中藥鑒定DNA分子標(biāo)記在中藥品種鑒定中的運(yùn)用

DNA分子標(biāo)識(shí)在中藥物種

鑒定中的運(yùn)用指導(dǎo)老師：謝冬梅老師小組組員：趙維波劉萬冬朱婷周孟凡周悅4月14日匯報(bào)內(nèi)容1、研究背景2、DNA分子標(biāo)識(shí)的簡(jiǎn)介3、DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)措施的簡(jiǎn)介4、在中藥物種鑒定中的運(yùn)用5、小結(jié)6、展望1研究背景中藥的精確鑒定波及到人民的生命安全和切身利益。老式的鑒定措施存在著不一樣程度的局限性，近年來，伴隨分子生物學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，DNA分子標(biāo)識(shí)的新技術(shù)不停涌現(xiàn)，DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)憑借著特異性強(qiáng)、精確、迅速、微量、可靠等特點(diǎn)，在中藥物種鑒定中展現(xiàn)了廣闊的應(yīng)用前景。2DNA分子標(biāo)識(shí)的簡(jiǎn)介分子標(biāo)識(shí)的定義：廣義的分子標(biāo)識(shí)是指可遺傳的并可檢測(cè)的DNA序列或蛋白質(zhì)。狹義分子標(biāo)識(shí)是指能反應(yīng)生物個(gè)體或種群間基因組中某種差異的特異性DNA片段。分子標(biāo)識(shí)的類別：根據(jù)目的基因所在細(xì)胞器的不一樣可分為核DNA標(biāo)識(shí)、線粒體DNA標(biāo)識(shí)和葉綠體DNA標(biāo)識(shí)。適用于動(dòng)物的起源進(jìn)化、親緣關(guān)系、遺傳變異、物種鑒別等研究線粒體DNA適用于高等植物的親緣關(guān)系、物種鑒別等研究核DNA與葉綠體DNA3DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)定義：DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)，也稱DNA分子診斷技術(shù)，是指通過直接分析遺傳物質(zhì)的多態(tài)性來診斷生物內(nèi)在基因排布規(guī)律及其外在性狀體現(xiàn)規(guī)律的技術(shù)。DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)的特點(diǎn)不受組織類別、發(fā)育階段等影響。取材不受限制。不受環(huán)境影響。由于環(huán)境只影響基因的體現(xiàn)轉(zhuǎn)錄與翻譯，而不影響基因構(gòu)造。數(shù)量多且多態(tài)性高。具有共顯性，可以鑒別純種和雜合基因。簡(jiǎn)樸、迅速、易于自動(dòng)化。常用的DNA分標(biāo)識(shí)技術(shù)分類基本原理技術(shù)名稱特點(diǎn)適用范圍以電泳技術(shù)和

