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實(shí)驗(yàn)微專題一DNA的粗提取與鑒定一、實(shí)驗(yàn)原理1.提取DNA的原理利用DNA、RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異,提取DNA,去除其他成分。如:(1)DNA在酒精溶液中的溶解性:DNA不溶于酒精,但某些蛋白質(zhì)溶于酒精。(2)DNA在NaCl溶液中的溶解性:DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同,它能溶于2__mol/L的NaCl溶液。2.鑒定DNA的原理在一定溫度下,DNA遇二苯胺試劑會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)色。二、方法步驟1.稱取約30g洋蔥,切碎,然后放入研缽中,倒入10mL研磨液,充分研磨。2.去除濾液中的雜質(zhì)3.DNA的析出4.DNA的鑒定取兩支20mL的試管,各加入2mol/L的NaCl溶液5mL。將絲狀物或沉淀物溶于其中一支試管的NaCl溶液中,再向兩支試管中各加入4mL的二苯胺試劑。混合均勻后,將試管置于沸水中加熱5min。待試管冷卻后,比較兩支試管中溶液顏色的變化?!锓兴∠翫NA與二苯胺試劑反應(yīng),溶液呈現(xiàn)藍(lán)色三、操作提示1.以血液為實(shí)驗(yàn)材料時(shí),每100mL血液中需要加入3g檸檬酸鈉,防止血液凝固。2.加入酒精和用玻璃棒攪拌時(shí),動(dòng)作要輕緩,以免加劇DNA分子的斷裂,導(dǎo)致DNA分子不能形成絮狀沉淀。(1)充分研磨的目的是裂解細(xì)胞,釋放DNA。(2)在研磨液過濾獲得的上清液中加入體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液的目的是使DNA析出(填“溶解”或“析出”),依據(jù)的原理是DNA不溶于酒精溶液,但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精。(3)用玻璃棒攪拌時(shí)沿一個(gè)方向攪拌的目的是防止DNA斷裂。例1下表關(guān)于“DNA粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的表述,錯(cuò)誤的是()選項(xiàng)試劑操作作用A研磨液與生物材料混合提取溶解DNAB2(mol·L-1)NaCl溶液與提取出的DNA混合溶解DNAC預(yù)冷的酒精加入離心后的上清液中溶解DNAD二苯胺試劑加入溶解有DNA的NaCl溶液中鑒定DNA答案C解析DNA不溶于酒精,但是細(xì)胞中的某些蛋白質(zhì)溶于酒精,利用這一原理可以將蛋白質(zhì)和DNA進(jìn)一步分離,C錯(cuò)誤。例2下列有關(guān)“DNA的粗提取與鑒定”實(shí)驗(yàn)的敘述,正確的是()A.新鮮豬血、菜花等動(dòng)植物材料均可用于DNA的粗提取B.植物材料需先研磨破碎細(xì)胞C.DNA只能溶于2mol/L的NaCl溶液D.溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺試劑后顏色呈紫色答案B解析豬是哺乳動(dòng)物,其成熟紅細(xì)胞內(nèi)沒有細(xì)胞核,所以豬血不能用于DNA的粗提取,A錯(cuò)誤;植物細(xì)胞有細(xì)胞壁,因此選用植物細(xì)胞提取DNA時(shí),需先研磨破碎細(xì)胞,B正確;DNA在不同濃度的NaCl溶液中溶解度不同,在2mol/L的NaCl溶液中溶解度高,C錯(cuò)誤;溶有DNA的NaCl溶液中加入二苯胺試劑,沸水浴加熱后冷卻,顏色應(yīng)呈現(xiàn)藍(lán)色,D錯(cuò)誤。DNA的粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)成功關(guān)鍵點(diǎn)(1)本實(shí)驗(yàn)不能用哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞作實(shí)驗(yàn)材料,原因是哺乳動(dòng)物成熟的紅細(xì)胞無細(xì)胞核(無DNA),可選用雞血細(xì)胞作材料。(2)二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用,否則會(huì)影響鑒定的效果。(3)提取植物細(xì)胞的DNA,在研
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