易生芽。花粉中含有精子，直接由配子發(fā)育成的生物都稱為單倍體。一個細胞能發(fā)育成完整個體，就說明此細胞具有全能性。（3）甲是單倍體，植株甲只有通過無性繁殖的方式才能產(chǎn)生后代，通過染色體數(shù)目加倍，使植株乙可育，這樣的植株都是純合子，因此基因型只有一種；因不同染色體之間可以自由組合，因此可以組合出很多種配子。這種育種方法稱為單倍體育種，因能快速獲得純合子，因此可以縮短育種年限。

實驗32：DNA的粗提取與鑒定一．實驗原理DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學性質(zhì)方面存在差異，可以利用這些差異，選用適當?shù)姆椒▽λ鼈冞M行提取。例如，DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精，利用這一原理，可以初步分離。DNA在不同濃度的中溶解度不同，它能溶于。在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)，因此可以作為鑒定DNA的試劑。

答案：物理或化學、DNA與蛋白質(zhì)、NaCl溶液、2mol/L的NaCl溶液、藍色、二苯胺試劑二．目的要求1.了解DNA的物理和化學性質(zhì)，理解DNA粗提取和鑒定的原理。2.學會DNA粗提取的方法以及用二苯胺試劑對DNA進行鑒定。

三．方法步驟1．稱取約30g洋蔥，切碎，然后放入研缽中，倒入10mL，充分研磨。2.在漏斗中墊上，將洋蔥研磨液過濾到燒杯中，在冰箱中放置幾分鐘后，再取。也可以直接將研磨液倒入塑料離心管中，在的轉(zhuǎn)速下離心5min，再取上清液放入燒杯中。3.在上清液中加入體積相等的、預(yù)冷的溶液（體積分數(shù)為），靜置2~3min，溶液中出現(xiàn)的就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一個方向攪拌，卷起絲狀物，并用吸去上面的水分；或者將溶液倒入塑料離心管中，在10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，棄上清液，將管底的（粗提取的DNA）晾干。4.取兩支20mL的試管，各加入溶液中。然后，向兩支試管中各加入4mL的試劑?；旌暇鶆蚝?，將試管置于中加熱5min。待試管冷卻后，比較兩支試管中溶液顏色的變化。

答案：研磨液、紗布、4℃、上清液、1500r/min、酒精、95%、白色絲狀物、濾紙、沉淀物、2mol/L的NaCl、二苯胺、沸水四．歸納DNA粗提取中的注意事項(1)本實驗不能用哺乳動物成熟的紅細胞作實驗材料，原因是哺乳動物成熟的紅細胞無細胞核(無DNA)。(2)二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會影響鑒定的效果。(3)在DNA進一步提純時，選用冷卻的95%的酒精的作用是溶解雜質(zhì)和析出DNA。五．鞏固提升1．關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實驗，下列說法錯誤的是（

）A．過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了防止DNA降解B．離心研磨液是為了加速DNA的沉淀C．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍色D．粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)【答案】B【詳解】A、低溫時DNA酶的活性較低，過濾液沉淀過程在4℃冰箱中進行是為了防止DNA降解，A正確；B、離心研磨液是為了使細胞碎片沉淀，B錯誤；C、在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺試劑呈現(xiàn)藍色，C正確；D、細胞中的某些蛋白質(zhì)可以溶解于酒精，可能有蛋白質(zhì)不溶于酒精，在95%的冷酒精中與DNA一塊兒析出，故粗提取的DNA中可能含有蛋白質(zhì)，D正確。故選B。2．下列關(guān)于洋蔥DNA粗提取與鑒定的敘述，正確的是（

）A．利用DNA溶于酒精的原理可初步分離DNA與蛋白質(zhì)B．研磨液中的SDS能瓦解細胞膜并增加DNA在NaCl溶液中的溶解度C．將洋蔥研磨液倒入塑料離心管內(nèi)，離心后棄去上清液D．在一定溫度下，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色【答案】D【詳解】A、DNA不溶于酒精溶液，但細胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精，可將DNA與蛋白質(zhì)分離，A錯誤；B、研磨液中的SDS能瓦解細胞膜，但不能增加DNA在NaCl溶液中的溶解度，B錯誤；C、將洋蔥研磨液倒入塑料離心管內(nèi)，應(yīng)保留上清液，C錯誤；D、在一定溫度（水?。┫?，DNA遇二苯胺試劑會呈現(xiàn)藍色，D正確。故選D。3．（多選）下列關(guān)于“DNA的粗提取與鑒定”實驗敘述，錯誤的是（

）A．酵母和菜花均可作為提取DNA的材料B．DNA既溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸餾水C．向雞血細胞液中加蒸餾水攪拌，可見玻棒上有白色絮狀物D．DNA溶液加入二苯胺試劑沸水浴加熱，冷卻后變紫【答案】CD【詳解】A、理論上只要含有DNA的生物組織均可作為該實驗的材料，因此酵母和菜花均可作為提取DNA的材料，A正確；B、DNA既可溶于2mol/LNaCl溶液也溶于蒸餾水，B正確；C、向雞血細胞液中加蒸餾水攪拌，可使破裂細胞，釋放DNA，但不會觀察到玻璃棒上有白色絮狀物，C錯誤；D、DNA溶液加入二苯胺試劑沸水浴加熱，冷卻后變藍，D錯誤。故選CD。4．（多選）如圖為DNA的粗提取與鑒定實驗的部分操作流程。下列相關(guān)敘述錯誤的是（