分子雜交技術(shù)為核心的DNA標(biāo)記技術(shù)RFLP分子標(biāo)記技術(shù)具極大的豐富性、共顯性、具穩(wěn)定性、分析簡(jiǎn)單等研究屬種,甚至品種的親緣關(guān)系、系統(tǒng)發(fā)育與演化以電泳技術(shù)和PCR技術(shù)為基礎(chǔ)的DNA分子標(biāo)記技術(shù)RAPD分子標(biāo)記技術(shù)具有廣泛性和通用性、簡(jiǎn)便易行研究種、亞種,鑒別栽培種與野生種AFLP標(biāo)記技術(shù)多態(tài)性強(qiáng),穩(wěn)定性強(qiáng),重復(fù)性高重復(fù)順序標(biāo)記技術(shù)信息量大,結(jié)果重復(fù)性好DNA序列直接測(cè)定法DNA序列直接測(cè)定技術(shù)簡(jiǎn)便迅速研究植物的分類鑒別和親緣關(guān)系DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)原理以RAPD為例簡(jiǎn)要簡(jiǎn)介DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)的原理、操作過程及成果分析。原理：RAPD是建立在PCR基礎(chǔ)之上的一種可對(duì)整個(gè)未知序列的基因組進(jìn)行多態(tài)性分析的分子技術(shù)。其以基因組DNA為模板，以單個(gè)人工合成的隨機(jī)多態(tài)核苷酸序列為引物，在熱穩(wěn)定的DNA聚合酶作用下，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖或聚丙烯酰胺電泳分離、溴化乙錠染色后，在紫外透視儀上檢測(cè)多態(tài)性。擴(kuò)增產(chǎn)物的多態(tài)性反應(yīng)了基因組的多態(tài)性。操作過程成果分析DNA的提取模板DNA濃度和質(zhì)量的檢測(cè)電泳檢測(cè)用EB處理、觀察、拍照系統(tǒng)分析DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)的運(yùn)用狀況措施：以常用中藥材名稱和分子標(biāo)識(shí)技術(shù)為關(guān)鍵詞，搜索CNKI文庫(kù)中的中文文獻(xiàn)，并進(jìn)行分類記錄。記錄成果技術(shù)方法PCR擴(kuò)增、測(cè)序RAPD-PCR擴(kuò)增位點(diǎn)特異性PCRISSR-PCR其他總和篇數(shù)7817963116以PCR擴(kuò)增、測(cè)序?yàn)殍b別措施的部分常用中藥分類藥材藥用部位藥材名稱藥材或飲片來源標(biāo)記序列對(duì)應(yīng)鑒別藥材植物類植物類植物類植物類植物類植物類植物類植物類植物類植物類菌類動(dòng)物類動(dòng)物類動(dòng)物類動(dòng)物類根基根莖類根及根莖類根及根莖類莖木類莖木類葉類皮類花類全草類果實(shí)及種子類巴戟天柴胡大黃雞血藤川木通石韋牡丹皮西紅花石斛地膚子靈芝烏鞘蛇阿膠海馬羚羊角巴戟天野生柴胡藥用大黃密花豆小木通、繡球藤石韋牡丹番紅花束花石斛地膚血芝烏鞘蛇驢皮小海馬羚羊角ITS標(biāo)記序列ITS標(biāo)記序列SRAP標(biāo)記序列ITS標(biāo)記序列ITS標(biāo)記序列葉綠體序列ITS標(biāo)記序列ITS標(biāo)記序列ITS標(biāo)記序列ITS2標(biāo)記序列18SRNA序列12SRNA序列12SRNA序列12SRNA序列特異性引物羊角藤、虎刺栽培柴胡掌葉大黃、唐古拉大黃香花崖豆藤、大血藤女萎、短尾鐵線蓮廬山石韋川赤芍、芍藥番紫花、菊花流蘇石斛荊芥、草木犀其他靈芝紅點(diǎn)錦蛇牛皮、馬皮三斑海馬山羊角標(biāo)識(shí)的選擇標(biāo)識(shí)選擇是篩選用于中藥分子鑒別DNA標(biāo)識(shí)的前提。常用于植物鑒別的基因標(biāo)識(shí)序列有：rbcL、ITS、matK、psbA-trnH、trnL-trnF動(dòng)物鑒別的片段重要用COI基因片段。品種鑒定中標(biāo)識(shí)序列的應(yīng)用狀況4在中藥物種鑒定中的運(yùn)用在中藥種類的分布在植物藥中的分布在中藥物種鑒定中的運(yùn)用一、鑒定近緣中藥物種有關(guān)學(xué)者對(duì)美洲東部的西洋參、三葉人參進(jìn)行基因分析后，發(fā)現(xiàn)西洋參與東亞種人參、竹節(jié)參、三七具有更近的親緣關(guān)系。二、鑒定動(dòng)物類中藥物種DNA標(biāo)識(shí)技術(shù)不僅能對(duì)動(dòng)物藥整體、破碎的組織進(jìn)行精確的鑒定，還能對(duì)動(dòng)物粉末、體液、分泌物、排泄物入藥的中藥或中藥制劑進(jìn)行有效的真?zhèn)舞b定。王建云運(yùn)用PCR技術(shù)精確的鑒別雞內(nèi)金和鴨內(nèi)金。在中藥物種鑒定中的運(yùn)用三、鑒定藥材的地道性道地藥材與非道地藥材物種來源、形態(tài)、顯微及化學(xué)成分等特性上具有高度相似性,因而不易鑒定，而DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)從群居和分子水平上闡明藥材的地道性。陳永久運(yùn)用RAPD技術(shù)研究冬蟲夏草在不一樣群體間遺傳分化現(xiàn)象，同一地區(qū)樣品差異甚微而不一樣地區(qū)樣品差異甚大。在中藥物種鑒定中的運(yùn)用四、鑒定中藥野生與栽培品種栽培品種在長(zhǎng)期的人工選擇與馴化作用，其生物性狀、品質(zhì)發(fā)生一定的變化。而市場(chǎng)上以栽培品充當(dāng)野生品的現(xiàn)象屢見不鮮，僅靠老式鑒別很難辨別。DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)則展示其良好的運(yùn)用前景。馬小等用RAPD、AFLP標(biāo)識(shí)對(duì)園參與山參的研究發(fā)現(xiàn)，該技術(shù)可用于栽培品與野生品的鑒定。5小結(jié)現(xiàn)實(shí)狀況DNA分子遺傳標(biāo)識(shí)技術(shù)在中藥鑒定及其有關(guān)研究方面具有獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)和廣闊的應(yīng)用前景,但目前尚處在探索階段。多種DNA分子遺傳技術(shù)均存在一定的局限性,有待深入規(guī)范和完善。中藥分子鑒定試驗(yàn)中的問題①目的基因的真實(shí)性與DNA同源性②DNA分子標(biāo)識(shí)技術(shù)的穩(wěn)定性③分子