GMP中潔凈室塵埃數(shù)和微生物數(shù)的監(jiān)測（藥品生物檢定）

GMP中潔凈室（區(qū)）概述

GMP（goodmanufacturingpracticefordrugs），即藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范，是當今國際社會通行的藥品生產(chǎn)和質(zhì)量必須遵循的基本準則。

國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局和國家標準化管理委員會于2010年9月2日發(fā)布了醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、沉降菌和浮游菌測試的國家標準－GB/T16292～16294－2010，該標準于2011年2月1日起正式實施。1.潔凈室（區(qū)）對塵粒及微生物污染規(guī)定需進行環(huán)境控制的房間或區(qū)域。2.菌落系微生物培養(yǎng)后，由1個或幾個微生物繁殖而形成的微生物集落，簡稱cfu。3.浮游菌用標準提及的方法收集懸浮在空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。4.浮游菌濃度單位體積空氣中含浮游菌菌落數(shù)的多少，以計數(shù)濃度表示，單位是個/m3或個/L。5.懸浮粒子用于空氣潔凈度分級的空氣懸浮粒子尺寸范圍在0.1~1000μm的固體和液體粒子。一、基本概念6.沉降菌用標準提及的方法收集空氣中的活微生物粒子，通過專門的培養(yǎng)基，在適宜的生長條件下繁殖到可見的菌落數(shù)。7.單向流沿單一方向呈平行流線并且與氣流方向垂直的斷面上風速均勻的氣流。與水平面垂直的叫垂直單向流，與水平面平行的叫水平單向流。8.置信上限（95%UCL）從正態(tài)分布抽樣得到的實際均值按給定的置信度（此處為95%）計算得到的估計上限將大于此實際均值，則稱計算得到的這一均值估計上限為置信上限。二、空氣潔凈度標準空氣潔凈度是指潔凈環(huán)境中空氣的（微粒）程度。含塵濃度高則潔凈度低，含塵濃度低則潔凈度高。藥品生產(chǎn)所需各級別潔凈區(qū)的懸浮粒子及微生物標準（2010版GMP）潔凈度級別懸浮粒子最大允許數(shù)/立方米浮游菌CFU/m3沉降菌90mmCFU/4h表面微生物靜態(tài)動態(tài)接觸55mmCFU/碟5指手套CFU/手套≥0.5μm≥5.0μm≥0.5μm≥5.0μmA級352020352020

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1B級352029352000290010555C級35200029003520000290001005025－D級352000029000不作規(guī)定不作規(guī)定20010050－空氣潔凈度的測試方法1.測試依據(jù)

《中華人民共和國國家標準醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子測試方法》（GB/T16292－2010）一、懸浮粒子的測定2.測試儀器光散射粒子計數(shù)器激光粒子計數(shù)器（右圖）手持式塵埃粒子計數(shù)器3.測試方法潔凈區(qū)（室）懸浮粒子采用計數(shù)濃度法測試，即通過測定潔凈區(qū)環(huán)境內(nèi)單位體積空氣中含大于或等于某粒徑的懸浮粒子數(shù)，來評定潔凈室（區(qū)）懸浮粒子潔凈度等級。4.測試規(guī)則（1）測試條件：溫度、濕度應(yīng)與生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)，如無特殊要求，溫度控制在18～26℃，相對濕度控制在45％～65%之間為宜。（2）測試狀態(tài)：空態(tài)、靜態(tài)和動態(tài)均可。測試報告中應(yīng)標明所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù)。（3）測試時間：①空態(tài)、靜態(tài)a：單向流潔凈室（區(qū)），凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10分鐘后開始；非單向流潔凈室（區(qū)），不少于30分鐘后開始。②靜態(tài)b：單向流潔凈室（區(qū)），在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10分鐘自凈后開始；非單向流潔凈室（區(qū)），20分鐘自凈后開始。③動態(tài)：須記錄生產(chǎn)開始的時間及測試時間。5.測試步驟（1）采樣①最少采樣點數(shù)目方法一：按下列公式計算。

式中：NL為最少采樣點；A為潔凈室或被控潔凈區(qū)的面積，單位為平方米（m2）。方法二：最少采樣點數(shù)目可以查下表確定。面積S（m2）潔凈度級別10010000100000300000S＜102～322210≤S＜20422220≤S＜40822240≤S＜10016422100≤S＜200401033200≤S＜400802066400≤S＜10001604013131000≤S＜20004001003232≥20008002006363最少采樣點數(shù)目②采樣點的布置：采樣點一般在離地面0.8m高度的水平面上均勻布置。采樣點多于5點時，也可以在離地面0.8～1.5m高度的區(qū)域內(nèi)分層布置，但每層不少于5點。采樣布置圖（圖3-2）氣流形式