）A．將圖1中的研磨液過濾后保留沉淀B．圖2過程，用玻璃棒進行交叉攪拌會使DNA析出更快C．圖2析出得到的白色絲狀物只能溶于2mol/L的NaCl溶液中D．圖3對提取后的DNA進行鑒定，兩支試管中均要加入二苯胺試劑【答案】ABC【詳解】A、將圖1中的研磨液過濾后應(yīng)保留上清液，A錯誤；B、圖2過程，用玻璃棒攪拌要輕輕攪拌且沿同一方向進行，防止DNA分子被弄斷，B錯誤；C、圖2析出得到的白色絲狀物主要成分是DNA，DNA在NaCl溶液中的溶解度，是隨著NaCl的濃度變化而改變的，不是只能溶于2mol/L的NaCl溶液中，C錯誤；D、圖3對提取后的DNA進行鑒定，兩支試管中均要加入二苯胺試劑，另一個作為對照組，D正確。故選ABC。5．方法步驟：（1）_____________：取30g洋蔥切碎，倒入10mL研磨液研磨。（2）_____________：漏斗中墊上__________過濾后，在_______℃冰箱_______后取上清液，1500r/min的轉(zhuǎn)速下_______后取________________。（3）__________：加入體積相等、體積分數(shù)_______________，溶液出現(xiàn)______________________是DNA。方法一：用玻璃杯按_______（填“一個”或“兩個”）方向攪拌，卷起_________________________，用_______吸去上面的水分。方法二：10000r/min的轉(zhuǎn)速下離心5min，取____________晾干。（4）鑒定：項目AB

2mol/L的Nacl溶液5mL絲狀物或沉淀物不加加入

二苯胺試劑4mL沸水中加熱5分鐘現(xiàn)象

_______________________DNA的鑒定和還原糖的鑒定都需要加熱，它們有什么不同？還原糖加斐林試劑后，置于______________℃熱水中加熱；而DNA加二苯胺試劑后，置于_______中加熱。【答案】

研磨

除雜

紗布

4

置后

離心

上清液

提取

95%酒精

白色的絲狀物

一個

絲狀物

濾紙

沉淀物

無色

藍色

55～65

沸水實驗33：DNA片段的擴增及電泳一．實驗原理利用PCR可以在體外進行DNA片段的擴增。PCR利用了原理，通過調(diào)節(jié)溫度來控制DNA雙鏈的。PCR儀實質(zhì)上就是一臺能夠的儀器。一次PCR一般要經(jīng)歷次循環(huán)。DNA分子具有可解離的基團，在一定的下，這些基團可以帶上正電荷或負電荷。在電場的作用下，這些帶電分子會向著與它所帶電荷的電極移動，這個過程就是。PCR的產(chǎn)物一般通過來鑒定。在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小和構(gòu)象等有關(guān)。凝膠中的DNA分子通過，可以在波長為300nm的下被檢測出來。答案：DNA的熱變性、解聚與結(jié)合、自動調(diào)控溫度、30、pH、相反、電泳、瓊脂糖凝膠電泳、染色、紫外燈二．目的要求1.了解PCR和電泳鑒定的基本原理。2.嘗試進行PCR的基本操作并用電泳鑒定PCR的產(chǎn)物。三．方法步驟1.用微量移液器按照下欄中的配方或PCR試劑盒的說明書，在微量離心管中依次加入各組分。2.待所有的組分都加入后，蓋嚴離心管的蓋子。將微量離心管放入離心機里，離心約10s，使反應(yīng)液集中在管的底部。3.參照下表的參數(shù)，設(shè)置好PCR儀的循環(huán)程序。將裝有反應(yīng)液的微量離心管放入PCR儀中進行反應(yīng)。4.根據(jù)待分離DNA片段的大小，用電泳緩沖液配制瓊脂糖溶液，一般配制質(zhì)量體積比為0.8%~1.2%的瓊脂糖溶液。在沸水浴或微波爐內(nèi)加熱至瓊脂糖熔化。稍冷卻后，加入適量的核酸染料混勻。5.將溫熱的瓊脂糖溶液迅速倒入模具，并插入合適大小的梳子，以形成加樣孔。6.待凝膠溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝膠放入電泳槽內(nèi)。7.將電泳緩沖液加入電泳槽中，電泳緩沖液沒過凝膠1mm為宜。8.將擴增得到的PCR產(chǎn)物與凝膠載樣緩沖液（內(nèi)含指示劑）混合，再用微量移液器將混合液緩慢注入凝膠的加樣孔內(nèi)。留一個加樣孔加入分子大小的標準參照物。9.接通電源，根據(jù)電泳槽陽極至陰極之間的距離來設(shè)定電壓，一般為1~5V/cm。待指示劑前沿遷移接近凝膠邊緣時，停止電泳。10.取出凝膠置于紫外燈下觀察和照相。

四．注意1.為避免外源DNA等因素的污染，PCR實驗中使用的微量離心管、槍頭和蒸餾水等在使用前必須進行高壓滅菌處理。2.該實驗所需材料可以直接從公司購買，緩沖液和酶應(yīng)分裝成小份，并在-20℃儲存。使用前，將所需試劑從冰箱拿出，放在冰塊上緩慢融化。3.在向微量離心管中添加反應(yīng)組分時，每