《煙草主要病毒核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)工作報(bào)告》

PAGEPAGE1煙草主要病毒核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)工作報(bào)告一、工作簡(jiǎn)況《煙草主要病毒核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)》項(xiàng)目為國(guó)家煙草專賣(mài)局2010年下達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)預(yù)研項(xiàng)目，屬標(biāo)準(zhǔn)類技術(shù)報(bào)告，由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院煙草研究所主持實(shí)施，本項(xiàng)目自2010年1月份國(guó)家煙草專賣(mài)局下達(dá)了項(xiàng)目任務(wù)后，積極自籌經(jīng)費(fèi)，在中國(guó)煙草資源平臺(tái)的支持下，依據(jù)目標(biāo)任務(wù)、起止時(shí)間按照技術(shù)路線、實(shí)施方案、預(yù)期成果開(kāi)展相關(guān)技術(shù)研究。項(xiàng)目從論證、立項(xiàng)、實(shí)施至總結(jié)計(jì)劃開(kāi)展2年研究，到2011年10月結(jié)束，項(xiàng)目按期完成。二、本項(xiàng)目的適用范圍1、適用范圍本研究為煙草主要病毒病原檢測(cè)技術(shù)，適用于煙草育苗和田間植株的現(xiàn)場(chǎng)監(jiān)測(cè)，預(yù)防病毒感染，切斷病毒傳播，保障我國(guó)煙草行業(yè)健康持續(xù)發(fā)展。2、相關(guān)領(lǐng)域的國(guó)內(nèi)外研究情況目前用于煙草病毒檢測(cè)的方法主要有生物學(xué)診斷、電子顯微鏡、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）以及分子生物學(xué)等方法：生物學(xué)方法主要是鑒別寄主反應(yīng)或指示植物等，這種僅僅以鑒別寄主反應(yīng)或指示植物為依據(jù)的方法,雖曾廣泛運(yùn)用,卻由于其檢測(cè)速度慢、受環(huán)境和季節(jié)影響較大等諸多因素限制而運(yùn)用較少。電子顯微鏡技術(shù)雖然可以直接觀察到病毒粒子的存在，但其操作復(fù)雜、耗費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)；酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）雖具簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn),但靈敏度較差,且存在非特異性反應(yīng)，在PVY尚未引發(fā)感染或感染的極早期很難用抗體法檢測(cè)出來(lái)；上述三種方法均不能快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確地檢測(cè)煙草普通花葉病毒。近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的以分子生物學(xué)技術(shù)為基礎(chǔ)的病毒檢測(cè)方法主要有RT-PCR法以及PCR微量板雜交等檢測(cè)方法，克服了上述三種方法的缺點(diǎn)，在實(shí)驗(yàn)室條件下實(shí)現(xiàn)了煙草普通花葉病毒的相對(duì)快速、準(zhǔn)確檢測(cè)。由于常規(guī)的PCR檢測(cè)需要昂貴的PCR儀，凝膠電泳和成像系統(tǒng)，使得RT-PCR檢測(cè)法難以用于現(xiàn)場(chǎng)的快速檢測(cè)，這大大限制了RT-PCR檢測(cè)方法在生產(chǎn)中的推廣應(yīng)用。進(jìn)行煙草主要病毒病早期檢測(cè)并采取預(yù)防措施是煙草生產(chǎn)中降低煙草病毒病流行風(fēng)險(xiǎn)、減少發(fā)病造成巨額經(jīng)濟(jì)損失的有效手段，所以建立簡(jiǎn)單、快速、高靈敏的檢查方法，并開(kāi)發(fā)適于現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)用的煙草主要病毒檢測(cè)方法就顯得極為重要。三、項(xiàng)目的主要研究成果（1）提供詳細(xì)的技術(shù)研究報(bào)告，可形成煙草TMV、PVY病毒病檢測(cè)的技術(shù)規(guī)范或標(biāo)準(zhǔn)。（2）發(fā)表SCI論文一篇。YanhuaLiu，ZhideWang，YumeiQian，etal“Rapiddetectionoftobaccomosaicvirususingthereversetranscriptionloop-mediatedisothermalamplificationmethod”[J]，ArchVirol(2010)155:1681–1685。（3）申請(qǐng)發(fā)明專利兩項(xiàng)。煙草普通花葉病環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法，申請(qǐng)?zhí)枺?009102299106；一種用于檢測(cè)馬鈴薯Y病毒的試劑盒及檢測(cè)方法，申請(qǐng)?zhí)枺?011100474061。四、項(xiàng)目預(yù)期可產(chǎn)生的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)效益由國(guó)家煙草專賣(mài)局牽頭，將本研究成果盡快形成技術(shù)規(guī)范或標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，為漂浮育苗苗期檢疫以及栽培土壤環(huán)境的監(jiān)測(cè)，預(yù)防病毒感染，切斷病毒傳播，保障我國(guó)煙草生產(chǎn)的健康持續(xù)發(fā)展。1．社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益通過(guò)本研究提供煙草普通花葉病毒、馬鈴薯Y病毒環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法，簡(jiǎn)化檢測(cè)程序，比普通PCR檢測(cè)靈敏度高100倍，且不需要特殊、昂貴的實(shí)驗(yàn)儀器，一把熱水壺或普通金屬浴即可滿足實(shí)驗(yàn)要求，檢測(cè)的特異性強(qiáng)，實(shí)現(xiàn)了方便、快捷的田間、現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。為煙草生產(chǎn)中病毒病的檢測(cè)及防治提供科學(xué)依據(jù)。在國(guó)內(nèi)外同領(lǐng)域研究屬領(lǐng)先水平。2．在經(jīng)濟(jì)發(fā)展中的作用該研究成果預(yù)計(jì)在形成技術(shù)規(guī)范或標(biāo)準(zhǔn)后可快速、準(zhǔn)確地鑒定煙草普通花葉病、馬