（圖3-3、3-4）圖3-2平面采樣點布置圖圖3-3水平單向流氣流形式

圖3-4垂直單向流氣流形式

③采樣次數(shù)的限定對任何小潔凈室（區(qū)）或局部空氣凈化區(qū)域，采樣點的數(shù)目不得少于2個，總采樣次數(shù)不得少于5次。每個采樣點的采樣次數(shù)可以多于1次，且不同采樣點的采樣次數(shù)可以不同。④采樣量潔凈度級別采樣量，L/次≥0.5μm≥5μm1005.668.5100002.838.51000002.838.53000002.838.5不同潔凈度級別每次最小的采樣量（2）結(jié)果計算①采樣點的平均懸浮粒子濃度按下列公式計算。

A為某一采樣點的平均粒子濃度，粒/m3；Ci為某一采樣點的粒子濃度（i=1，2，…，n），粒/m3；N為某一采樣點上的采樣次數(shù)，次。②潔凈室平均粒子濃度按下列公式計算。

M為平均值的均值，即潔凈室（區(qū)）的平均粒子濃度，粒/m3；Ai為某一采樣點的平均粒子濃度（i=1，2，…，L），粒/m3；L為采樣點數(shù)目。③標準差按下列公式計算。

SE為平均值均值的標準誤差，粒/m3。④95％置信上限（UCL）按下列公式計算。

UCL為平均值均值的95%置信上限，粒/m3；t為95％置信上限的t分布系數(shù)。（3）結(jié)果評定判斷懸浮粒子潔凈度級別應(yīng)依據(jù)下述兩個條件：①每個采樣點的平均粒子濃度必須不大于規(guī)定的級別界限，即Ai≤級別界限；②全部采樣點的粒子濃度平均值均值的95%置信上限必須不大于規(guī)定的級別界限，即UCL≤級別界限。6.注意事項壓差達到要求后方可采樣。單向流潔凈室，塵埃計數(shù)器采樣管口朝向應(yīng)正對氣流方向；非單向流潔凈室，采樣管口垂直向上。布置采樣點時，應(yīng)避開回風口。采樣時測試人員應(yīng)站在采樣口的下風側(cè)。為確認A級潔凈區(qū)的級別，每個采樣點的采樣量不得少于1立方米。確認級別時，應(yīng)當使用采樣管較短的便攜式粒子計數(shù)器。動態(tài)測試可在常規(guī)操作、培養(yǎng)基模擬灌裝過程中進行，但培養(yǎng)基模擬灌裝試驗要求在“最差狀況”下進行動態(tài)測試。

7.日常監(jiān)測8.懸浮粒子測試報告測試單位環(huán)境溫度（℃）相對濕度（％）靜壓差（Pa）測試依據(jù)測試項目懸浮粒子檢驗結(jié)果檢驗結(jié)論：檢驗人：復(fù)核人：

檢驗日期：區(qū)域編號潔凈度級別懸浮粒子≥0.5μm（粒/m3）≥5μm（粒/m3）

1.測試依據(jù)《中華人民共和國國家標準醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）沉降菌測試方法》（GB/T16294－2010）二、沉降菌的測定2025/1/2227

2.測試方法采用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落進行計數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來判定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈室（區(qū)）的潔凈度。2025/1/22283.測試儀器（1）培養(yǎng)皿：90mm×15mm。（2）培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培養(yǎng)基（SDA）。恒溫培養(yǎng)箱。（3）高壓蒸汽滅菌器。

2025/1/22294.測試規(guī)則（1）測試條件：溫度、濕度應(yīng)與生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)，如無特殊要求，溫度控制在18～26℃，相對濕度控制在45％～65%之間為宜。（2）測試狀態(tài)：靜態(tài)和動態(tài)均可。2025/1/2230（3）測試時間

靜態(tài)a：單向流潔凈室（區(qū)），凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10分鐘后開始；非單向流潔凈室（區(qū)），不少于30分鐘后開始。

靜態(tài)b：單向流潔凈室（區(qū)），在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10分鐘自凈后開始；非單向流潔凈室（區(qū)），20分鐘自凈后開始。

