動物細胞融合與單克隆抗體課件 高二下學期生物人教版（2019）選擇性必修3

專題2動物細胞工程2.2.2動物細胞融合與單克隆抗體一個捐獻者的200-300毫升的血漿，如果合格，潛在的也只能治療2-3個患者，如何大量制備？方案一：傳統(tǒng)制備從血清中分離抗體該法制備抗體的缺陷：

產量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度低。多種效應B細胞動物體內多種抗體抗原

（一）抗體制備方案方案二：單克隆抗體制備一個B淋巴細胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細胞－－能無限增殖雜交瘤細胞大量培養(yǎng)雜交瘤細胞G.

Kohler

C.

Milstein

英國科學家米爾斯坦和德國科學家科勒于1975年設計和實踐了這個想法，并獲得成功。摘得1984年諾貝爾生理及醫(yī)學獎。（二）動物細胞融合1、基礎：細胞膜的流動性

2、

誘導融合的因素生物法：滅活的仙臺病毒誘導融合

利用滅活仙臺病毒是動物細胞融合所特有的?；瘜W法：聚乙二醇誘導融合物理法：電刺激誘導融合病毒顆粒黏

附細胞表面細胞膜連接細胞膜被

病毒顆粒穿通細胞融合、形成雜種細胞3、應用1.由于細胞雜交中染色體容易丟失，因此利用雜交細胞檢測特定染色體丟失與特定基因產物減少的對應關系，可以進行基因定位。2.克服遠緣雜交不親和的障礙3.利用雜交瘤技術，制備單克隆抗體4、植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合細胞融合原理細胞融合的方法誘導方法用途獲得雜種植株細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞的全能性去除細胞壁后誘導原生質體融合誘導細胞融合物理（離心、振蕩、電激）化學（聚乙二醇）物理、化學方法（同左）滅活的病毒主要用于制備單克隆抗體BB

、B瘤

、瘤瘤

（B、瘤）√體外培養(yǎng)（培養(yǎng)液提?。┬∈蟾骨粌扰囵B(yǎng)(腹水中提取)雜交瘤細胞特點：既能產生特異性抗體，又能大量增殖。1、制備過程（二）單克隆抗體的制備單克隆抗體：特異性強、靈敏度高2、深化探究：結合過程，請思考(1)制備單克隆抗體時，不直接用經過免疫的B淋巴細胞(漿細胞)獲得單克隆抗體的原因是什么?（漿細胞高度分化，不能增殖）(2)單克隆抗體制備過程中用到的技術手段有哪些？動物細胞培養(yǎng)、動物細胞融合(3)選擇雜交瘤細胞的兩步篩選的目的分別是:

第一步篩選的目的：

第二步篩選的目的：

獲得雜交瘤細胞。獲得能產生所需單一抗體的雜交瘤細胞。B

BB

B瘤

瘤瘤

瘤細胞融合后培養(yǎng)液中有:篩選雜種細胞已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩條DNA合成途徑，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增殖，將這兩種細胞在試管中混合，加PEG促融，在篩選培養(yǎng)基上篩選獲得雜種細胞。怎樣二次篩選出能分泌所需抗體的雜交瘤細胞？將雜交瘤細胞群稀釋，約每孔1個進行培養(yǎng)（克隆化培養(yǎng)）一段時間后，檢測每個孔內的抗體分泌抗體能跟抗原結合的細胞即為所需細胞（二）單克隆抗體的制備思考：新冠肺炎單克隆抗體制備流程3、活動探究B淋巴細胞小鼠注射新冠病毒骨髓瘤細胞多種雜交細胞篩選產生特異性抗體的雜交瘤細胞從小鼠腹水或培養(yǎng)液中提取抗新冠肺炎的單克隆抗體小鼠腹腔培養(yǎng)體外培養(yǎng)3、評價上個月，多名新冠肺炎重癥患者接受血漿抗體治療效果顯著的消息傳出后，“血漿治療”一時大熱。有人稱其為抗疫“新希望”，也有人質疑血漿治療存諸多風險，且來源是一大問題，只能算作一根“稻草”?！安灰欢⒅獫{，血細胞也是個‘寶’！”2月15日，中國工程院院士、治療型疫苗國家工程實驗室主任聞玉梅在接受《中國科學報》獨家專訪時表示，利用最新技術，將恢復期病人產生的特異性抗體的記憶B細胞制備成單克隆抗體，不僅不愁“數(shù)量”，安全性也相對更高。聞玉梅還表示，做單克隆抗體也很快，“我們一個半月左右就能做出來”。安全、快速、量產，單克隆抗體會比血漿治療更高效嗎？聞玉梅院士詳解“單克隆抗體”新思路4、單克隆抗體的應用:如何檢測新冠肺炎疑似患者？診斷試劑優(yōu)點：準確，高效，快速在吸水材料的牽引下，待測抗原在試條上向上走，首先與金標抗體結合成抗原抗體復合物，抗原抗體復合物上行到檢測線時，被測抗原的另一結合位點與包被在此處的單抗結合，形成兩個抗體結合一個抗原(雙抗體夾心)的金標復合物，因有金顆粒在此沉積，故檢測線顯紅色。未結合抗原的金標抗體上行到對照線時，