動態(tài)：須記錄生產(chǎn)開始的時間及測試時間。5.測試步驟（1）培養(yǎng)基嚴格消毒。（2）采樣：將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點布置圖逐個放置，然后從里到外逐個打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露在空氣中。靜態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為30分鐘以上；動態(tài)測試時，培養(yǎng)皿暴露時間為不大于4小時。①最少采樣點數(shù)目可參考懸浮粒子測試方法。②采樣點的位置可參考懸浮粒子測試方法。③最少培養(yǎng)皿數(shù)（下表）。④采樣次數(shù)：每個采樣點一般采樣一次。潔凈度級別所需90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降0.5小時計）1001410000210000023000002最少培養(yǎng)皿數(shù)（3）培養(yǎng)全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用TSA配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2天；采用SDA配制的培養(yǎng)基經(jīng)采樣后，在20～25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于5天。每批培養(yǎng)基應(yīng)有對照試驗，檢驗培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。（4）菌落計數(shù)用肉眼對培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計數(shù)、標記或在菌落計數(shù)器上點計，然后用5～10倍放大鏡檢查，有否遺漏。若平板上有2個或2個以上的菌落重疊，可分辨時仍以2個或2個以上菌落計數(shù)。（5）結(jié)果計算平均菌落數(shù)按下列公式計算。

為平均菌落數(shù)；m1為1號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；m2為2號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；mn為n號培養(yǎng)皿菌落數(shù)；n為培養(yǎng)皿總數(shù)。（6）結(jié)果評定用平均菌落數(shù)判斷潔凈室（區(qū)）空氣中的微生物。每個測試點的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評定標準。在靜態(tài)測試時，若某測點的沉降菌平均菌落數(shù)超過評定標準，則應(yīng)重新采樣兩次，兩次測試結(jié)果均合格才能判為符合。6.注意事項測試用具要做滅菌處理。防止人為對樣本的污染。計數(shù)時不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，并注意細菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時用顯微鏡鑒別。采樣。對照試驗。7.日常監(jiān)測8.沉降菌測試報告測試單位環(huán)境溫度（℃）相對濕度（％）靜壓差（Pa）培養(yǎng)基批號培養(yǎng)溫度測試依據(jù)測試項目沉降菌檢驗結(jié)論：檢驗人：復(fù)核人：

檢驗日期：項目送風口工作區(qū)采樣點編號采樣速率采樣量（m3）開始時間菌落數(shù)（CFU）平均濃度1.測試依據(jù)《中華人民共和國國家標準醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）浮游菌測試方法》（GB/T16293－2010）三、浮游菌的測定2025/1/22402.測試方法采用計數(shù)濃度法，即通過收集懸浮在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇能證實其能夠支持微生物生長的培養(yǎng)基）上，經(jīng)規(guī)定時間的培養(yǎng)，在適宜的生長條件下讓其繁殖到可見的菌落，然后進行計數(shù)，從而判定該潔凈室的微生物濃度。2025/1/22413.測試儀器浮游菌采樣器培養(yǎng)皿：90mm×15mm培養(yǎng)基：TSA或SDA恒溫培養(yǎng)箱高壓蒸汽滅菌器浮游菌采樣器2025/1/22424.測試規(guī)則（1）測試條件：溫度、濕度應(yīng)與生產(chǎn)及工藝要求相適應(yīng)，如無特殊要求，溫度控制在18～26℃，相對濕度控制在45％～65%之間為宜。（2）測試狀態(tài)：靜態(tài)和動態(tài)均可。2025/1/2243（3）測試時間

靜態(tài)a：單向流潔凈室（區(qū)），凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于10分鐘后開始；非單向流潔凈室（區(qū)），不少于30分鐘后開始。

靜態(tài)b：單向流潔凈室（區(qū)），在生產(chǎn)操作人員撤離現(xiàn)場并經(jīng)過10分鐘自凈后開始；非單向流潔凈室（區(qū)），20分鐘自凈后開始。

動態(tài)：須記錄生產(chǎn)開始的時間及測試時間。5.測試步驟（1）培養(yǎng)基、儀器嚴格消毒。（2）采樣①最少采樣點數(shù)目可參考懸浮粒子測試方法。②采樣點的位置可參考懸浮粒子測試方法。③最少采樣量（下表）。④采樣次數(shù)：每個采樣點一般采樣一次。潔凈度級別采樣量（L/次）100100010000500100000100300000100（3）培養(yǎng)全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。采用TSA配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時間不少于2天；采用